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Bacillus pumilus
1.3.1 Biología
Bacillus pumilus fue descrita por primera vez por Meyer y Gottheil en 1901. Es
conocida también por los nombres de Bacillus aminoglucosidicus o Bacillus
mesentericus. Taxonómicamente pertenece al dominio Bacteria, filo
Firmicutes, clase Bacilli, orden Bacillales, familia Bacillaceae, género Bacillus
(Skerman et al. 1989). Se considera como una bacteria ubicua en la naturaleza,
asociada a animales (Shehata et al. 1983; Johnson et al. 2006; Coorevits et al.
2008; Hill et al. 2009; Porwal et al. 2009), a plantas y restos vegetales (Cottyn
et al. 2001; Choudhary and Johri 2009; Asraful Islam et al. 2010),
específicamente documentada como endofítica en cultivos in vitro (Thomas
2004) y plantas como el algodón y maíz (McInroy and Kloepper 1995), cítricos
(Araujo et al. 2002), y epifita en arroz (Cao et al. 2001). Es comúnmente aislada
de una gran variedad de fuentes ambientales: suelo (Meyers et al. 1991;
Garbeva et al. 2003); mar y sedimentos marinos (Siefert et al. 2000; Banerjee
et al. 2007; Inbakandan et al. 2010); alimentos fermentados (Ouoba et al.
2004; From et al. 2007; Meerak et al. 2008); superficies ambientales (Pirttijarvi
et al. 1996; Silva et al. 2006; Porwal et al. 2009); además en sitios poco
comunes para el aislamiento de microorganismos como en el interior de
Introducción 23 basalto del desierto de Sonora (Benardini et al. 2003) o en una
aeronave espacial (Kempf et al. 2005). Es una bacteria Gram-positiva,
esporulante, de forma bacilar, aerobia o anaerobia facultativa, con bajo
contenido en Guaninas y Citocinas en su genoma (aproximadamente 41%). Se
la considera una especie mesófila (Coorevits et al. 2008), aunque también
existen cepas que pueden ser termófilas y alcalófilas (Moallic et al. 2006).
Crece como una colonia lisa que se torna amarilla mientras aumenta el tiempo
de incubación. Es una especie móvil (posee flagelo), β- hemolítica en agar
sangre, catalasa positiva, tolerante a las sales y susceptible a la penicilina (Tena
et al. 2007; Porwal et al. 2009). B. pumilus tiene propiedades tóxicas, efectos
citopáticos en células Vero, actividad hemolítica, producción de lectinasa y
actividad proteolítica en caseína (Hoult and Tuxford 1991). Es considerada una
bacteria no patógena para humanos, pero debido a su producción de
hemolisinas se la considera una bacteria patógena oportunista. La infección
humana por B. pumilus es excepcional (Porwal et al. 2009). From et al. (2007)
la relaciona con incidentes de contaminación alimentaria debido a la
producción de un complejo de lipoproteínas conocidas como pumilacidinas
previamente encontradas en otros Bacillus spp. causantes de contaminación
alimentaria. Ecológicamente, B. pumilus, al igual que otras bacterias de su
género, mantiene relación endofítica con ciertas plantas, favoreciendo el
crecimiento y desarrollo, y dando protección contra otros organismos del
suelos que causan enfermedades, como hogos del género Fusarium
(Benhamou et al. 1996) y Rhizoctonia (Cottyn et al. 2009). B. pumilus al ser una
especie esporulante, puede permanecer en estado de inactividad durante
largos períodos de tiempo cuando las condiciones 24 ambientales son
desfavorables y luego volver a germinan y a formar una célula vegetativa
(Nicholson et al. 2000). Sus esporas son resistentes al calor, desecación,
radiación UV, radiación γ, H2O2 y a la escasez de nutrientes. Son más
resistentes que otras bacterias de su género, pudiendo sobrevivir incluso a las
prácticas de esterilización estándar (Gioia et al. 2007). Actualmente, se conoce
el genoma completo de la cepa B. pumilus SAFR032 (No. de acceso al GenBank:
NC_009848), las secuencias del genoma de B. pumilus ATCC 7061 (No. de
acceso al GenBank: NZ_ABRX00000000), y las secuencias completas de tres
plásmidos: B. pumilus plásmido pPZZ84 (No. de acceso al GenBank: NC_
013534), B. pumilus ATCC 12140 plásmido pPL10 (No. de acceso al GenBank:
NC_001858) y B. pumilus ATCC 7065 plásmido pPL7065 (No. de acceso al
GenBank: NC_004932) . Esta información es una potente herramienta para la
caracterización molecular de otras cepas.
