Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
1
DETERMINACIÓN DE LA RESPUESTA RELATIVA TOTAL E INTENSIDAD
RELATIVA DE LA LÁMPARA
OBJETIVO
Conocer el espectrofotómetro de un solo haz y comprender su
funcionamiento y manejo.
Estudiar el espectrónic 20 Génesis o Baush and Lomb que se utiliza para
trabajos en la región del visible
FUNDAMENTO TEORICO
Un espectrofotómetro es un instrumento para medir la transmitancia o la
absorbancia de una muestra en función de la longitud de onda, también se pueden
realizar mediciones de una serie de muestras en una sola longitud de onda. Estos
instrumentos se pueden clasificar en galvanométricos o digitales, de simple o de
doble haz. Una clasificación alternativa se basa en la región espectral donde
funciona, así se puede hablar de espectrómetros del visible, del infrarrojo, etc.
Los componentes esenciales de un espectrofotómetro de un solo haz son:
a. Una fuente de energía radiante continua que cubre la región del espectro en la
cual opera el instrumento.
b. Un monocromador que es una parte del instrumento que aísla una banda
angosta de longitudes de onda de todo el espectro emitido por la fuente.
c. Un recipiente para muestra que debe ser transparente en la región de
longitudes de onda donde se está trabajando.
d. Un detector que es un transductor que convierte la energía radiante en una
señal eléctrica.
e. Un amplificador y un circuito asociado que traduce la señal eléctrica a la lectura
apropiada.
f. Un sistema de lectura de la medición que pone de manifiesto la magnitud de la
señal eléctrica en términos de absorbancia o transmitancia.
Cada uno de estos componentes del instrumento esta constituido por varios
elementos que aseguran su buen funcionamiento individual y que a su vez hacen
que haya acoplamiento apropiado con el resto de constituyentes del equipo.
2
hacia abajo y tapando bien para impedir que la luz difusa entre al detector (esto
se debe hacer siempre que se van a hacer lecturas).
3. Adicionar unos tres mL de agua destilada en la cubeta y limpiarla con papel
óptico.
4. Voltear el control de luz (derecha al frente) en sentido contrario al movimiento
de las manecillas del reloj hasta donde sea posible, sin forzarlo, esto disminuirá
la cantidad de luz que llega al fototubo.
5. Colocar la cubeta con agua dentro del soporte para muestras alineando la
marca de la cubeta con la del instrumento.
6. Ajustar la longitud de onda a 490 nm y voltear el control de luz en el sentido de
las manecillas del reloj hasta obtener una lectura de 60% de transmitancia.
7. Girar ahora el control de longitud de onda observando como varía la respuesta
con el cambio de longitud de onda. Determinar la longitud de onda para la cual
el instrumento tiene una respuesta mayor (máximo de lectura). Esto debe
suceder cerca de 510 nm.
8. Ajustar el 100% de transmitancia para la longitud de onda de mayor respuesta.
Ahora cambiando solamente la longitud de onda obtener los datos de
Respuesta Relativa Total del equipo. Estos datos son los correspondientes a
las lecturas de %T para cada longitud de onda.
9. Organizar los datos en la siguiente tabla:
(nm) R. R. F. R. R. T. I. R. L. IRL(100/IRLmáx)
350 90
375 98
400 100
425 98
450 91
475 81
500 68
512 61
525 63
550 37
575 21
600 10
612 7
625 5
3
4
ESPECTRO VISIBLE
1. Colocar en el compartimiento de muestra, una cubeta que contenga un trozo
de tiza blanca cortada diagonalmente y ubicado de tal forma que la radiación
caiga sobre la zona inclinada para observar el color de luz que está llegando a
la muestra a medida que se cambia la longitud de onda.
2. Observar y anotar el color del haz de luz desde los 350 hasta los 650 nm, es
importante que haya suficiente luz para poder observar este fenómeno, pero no
se debe permitir que la aguja se salga de la escala.
3. Ajustar la longitud de onda a 600 nm, observar la variación del color a través
de la banda de luz (ver la pregunta sobre el ancho de banda).
