Vila Nova de Gaia - Junho de 2008

CONTAGEM DE CÉLULAS EM
CÂMARAS DE NEUBAUER

Relatório de Imunologia
 OBJECTIVO DO TRABALHO
 Efectuar a contagem do nº de células em
câmara de Neubauer.
Contagem de células em câmaras de
Neubauer
 Actualmente este métodos é utilizado como técnica
básica em muitos laboratórios de investigação,
para testar teses experimentalmente (por exemplo
testar um novo fármaco).
 Como material de estudo utilizou-se células THP1
(linha celular de monócitos humanos), sendo este um
conjunto de células que derivam de uma única
célula, tendo por isso as mesmas características.
 Contagem de células em câmaras de
Neubauer
 Existem dois tipos de linhas celulares:

 Primarias: dizem respeito ás células que se encontram

presentes no organismo;

 Secundárias: são obtidas por transformação das

células primárias. Essa transformação ocorre ao nível
do DNA, para que estas se tornem imortais.
Apresentam um tempo de vida superior ás primárias;
 Contagem de células em câmaras
de Neubauer
 Este método baseia-se no
preenchimento da
câmara com a suspensão
de células a contar.
Começa-se por
humedecer com água
destilada as duas
cavidades da câmara,
colocando de seguida a
lamela com uma suave
pressão, partindo da
extremidade, deslizando Nota: A formação de um “arco-íris”
entre a lâmina e a lamela indicam que
pela câmara. esta foi colocada correctamente
 Contagem de células em câmaras
de Neubauer
 De seguida, colocamos a
suspensão de células na ranhura
existente entre a superfície
inferior da lamela e a parte
central da câmara de contagem,
encostando a ponta da pipeta na
borda da lamela, preenchendo
cuidadosamente a câmara.
 O líquido deve preencher apenas
um dos lados da câmara e não
deve chegar aos canais de cada
lado da área de contagem. O
enchimento não deve ser em
demasia para não haver
agregados de células, nem por
defeito com o objectivo de não
ocorrer a formação de bolhas de
ar.
 Contagem de células em câmaras
de Neubauer
 Após o enchimento da câmara,
efectua-se a contagem das
células propriamente dita.
 A contagem das células deve
seguir um sentido específico,
com o objectivo de não haver
contagens repetidas.
 Utilizando o microscópio, é
possível contar o número de
células presentes em cada
quadrado e, assim, conhecer o
número de células por unidade
de volume
 Material
 Laminas  Microscópio óptico
 Lamelas  Agulha de dissecção
 Eppendorfes  Álcool a 70%
 Suporte de eppendorfs  Luvas
 Suporte de tubos de ensaio  Solução de lixívia 10%
 Pipetas de Pasteur de  Goble com solução de
Plástico Lixívia
 Micropipetas (de 20, 100
ou 200 e 1000µl)
 Pontas de micropipetas
 Câmaras de Neubauer
 Procedimento
 Inicialmente, efectuou-se uma preparação extemporânea da
suspensão de células THP1 em PBS1X 2%BSA. De seguida,
efectuaram-se 3 diluições da suspensão de células THP1, em
PBS1X 2%BSA: a primeira foi feita numa relação de 1:10, isto
é, diluíram-se 10µl de suspensão de THP1 em 90µl PBS1X
2%BSA.

 Após a primeira diluição, repetiu-se o mesmo processo duas

vezes. Entretanto, procedeu-se á preparação da câmara de
Neubauer, que consistiu em fixar a lamela á câmara, para
posterior enchimento da mesma. Estes enchimentos foram feitos
através de uma pipeta, em ambos os dois campos de visão da
câmara.
 RESULTADOS
Diluição 1.10 1:100 1:1000 Solução
Original Sem
Contagem do Diluição
nº d células
1ª Contagem 2 2 0 41
Quadrado 2ª Contagem 2 2 0 41
Superior 3ª Contagem 2 2 0 41

1ª Contagem 0 2 0 40
Quadrado 2ª Contagem 0 2 0 40
Inferior 3ª Contagem 0 2 0 40

Média (1:10) = 2+2+2+0+0+0 = 6/6 = 1

Média (1:100) = 2+2+2+2+2+2 = 12/6 = 2
Média (solução Original) =41+41+41+40+40+40 = 243/6 = 40.5
 RESULTADOS
1. Calculo da concentração de células na suspensão
original:

Nº de células x 10 x diluição

a)1 x 10 x 10 = 100 células/µl

b)2 x 10 x 100 = 2000 células/ µl
c)Não foi possível efectuar o cálculo para a diluição de
1000, porque não foram observadas nenhumas células.
 RESULTADOS
2.Cálculo do nº de células presentes na suspensão
original de células THP1:

100 (número de células na diluição 1:10) + 2000

(número de células na diluição 1:100) = 2100/2 =
1050células/µl

C = n /V <=> 1050 células/ µl = n/100 = 105.000

células
 Conclusão
 Este trabalho teve como finalidade, a contagem de
células vivas em várias diluições (1:10; 1:100;
1:1000).

 Na diluição de 1:10, foram observadas 100 células/

µl
 Na Diluição de 1:100 foram observadas 2000 células/
µl
 Na Diluição de 1:1000 foram observadas 0 células/ µl
 Conclusão

Podemos assim dizer que não era o esperado,

pois o resultado deveria de ser: uma diminuição de
células conforme vão aumentando as diluições,
neste nosso trabalho, o resultado foi de que na
diluição 1:10, o resultado foi de 100 células, e na
diluição 1:100 o resultado foi de 2000 células, ou
seja houve um aumento de células, só na diluição
1.100 é que o resultado foi o esperado, não
contendo alguma célula.
Contagem de células em câmaras de
Neubauer

Obrigado pela
Vossa Atenção