http://repositorio.educacionsuperior.gob.ec/bitstream/28000/291/
1/T-SENESCYT-0061.pdf
Bacillus subtilis
División: Firmicutes Familia: Bacilliaceae Género: Bacillus Especie: Bacillus subtilis Es una bacteria
Gram positiva, produce endospora las que son termorresistentes y también resiste factores físicos
perjudiciales como la desecación la radiación los ácidos y los desinfectantes químicos, produce
enzimas hidrofilicas extracelulares que descomponen polisacáridos, ácidos nucleicos permitiendo
que el organismo emplee estos productos como fuente de carbono y electrones, producen
antibióticos como la bacitricina,polimixina,gramicidina y circulina,fermentan la caseína y el almidón,
vive dentro de los limites de 55 a 70ºC. Es un gran controlador biológico, Bacillus subtilis promueve
el desarrollo de las plantas y previene las enfermedades del suelo causadas por Sclerotium rolfsii,
Fusarium spp., Verticillium spp, Sclerotinia sclerotiorum, Phytophthora capsici, Pythium spp, y el
nematodo nodulador de raíces (Meloidogyne spp) y Rhizoctonia solani, agente causal de la
enfermedad denominada “mal del tallito” del algodonero. (Calderón et al, .2002).
MORFOLOGIA
Respecto a su morfologia macroscópica; sus colonias
presentan las siguientes características:
Tamaño:
pequeñas
–
medianas
Superficie:
secas
Cromogenesis:
marrón o verde
Transparencia:
opaca
Forma:
irregular
Borde:
onduladoCuando se cultivan en caldo tienen una película
cohrente.
https://www.javeriana.edu.co/biblos/
tesis/ciencias/tesis404.pdf
7.3 Microorganismos biológicos efectivos (MBE) Para el biofertilizante MBE en Agar Nutritivo se
observaron dos tipos de colonias de apariencia ramificada características de algunas especies
pertenecientes al género Bacillus. 7.3.1 Macroscópicamente: C2 Colonias de 2 a 4 mm de diámetro,
irregulares de consistencia cremosa. Presentan color beige oscuro y con producción de
pigmentación rosado claro hacia el centro de la colonia (Figura 5). Figura. 5 Fotografía de colonias
de la cepa C 2 7.3.2 Microscópicamente: C 2 Se observan bacilos Gram positivos, de 1 µm de ancho
por 1.5 a 5 µm de largo, se presentaron esporas esféricas que se sitúan en la parte terminal del
esporangio y le dan un aspecto de raqueta. (figura. 6) Figura 6. Microfotografía de la cepa C2. 1000X
7.3.3 Macroscópicamente: C3 En Agar Nutritivo se observan Colonias 2 a 4 mm de diámetro de
bordes irregulares, de consistencia gomosa. (Figura.7) 16 Figura 7. Colonias de la cepa C3 7.3.4
Microscopicamente C3: Se observan bacilos Gram positivos de 0.6 a 0.9 µm de diametro por 1.2 a 4
µm de largo en forma de cadena, esporas elipsoidal en posición central.(Figura.8). Figura 8.