4. Ajustar la longitud de onda a 500 nm. Rotar el control de luz y anotar el cambio
de intensidad de la misma. La cantidad de luz que pasa por la muestra está
regulada por una pieza metálica en forma de V que deja pasar más o menos
radiación cuando se mueve el control de luz
PREGUNTAS
a. Diga que partes del instrumento causan las diferencias observadas en las
gráficas.
b. Para cuál color produce el instrumento una respuesta mayor?
c. Qué color es emitido más fuertemente por la lámpara de tungsteno?
d. Cree usted que todos los instrumentos del visible tienen respuestas idénticas?
Explique.
e. Qué es el ancho de banda (en este equipo su valor es 20 nm)
5
f. Cuáles son los colores del visible y por qué cree usted que el equipo no los
diferencia perfectamente uno de otro?
g. Describa y diga como funcionan cada uno de los siguientes componentes del
espectrofotómetro del visible:
1. la lámpara de tungsteno
2. la rejilla y el prisma de dispersión
3. el fototubo
4. CONSULTA. En qué consiste un detector de arreglo de diodos (es otro
detector que se usa en espectroscopía del visible) y como funciona éste.
6
OBTENCIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN DE UNA SUSTANCIA
OBJETIVOS
Obtener el espectro de absorción de una solución de nitrato de cromo (III)
Obtener el espectro de absorción de una solución de colorante rojo de 30
ppm
MARCO TEORICO
Un haz de luz es un flujo de partículas de energía llamadas fotones. Cada una de
estas partículas posee una energía característica que está relacionada con la
frecuencia de la luz mediante la ecuación
E = h
donde: h constante de Plank
Frecuencia.
La luz de una cierta frecuencia (o longitud de onda) está asociada con los fotones,
cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía.
Cuando se irradian moléculas con muchas longitudes de onda, esas moléculas
solo absorberán aquellas radiaciones de longitudes de onda que corresponden a
los fotones de energía apropiados para permitir sus transiciones de energía
molecular, las otras longitudes de onda sencillamente pasan a través de la
moléculas sin ser absorbidas y entonces llegan al detector unas radiaciones
disminuidas (las que fueron absorbidas) y otras radiaciones completas (las no
absorbidas).
Al graficar absorbancia (o transmitancia) en función de la longitud de onda, para
una determinada sustancia, se obtiene su espectro de absorción. Dicho espectro
es característico, en la mayoría de los casos, de cada sustancia y por esto es un
buen método auxiliar en la identificación de sustancias. Los espectros también son
importantes para seleccionar la longitud de onda adecuada para análisis
cuantitativo.
PROCEDIMIENTO
C. Preparar 25 mL de una polución 0.020 M de Cr (NO 3 )3, a partir de una solución
patrón de Cr ( NO3 )3 0.0500 M.
D. Llene hasta las dos terceras partes, una celda porta muestras con agua
destilada.
E. Llene hasta las dos terceras partes, otra celda porta muestras con solución
0.02 M de nitrato de cromo (III).
F. Llene hasta las dos terceras partes, otra celda porta muestras con solución de
30 ppm del colorante rojo (se da preparado)
7
G. Identifique las partes del colorímetro.
H. Infórmese de qué función tiene cada uno de los mandos del teclado
I. Encender el instrumento.
J. Llevar el selector de longitud de onda a 350 nm y con la celda con agua
destilada en el portamuestras llevar la absorbancia a cero (%T=100) esto se
llama cuadrar el cero de absorbancia.
K. A esta misma longitud de onda cambie la celda del blanco por la celda que
contiene la solución de cromo (III) y leer la absorbancia y la transmitancia,
anotar estos datos en la tabla de datos.
L. A esta misma longitud de onda cambiar la celda de la solución de cromo por la
celda que contiene la solución de colorante rojo de 30 ppm y leer la
absorbancia y la transmitancia, anotar estos datos en la tabla de datos.
M. Cambiar la longitud de onda de 10 en 10 nm, repetir las operaciones de los
numerales 7 y 8 hasta los 600 nm.
N. Sacar la celda, apagar y dejar el instrumento en orden.
O. Desocupar las celdas y lavarlas con agua.
TABLA DE DATOS
(nm) Cr +3
Colorante (nm) Cr+3 Colorante
rojo rojo
%T A %T A %T A %T A
350 520
360 530
370 540
380 550
390 560
400 570
410 580
420 590
430 600
440 610
450 620
460 630
470 640
480
490
500
510
8
TRATAMIENTO DE LOS DATOS
1. Con los datos obtenidos para la solución de nitrato de cromo. Hacer un gráfico
de porcentaje de transmitancia Vs longitud de onda ( = nm) y en el mismo
papel haga un gráfico de absorbancia Vs longitud de onda (espectro de
absorción)
2. En otra hoja de papel grafique absorbancia Vs longitud de onda para el
colorante.
PREGUNTAS
a. Analizar las gráficas obtenidas teniendo en cuenta:
1. La sustancia absorbe igualmente todas las s? Justifique.
2. Como es la relación entre el porcentaje de transmitancia y la absorbancia?
Justifique
b. Sobre el espectro de absorción de cromo (III) bosquejar los espectros que se
obtendrían si se hubieran analizado soluciones de mayor y de menor
concentración que la trabajada en esta práctica.
c. Comparar los espectros de absorción del cromo y del colorante rojo. A que se
debe la diferencia entre estos dos espectros?
RESIDUOS
Los residuos se recogen en botellas de vidrio ubicadas en el puesto #78 rotulada
como: residuos determinación del espectro de absorción del Cr +3 y Ley de Beer.
Composición: Cr+3, NO3-, H3O+, los cuales posteriormente se someten a proceso de
precipitación (Ver instructivo ITR-·3514-08- ), los cuales serán reutilizados.
Los residuos del colorante se eliminan por el drenaje pues son colorantes
vegetales no tóxicos.
9
CONCENTRACIÓN Y CALIBRACIÓN: LEY DE BEER
OBJETIVOS
Desarrollar conocimientos acerca de la relación entre la cantidad de
radiación absorbida por soluciones y la concentración de la sustancia
absorbente en dichas soluciones.
Destacar la importancia de una curva de calibración.
Seleccionar la longitud de onda mas apropiada para analizar la sustancia
absorbente (nitrato de cromo) empleando la ley de Beer.
Calcular la concentración de cromo en una muestra problema.
MARCO TEÓRICO
La luz puede considerarse como ondas energéticas que viajan a través del
espacio, constituyéndose en paquetes energéticos que son absorbidos por las
sustancias si ellos tienen la energía necesaria para producir cambios en el nivel
energético de los electrones dentro de los átomos que forman esas sustancias.
La absorción de la luz por una sustancia en solución se puede describir
matemáticamente por la ley de Beer-Lambert:
A= bc
A = absorbancia a una longitud de onda dada de luz,
= absortividad molar, única para cada molécula y varía con la longitud de
onda,
b = longitud de la trayectoria de la luz a través de la solución
c = concentración de la solución en moles por litro.
Para medidas de absorbancia de una determinada sustancia a una longitud de
onda dada, y b son constantes, así que habrá una relación directa entre la
absorbancia de una solución y la concentración de la sustancia absorbente en ella.
Si se mide la absorbancia en función de la concentración de moléculas
absorbentes en soluciones patrón, se puede construir una gráfica de la ley de
Beer, llamada también curva de calibración o curva de trabajo.
En este tipo de gráfica se puede determinar la concentración de una muestra
desconocida midiendo la absorbancia de la muestra a la mismas condiciones que
las soluciones patrón e interpolando la concentración correspondiente en la curva
de calibración.
En esta práctica se seleccionará, entre varias longitudes de onda del espectro de
absorción del nitrato de cromo (III), la longitud de onda donde mejor se cumple la
ley de Beer y usando la curva de calibración a esa longitud de onda se
10
determinará, por interpolación, la concentración de una solución desconocida de
cromo (III).
PROCEDIMIENTO
1. A partir de una solución de nitrato de cromo (III) 0.0500 M (solución madre),
preparar por dilución 25 mL de solución de cada una de las siguientes
concentraciones 0.01, 0.02, 0.03, 0.04 M, y un solo grupo prepara por dilución
50 mL de una solución de 0.0080 M, y a partir de una patrón 0.500 M un solo
grupo prepara por dilución 50 mL de una solución 0.0600 M (estas son las
soluciones patrón),estas soluciones son para los estudiantes de los cursos de
Instrumental I (Química y Tecnología Química).