Microfotografía de bacilos de la cepa C3. 1000X. 1
El grupo II, también conocido como grupo de Bacillus subtilis, esta formado por bacterias que
catabolizan un amplio rango de carbohidratos por las vías de EmbdenMeyerhof-Parnas (glicólisis) y
de pentosas fosfato. La mayoría de estas bacterias crecen en condiciones anaeróbicas por
respiración de nitratos a excepción de B. megaterium y B. pumilus, mientras que algunas como B.
cereus, B. licheniformis y B. thuringiensis fermentan azúcares en ausencia de un aceptor final de
electrones (Shariati et al., 1995). En lo que se refiere a B. subtilis, este fue considerado por mucho
tiempo como un microorganismo aerobio estricto, sin embargo fue hasta 1993 cuanto Priest dio a
conocer la habilidad de B. subtilis para crecer en condiciones anaeróbicas. Esta reportado que en
ausencia de oxígeno, B. subtilis puede crecer bajo respiración de nitratos o, en contados reportes,
por fermentación en medios ricos con glucosa y piruvato (Hoffmann et al 1995; Nakano et al., 1997;
Nakano y Zuber, 1998; Espinosa de los Monteros et al., 2001).
ampliamente utilizado en la industria alimenticia por ser considerado (por la FDA), como un
organismo seguro para su uso en alimentos (GRAS, generally regarded as safe; Zukowski, 1992,
Devine, 2000). Sin embargo, un factor limitante para su uso en la producción de proteínas
heterologas, es la síntesis y excreción de proteasa extracelulares en el medio de cultivo (Ye et al.,
1996; Stephenson et al., 1999). Hasta la fecha son ocho las proteasas que se han identificado en B.
subtilis, las cuales están clasificadas en dos grandes grupos: serinoproteasas y metaloproteasas
(Stephenson et al., 1999). La síntesis de estas proteasas extracelulares esta fuertemente regulada y
la inducción usualmente ocurre durante la etapa de transición de la fase de crecimiento exponencial
a la fase estacionaria (Stephenson et al., 1999). No obstante el desarrollo tecnológico en la biología
molecular ha permitido que varios grupos de investigación se dediquen al diseño y construcción de
nuevas cepas de B. subtilis deficientes en la producción de proteasas, las cuales se pueden utilizar
para su aplicación en nuevos procesos biotecnológicos (Ye et al., 1996)
http://www.ibt.unam.mx/alfredo/Clau
diaIbethHernandez.pdf
CONDICIONES NUTRICIONALES
Requerimientos nutritivos esenciales macroelementos (macronutrientes) -C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg,
oligoelementos) -Mn, Zn, Co, Mo, Ni, y Cu -son requeridos en cantidades traza frecuentemente
suministrado entre las impurezas del agua o los componentes del medio de cultivo •Requerimientos de
dióxido de carbono como única o principal fuente de carbono) Heterótrofos (emplean moléculas
y heterotróficos •fuente de energía química inorgánica •fuente de H/e- inorgánica •fuente orgánica de
carbono
sulfato Fuentes de nitrógeno • moléculas orgánicas • amonio • nitrato y nitrito a través de sus vías de
precursores) que la célula no puede sintetizar • deben ser suministrados por el ambiente en el que
crece la célula para que la célula sobreviva y se reproduzca Importancia práctica de los factores de
imagen
publicado por leidy marcela en 19:05 no hay comentarios:
CRECIMIENTO
Puede crecer anaeróbicamente por la respiración con el nitrato como aceptor terminal de electrones.