2. Para los cursos de servicio Química Farmacéutica, Ingeniería Química,
Ingeniería de Alimentos etc. solo preparan los estándares 0.01,0.02, 0.03, 0.04
M a partir de la patrón de 0.0500 M,
3. De la gráfica de absorbancia Vs longitud de onda (espectro de absorción) para
el nitrato de cromo (III), que se obtuvo en la experiencia anterior, seleccionar
cinco longitudes de onda () para estudiar en cada una de ellas el
cumplimiento de la ley de Beer y escoger entre ellas la mejor para hacer
análisis cuantitativo. Las longitudes de de onda son:
primera: un mínimo de la curva
segunda y tercera: Los máximos de la curva
cuarta: una donde la curva tenga pendiente positiva y
quinta: una donde la curva tenga pendiente negativa.
11
C (M) 0.06 0.05 0.04 0.03 0.02 0.01 0.008 Muestra
#:
A %T A %T A %T A %T A %T A %T A %T A %T
(nm)
RESIDUOS
Se recogen los residuos en botellas de vidrio ubicadas en el puesto # 78 rotulada
como: residuos Determinación del espectro de absorción del Cr +3 y Ley de Beer.
Composición: Cr+3, NO3-, H3O+, los cuales posteriormente se someten a proceso de
precipitación (Ver instructivo ITR-·3514-08- y serán reutilizados.
1. En una sola hoja de papel, graficar %T Vs concentración para cada una de las
cinco longitudes de onda seleccionadas en el numeral 3.
2. En una sola hoja de papel graficar (100 - %T) Vs logaritmo de Concentración
para cada una de las cinco longitudes de onda seleccionadas en el numeral 3
(del procedimiento).
3. En una misma hoja graficar absorbancia Vs concentración (grafica de Beer)
para cada una de las longitudes de onda seleccionadas en el numeral 3 (del
procedimiento).
4. En la grafica mas apropiada de la ley de Beer (pendiente mayor y mejor
linealidad) hallar, por interpolación, la concentración molar de nitrato de cromo
(III) de la solución problema.
12
PREGUNTAS
a. Para cada una de las gráficas de la ley de Beer (A Vs C) explicar para que
concentraciones se cumple la ley.
b. Para cual de las cinco longitudes de onda tiene mayor absortividad molar el
nitrato de cromo (III)? Justificar la respuesta. En base A = b c
c. De acuerdo con la escala de lectura (en este equipo es de 0.1%) del porcentaje
de transmitancia, cuál es el error relativo para la concentración de la solución
problema?
C/C = -0.433 % T/ %T( 2-LOG%T)
d. Si se quieren analizar soluciones 0.015 y 0.07 M, cuáles son las longitudes de
onda más apropiadas? Dar la respuesta con base en la adhesión a la ley de
Beer y en el error inherente a la concentración de la solución
13
DETERMINACIÓN DE COLORANTES EN BEBIDAS
OBJETIVO
Identificar y cuantificar colorantes en bebidas gaseosas.
MARCO TEORICO
Las industrias de medicamentos y alimentos les agregan a estos algunos aditivos
para hacerlos mas agradables a la vista y hasta al gusto. El contenido de dichos
aditivos tiene unos límites que deben ser controlados tanto por el fabricante como
por las entidades autorizadas para hacer control de tales productos. Entre los
aditivos que se agregan a las gaseosas están los colorantes.
Los colorantes son sustancias que tienen grupos llamados cromóforos que
absorben la luz visible. Esta absorción no es igual para todas las longitudes de
onda del visible, lo cual permite, en una muestra problema, identificar por su
espectro de absorción el colorante que contiene el producto que se está
analizando, también se puede cuantificar dicho colorante utilizando la ley de Beer
si su absorbancia es directamente proporcional a su concentración.
La presente práctica permite identificar y cuantificar el contenido de un colorante
en una gaseosa utilizando los conceptos adquiridos en lo que se refiere al
espectro de absorción de una sustancia y a la utilización de la ley de Beer como
método cuantitativo.
PROCEDIMIENTO
Obtención de los espectros, identificación del colorante y selección de la
longitud de onda óptima
14
6. Empleando la longitud de onda seleccionada en el numeral 5 medir la
absorbancia de los patrones y de la muestra problema cuadrando el cero de
absorbancia con el blanco de reactivos, que en este caso es agua, antes de
hacer las lecturas.
Nota: si la absorbancia de la muestra problema está por debajo o por encima
de las absorbancias de los patrones, se deben hacer las correcciones
necesarias para que este dato quede dentro de la curva de calibración.
7. Finalmente desocupar y dejar limpio todo el equipo utilizado, apagar,
desconectar y dejar en orden el espectrofotómetro.
RESIDUOS
No se recogen residuos, puesto que los colorantes que se usan son alimenticios,
se botan por el desagüe.
PREGUNTAS
15
DETERMINACIÓN DE HIERRO CON ORTOFENANTROLINA
OBJETIVO
Acomplejar el hierro de una muestra problema con 1,10 - fenantrolina y
cuantificarlo por espectrofotometría en la región del visible.
MARCO TEÓRICO
Para fines analíticos, el tipo más importante de absorción por especies inorgánicas
es la absorción por transferencia de carga.
Una especie que no absorbe radiación visible puede convertirse en otra que si
absorba sometiéndola a una reacción de formación de complejos que son
compuestos de alta absorbancia y que por tanto permiten analizar trazas de iones
metálicos en muestras.
Para el análisis de iones metálicos las formación de complejos tiene la ventaja de
que el agente acomplejante es generalmente selectivo y si varios iones forman
complejos con el mismo agente acomplejante, cada ión se puede analizar
aprovechando las características espectrales del complejo de interés.
La reacción entre el Fe(II) y la 1,10 - fenantrolina para formar un complejo de color
rojo es un método apropiado para determinar el hierro. La absortividad molar del
complejo C12H8N23Fe2+, es 11000 a 510 nm. La intensidad del color es
dependiente del pH en el rango de 3 a 5 El complejo es muy estable y su
absorbancia es proporcional a la concentración, lo que indica que cumple la ley de
Beer.
Como el hierro debe estar en estado de oxidación +2 se debe agregar a la
muestra un agente reductor antes del acomplejante. Se usa clorhidrato de
hidroxilamina, la cual con el hierro (III) tiene la siguiente reacción:
2Fe3+ + 2NH2OH + 2OH- 2Fe2+ + N2 + 4H2O
Para tener el pH entre 3 y 5 se emplea acetato de sodio o amoníaco.
PROCEDIMIENTO
Notas:
A continuación se presentan tres procedimientos diferentes.
En cada sesión se realiza solo un análisis.
Para todos los procedimientos se deben preparar las siguientes soluciones:
Disolver 0.1 g de 1.10 - fenantrolina monohidratada en 100 mL de agua
destilada., esta solución queda al 0.1 % de ortofenantrolina
Disolver 10 g de clorhidrato de hidroxilamina en 100 mL de agua
destilada. Esta solución queda al 10% de clorhidrato de hidroxilamina
16
Disolver 10 g de acetato de sodio en 100 mL de agua destilada, esta
solución queda al 10% de acetato de sodio.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Pesar 0.1 g de fertilizante (Verde o gris) en un beaker de 100 mL, agregar agua,
aproximadamente 40 mL, y 3 mL de ácido clorhídrico concentrado, calentar
durante 15 minutos con el recipiente tapado, dejar enfriar, transferir a un balón
volumétrico de 250 mL y hacer lavados con agua destilada fría hasta
aproximadamente 80 mL, completar a volumen con agua destilada, de esta
solución pipetear 2.0 mL si el fertilizante es verde y (10 mL si el fertilizante es
blanco –grisáceo ), transferirlos a un balón volumétrico de 50 mL, agregarle 0.5 mL
de clorhidrato de Hidroxilamina al 10%, 4.0 mL de acetato de sodio 2.0 M y 5.0 mL
de ortofenantrolina al 0.1% aforar con agua destilada, homogenizar y esperar
durante 10 minutos para realizar su lectura
17
ANÁLISIS
Con la solución preparada con 10 mL de la solución madre (la de 2 ppm) correr el
espectro del complejo hierro-ortofenantrolina entre 400 y 600 nm haciendo
lecturas cada 10 nm teniendo en cuenta ajustar el cero de absorbancia con el
blanco preparado.