En ausencia de receptores de electrones externos, que crece por la fermentación. Identificación de los
nuclear de culturas enteras indicó que B. subtilis crece por la fermentación ácido-mixta butanodiol,
pero que no se produce formiato. Un as mutante que carece de la enzima piruvato deshidrogenasa
(PDH) La actividad fue incapaz de crecer en condiciones anaerobias y producidas casi ningún producto
de la fermentación. Estos resultados sugieren que la PDH está involucrado en la mayoría o todos los
Escherichia coli, que utiliza liasa formiato de piruvato. la respiración de nitrato se mostró previamente
que obligue al sistema de transducción de señal ResDE de dos componentes y un gen regulador
anaeróbica, FNR. También se requiere la nitrato reductasa respiratoria, codificada por el operón
narGHJI y MOAA, implicadas en la biosíntesis del cofactor molibdopterina de la nitrato reductasa. Las
mutaciones Resd resDE y se demostró que los afectan moderadamente fermentación, pero la actividad
de nitrato reductasa y FNR son prescindibles para el crecimiento fermentativo. La búsqueda de genes
implicados en la fermentación indicó que ftsH se requiere, y también se necesita en menor medida
para la respiración de nitrato. Estos resultados muestran que la respiración de nitratos y fermentación
Se diseño un medio de cultivo utilizando lactosuero como fuente carbonada y nitrogenada, y KCI,
MgCl2, MgSO4, CaCl2 y FeSO4 como base mineral (medio W). Se crecieron células de B. subtilis sobre
Hidrolisis de lactosueros
Resultados y Discusion
B. subtilis fue capaz de crecer en el medio disenado en base a lactosuero y produjo enzimas
Las exoproteasas producidas por B. subtilis hidrolizaron las proteínas lácteas. Se optimizo las
proteicos podrian ser utilizados para enriquecer alimentos, pero como la hidrolisis de proteínas
produce péptidos hidrofobicos que tienen sabor amargo, se recomienda detener la hidrolisis antes de
El lactosuero tiene una composición proteica que le permite, por su rico valor nutricional, ser utilizado
como material para enriquecer alimentos. La hidrolisis de sus proteínas nos permitiría obtener
proteínas son las responsables de las reacciones alérgicas desarrolladas por muchos niños, por lo
tanto la utilización de estos sueros hidrolizados podrian constituir la base para el diseño de alimentos
hipoalergenicos.
Es uno de los procariotas entiende mejor, en términos de biología molecular y biología celular. Su
receptividad excelente genética y el tamaño relativamente grande han proporcionado las poderosas
herramientas necesarias para investigar una bacteria de todos los aspectos posibles. Las recientes
las bacterias.
A través del tiempo Bacillus Subtilis se ha convertido en un microorganismo muy importante para
diferentes usos en el medio ambiente ya que este ayuda a la descomposición de residuos vegetales,
produciendo enzimas para la elaboración de productos químicos y a la vez deteriorando las plantas y
Para usos agrícolas es excelente en la fabricación de fertilizantes, evita enfermedades y además ayuda
al crecimiento de los cultivos evitando el control de plagas que puedan afectar a estas.
Bacillus subtilis
Clasificación científica
Reino:
Bacteria
Filo:
Firmicutes
Clase:
Bacilli
Orden:
Bacillales
Familia:
Bacillaceae
Género:
Bacillus
Especie:
B. subtilis
Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva, Catalasa-positiva, aerobio facultativo1 comúnmente
encontrada en el suelo. Miembro del Género Bacillus, B. subtilis tiene la habilidad para formar una
Patogénesis
B. subtilis no es considerado patógeno humano; sin embargo puede contaminar los alimentos, pero
raramente causa intoxicación alimenticia. Sus esporas pueden sobrevivir la calefacción extrema que a
estropeado.
Utilidad de B. subtilis
• Una variedad de B. subtilis antes conocido como Bacillus natto es usada en la producción comercial
• B. subtilis QST 713 (comercializado como QST 713 o Serenata) tiene una actividad fungicida natural,
• Las enzimas producidas por B. subtilis y B. licheniformis son usadas extensamente como aditivos en
detergentes de lavandería.
(PHA) a partir de desechos de malta como fuente de bajo costo para la producción de PHA.
extensamente adoptado como un organismo modelo para estudios de laboratorio, sobre todo de
como un organismo modelo de laboratorio B. subtilis a menudo es usado como el equivalente Gram
CARACTERISTICAS
• Esporulado: las esporas son centrales, forma elipsoide y al formarse en el interior de la célula dan
• Las reacciones serológicas no se usan en su identificación, ya que dan reacciones cruzadas con otros
géneros.
• Los antígenos de las esporas son termo resistentes al igual que las propias esporas.
bacillus subtilis provee un control efectivo de enfermedades causadas por hongos y bacterias. El
compuesto bioquímico presente en este producto combate los agentes patógenos por su modo de
CULTIVO A PROTEGER
Brócoli, cebolla, ajo, especias, flores, fresas cucurbitáceas, lechuga, manzana, pera, papa, tomate,
jitomates, chiles, uvas, zanahoria, caña de azúcar, palma aceitera, plátano entre otras.