Con base en el espectro anterior seleccionar la longitud de onda de la máxima
absorbancia (alrededor de 510 nm), a esta longitud de onda cuadrar el cero de
absorbancia con el blanco de reactivos, leer la absorbancia de cada solución
patrón y de la muestra problema (fertilizante), la absorbancia del fertilizante debe
estar dentro del rango de los estándares, en caso contrario, si la muestra está muy
concentrada hacer la respectiva dilución, o preparar otro estándar si está muy
diluida.
RESIDUOS
Los residuos se recogen en garrafones de plástico ubicados en el puesto # 73
rotulados como: Residuos para neutralizar, composición: medicamento, complejos
de Fe+2 ,acetato de sodio, clorhidrato de hidroxilamina, H 3 O+ , los cuales se
neutralizan (Ver instructivo ITR-3514-08-04) y se eliminan por el desagüe.
PREGUNTAS
a. Qué es un complejo?
b. Por qué se llaman complejos por transferencia de carga?
c. Qué sucede si no se adiciona la hidroxilamina antes de agregar la 1,10-
fenantrolina?
d. Qué condiciones debe tener el agua que se utiliza para preparar las soluciones
en este análisis?
e. Cuál es el mínimo volumen de solución de 1,10-fenantrolina de concentración
0.5 g/L, necesario para reaccionar con 0.25 mg de hierro (II)?
f. Si la solución de su muestra problema tiene una absorbancia por encima o por
debajo de las absorbancias de las soluciones patrón que efecto puede tener
esto en el resultado del análisis y como se soluciona este problema?
18
PROCEDIMIENTO II : ANÁLISIS DE HIERRO CON ORTOFENANTROLINA EN
UN MEDICAMENTO
PREPARACION DE LA MUESTRA
Triturar diez pastillas de sulfato ferroso (FeSO 4). Pesar entre 0.2 y 0.4 g de
muestra en un beaker de 100 mL seco agregar 40 mL de ácido sulfúrico 2.0 M,
colocarlo en el ultrasonido durante 30 minutos, dejar enfriar, filtrar en un balón
volumétrico de 500 mL y hacer lavados con agua destilada fría hasta
aproximadamente 300 mL, aforar con agua destilada.
De la solución anterior tomar 2 mL en un balón volumétrico de 50 mL, agregar en
el orden que se da: 0.5 mL de solución de clorhidrato de hidroxilamina, 4 mL de
acetato de sodio y 5 mL de ortofenantrolina, aforar con agua, agitar y dejar en
reposo durante 10 minutos antes de hacer el análisis.
ANÁLISIS
Con la solución preparada con 10 mL de solución madre (patrón de 2 ppm) correr
el espectro del complejo hierro-ortofenantrolina entre 400 y 600 nm haciendo
lecturas cada 10 nm. -teniendo en cuenta de cuadrar el cero de Absorbancia con
el blanco preparado.
Con base en el espectro anterior seleccionar la de la máxima absorbancia
(alrededor de 510 nm), a la longitud de onda de máxima absorbancia, leer la
absorbancia de cada solución patrón y del analito, teniendo en cuenta cuadrar el
cero de Absorbancia con el blanco de reactivos.
La absorbancia del fertilizante debe estar dentro del rango de los estándares sino
lo esta, hacer la respectiva dilución, si la muestra esta muy concentrada o preparar
otro estándar si ocurre el caso contrario.
19
PREGUNTAS
g. Qué es un complejo?
h. Por qué se llaman complejos por transferencia de carga?
i. Qué sucede si no se adiciona la hidroxilamina antes de agregar la 1,10-
fenantrolina?
j. Qué condiciones debe tener el agua que se utiliza para preparar las soluciones
en este análisis?
k. Cuál es el mínimo volumen de solución de 1,10-fenantrolina de concentración
0.5 g/L, necesario para reaccionar con 0.25 mg de hierro (II)?
l. Si la solución de su muestra problema tiene una absorbancia por encima o por
debajo de las absorbancias de las soluciones patrón que efecto puede tener
esto en el resultado del análisis y como se soluciona este problema?
m. Informar el porcentaje del hierro en el fertilizante
RESIDUOS
Los residuos se recogen en garrafones de plástico ubicados en el puesto # 73
rotulados como: Residuos para neutralizar, composición: medicamento, complejos
de Fe+2 ,acetato de sodio, clorhidrato de hidroxilamina, H 3 O+ , los cuales se
neutralizan ( Ver instructivo ITR-3514-08-04) y se descartan por el desagüe.
20
ANÁLISIS SIMULTÁNEO DE DOS COMPONENTES
OBJETIVO
Aplicar la espectrofotometría para resolución de problemas donde hay en la
muestra dos o más componentes que absorben en la misma región de
longitudes de onda.
MARCO TEÓRICO
En la mayoría de los casos un espectrómetro no puede analizar directamente una
muestra, solo se convierte en una herramienta útil cuando la muestra ha sido
tratada para aislar el constituyente que se va a analizar de tal forma que se pueda
interpretar el resultado sin ambigüedades. Sin embargo, en muchos casos no es
necesario que los componentes individuales de una muestra compleja se separen
de los demás para poder analizarlos.
Para realizar un análisis cuantitativo de un sistema de multicomponentes es
necesario que se cumplan los siguientes requisitos:
Los componentes no deben reaccionar entre sí.
Las absorbancias deben ser aditivas.
En espectrofotometría algunas veces es posible medir mas de un componente en
una sola solución, la complejidad depende de los espectros de absorción los
componentes que se van a analizar. Suponiendo que la muestra tiene dos
componentes X y Y que absorben, se presentan varios casos:
Caso 1
Los espectros de los componentes no se sobreponen o al menos se puede
encontrar una longitud de onda donde X absorbe y Y no y otra longitud de onda
donde sea Y el que absorbe y X no, los componentes X y Y se pueden analizar
cada uno en las longitudes de onda donde el otro no interfiere, como se ve en la
siguiente figura:
X
Y
1 2
Longitudes de onda
21
Longitudes de onda
Caso 2
Los espectros se sobreponen parcialmente, la siguiente figura muestra como en la
longitud de onda 1, X se puede analizar sin interferencia de Y pero en la 2 X
absorbe junto con Y. En este caso se determina la concentración de X a partir de
la absorbancia en 1, luego se calcula la absorbancia que tiene esta concentración
de X en 2 usando su absortividad molar en esta longitud de onda , esta
contribución se resta de la absorbancia medida para la solución a 2 con lo que se
obtiene la absorbancia del componente Y cuya concentración se puede calcular
después usando la ley de Beer.
X
Y
1 2
Longitudes de onda
Caso 3
Los espectros se sobreponen por completo. Cuando no se puede encontrar una
longitud de onda en la que ya sea X o Y absorban en forma exclusiva, como se
sugiere en la figura siguiente:
X
1
Longitudes de 2onda
22
Este es el caso que se va a tratar en la presente práctica. Para ello es necesario
proponer dos ecuaciones simultáneas con dos incógnitas:
A1 = x1b Cx + X1 b CY
A2 = x2 b Cx + Y2 b CY
Donde:
A es absorbancia medida en cada una de las longitudes de onda.
es la absortividad molar.
b es el espacio recorrido por la radiación en la muestra.
CX y CY son las concentraciones molares de los analitos.
Como CX y CY son las únicas incógnitas, sus valores se pueden hallar por
ecuaciones simultáneas. Los valores de se obtienen a partir de análisis de
soluciones patrón de cada una de las sustancias que se han medido a las dos
longitudes de onda.
EQUIPO
Espectrofotómetro (Espectronic 20 Génesis).
Celdas apropiadas para el instrumento.
Pipetas volumétricas de 5.0 mL
Balones volumétricos de 25 mL
REACTIVOS
Solución de 100 ppm de colorante amarillo.
Solución de 100 ppm de colorante azul.
PROCEDIMIENTO
1. A partir de una solución de 100 ppm de colorante amarillo, preparar 25 mL de
una solución de 20 ppm de este colorante.
2. A partir de una solución de 100 ppm de colorante azul, preparar 25 mL de una
solución de 20 ppm de este colorante.
3. A partir de la solución patrón de 100 ppm del colorante azul y de la patrón de
100 ppm del colorante amarillo preparar 25 mL, de una mezcla de estos
colorantes (que contengan 20 ppm del colorante azul y 20 ppm del colorante
amarillo).
4. Llenar, hasta las dos terceras partes, una celda porta muestras con agua
destilada.