ENFERMEDADES A CONTROLAR
Pudrición sureña, Sclerotium rolfsii, Mildew, Mancha purpúra, Roya de la hoja, Puccinia Porri,
Alternaria porri, Pudrición coranaria de la raíz, Peronospora destructor, Tizón bacteriano,, Antracnosis,
BENEFICIOS
• los organismos antagónicos crecen y se multiplican alrededor del área de la raíz de los cultivos, ellos
compiten con los patógenos que atacan las nuevas raíces emergentes y en consecuencia reducen el
riesgos de infestación
Patogénesis: B. subtilis no es considerado patógeno humano; sin embargo puede contaminar los
alimentos, pero raramente causa intoxicación alimenticia. Sus esporas pueden sobrevivir la calefacción
extrema que a menudo es usada para cocinar el alimento, y es responsable de causar la fibrosidad en
el pan estropeado.
GENERAL
Caracterizar a nivel fermentador parámetros cinéticos de crecimiento y de formación de productos
con Bacillus subtilis en condiciones aerobias y anaerobias utilizando como fuentes de carbono
glucosa, xilosa y celobiosa.
Bacillius sp;
Nombre científico de la bacteria:
Bacillus spp
Nombre(s) común(es):
Bacilos
Características microbiológicas:
Morfología microscópica y características de tinción
El genero Bacillus comprende grandes bacilos aerobios Gram positivos
que se organizan en cadenas. Son Bacilos de gran tamaño (4-10um),
son formadores de esporas, la mayoría no causa enfermedad y son
resistentes a condiciones desfavorables, en total existen 60 especies de
bacilos. La mayor parte de los miembros de este género es saprofita y
vive en la tierra, en el agua y aire, y en la vegetación. Algunos son
patógenos para los insectos. Estos microorganismos algunas veces
producen enfermedades en las personas inmunodeprimidas. La
presencia de esporas en los bacilos hace que este no tome mucho algún
colorante.
Se realizó la descripción de la morfología de las colonias de 43 cepas de Bacillus spp. (Tabla 2). Se
observa que una característica común en todas las colonias de Bacillus es su forma irregular y color
crema, la apariencia de los bordes de las colonias varía entre aserrada, lobulada, digitiforme y
ondulada; las elevaciones de la colonias suelen ser planas o acuminadas, en este último caso
presentan el centro más elevado en forma de anillo, la consistencia suele ser seca pero también se
presentan colonias cremosas y ligosas (Figura1). La gran mayoría presenta una superficie opaca, y
la consistencia y tamaño es variable. Wakita et al. (2007) reportan que las colonias de Bacillus
presentan la característica de formar un anillo concéntrico y borde irregular en el centro. Esto es lo
que se observó en muchas de las cepas aisladas. Los resultados de las pruebas bioquímicas se
muestran en la Tabla 3; el 84% de las cepas aisladas muestran un comportamiento que las
Se colocaron 5 µl de cada una de las cepas seleccionadas (a una concentración de 108 cel/ml) en
placas conteniendo agar TGE por duplicado, y se incubaron a 4ºC, 10ºC, 15ºC y 20ºC; se evaluó el
crecimiento de las cepas durante 15 días para determinar su capacidad adaptativa y se comparó con
el crecimiento de la bacteria en una placa control incubada a 28ºC. Se consideró como escala
máxima el logrado en la placa control. A partir de esto se clasificó el crecimiento de las cepas del 0
al 4. Crecimiento a pH bajo. Se colocaron 5 µl de cada una de las cepas seleccionadas (a una
concentración de 108 cel/ml) en placas conteniendo agar TGE con pH regulado a 4, 5.5 y 7.0. Las
pruebas se hicieron por duplicado. El pH 7 se utilizó como control. Las placas se incubaron a 28ºC
por 7 días, al cabo de ese tiempo se evaluó el crecimiento de las cepas para determinar la capacidad
adaptativa a suelos de pH bajo que se presentan en algunas zonas altoandinas. Se utilizó el mismo
sistema de evaluación que para la temperatura, basado en una escala del 0 al 4, siendo este último
el máximo crecimiento de colonia alcanzado por la placa control.