23
5. Llenar, hasta las dos terceras partes, otra celda porta muestras con solución de
20 ppm del colorante amarillo
6. Llenar, hasta las dos terceras partes, otra celda porta muestras con solución de
20 ppm del colorante azul
7. Llenar, hasta las dos terceras partes, otra celda porta muestras con solución de
la mezcla de colorantes (20 ppm colorante azul y 20 ppm del colorante
amarillo)
8. Prender el instrumento
9. Llevar el selector de longitud de onda a 350 nm y con la celda con agua
destilada en el portaceldas llevar la absorbancia a cero.
10. A esta misma longitud de onda cambiar la celda del blanco por la celda que
contiene la solución de colorante amarillo y leer la absorbencia. A esta misma
longitud de onda colocar la celda con la solución del colorante azul y leer
absorbancia, colocar la celda con la mezcla de colorantes y leer absorbancia,
colocar la celda con la muestra, leer la absorbancia de la muestra.
11. Anotar estos datos en la tabla correspondiente.
12. Cambiar la longitud de onda de (360 nm) de 10 en 10 nm, repetir la operación
del numeral 9-11 hasta los 600 nm para el colorante amarillo, y hasta los 640
nm para el colorante azul y para la mezcla de colorantes.
TABLA DE DATOS
Longitud Absorbancia Longitud Absorbancia
de onda de onda
Colorante Colorante Mezcla Colorante Colorante Mezcla
[nm] [nm]
amarillo azul amarillo azul
20 ppm 20 ppm 20 ppm 20 ppm
350 550
360 560
370 570
380 580
390 560
400 570
410 580
420 590
430 600
440 610 -
450 620 -
24
460 630 -
470 640 -
480 650 -
490 660 -
500 670 -
510 680 -
520 690 -
530 700 -
540
13. Seleccionar las longitudes de onda de máxima absorción para el colorante azul
y la longitud de onda de máxima absorción para el colorante amarillo, a estas
dos longitudes de onda leer la absorbancia de las soluciones patrón de 20 ppm
del colorante amarillo (con el objeto de calcular los valores de a dichas
longitudes de onda), y la absorbancia del colorante azul de 20 ppm
14. Leer la absorbancia de la muestra problema.
RESIDUOS
No se recogen puesto que los colorantes que se usan son alimenticios, descartar
por el desagüe.
25
5. Informar la concentración en ppm de los componentes de su muestra
problema.
PREGUNTAS
a. Los siguientes son los espectros de absorción de dos sustancias A y B
Sugiera:
26
PROPIEDADES COLORIMÉTRICAS DESEABLES E INDESEABLES
OBJETIVO
Estudiar un sistema desde el punto de vista de las características que debe
cumplir y de aquellas indeseables que afectan su análisis por colorimetría.
Comparar dos sistemas químicos para ver como sus características
colorimétricas son afectadas en forma diferente por factores externos al
sistema pero dependiendo de la composición de la solución.
APARATOS
Espectrofotómetro
Cubetas para muestras de 1 cm de ancho
Pipetas: 1 mL (graduadas en 0.1 mL), 1, 2, 3, 4, 5 mL
Balones volumétricos de 25 mL
SOLUCIONES
Cantidades aproximadas necesarias para todos
los lavados de pipetas y medidas
Parte I Parte II
Cloruro Férrico, 10-3 M, en HCl 100 mL 80 mL
Tiocianato de amonio, sol. 30 mL
Saturada
Tiocianato de amonio, 0.5 M 100 mL
Acetato de sodio, 2 M gotas
1,10-fenantrolina, 0.1 % y 3% 35 mL
Hidróxido de sodio, 4 M Gotas gotas
Ácido clorhídrico 6.0 M Gotas
Clorhidrato de hidroxilamina, 10% 20 mL
(recientemente preparado)
REACTIVOS
Fluoruro de sodio (NaF)
Oxalato de sodio(NaHC2O4)
Tartrato de sodio y potasio(Na KH5C2O6)
Fosfato diácido de potasio (KH2PO4)
Papel indicador de pH universal
27
MARCO TEÓRICO
En los métodos usuales de análisis espectrofotométricos directos, se mide la
absorbancia de la sustancia. En los casos del Cr (III) y Colorante estudiados
antes, las propiedades de las sustancias permiten análisis exactos sin necesidad
de usar otros reactivos debido a que estas sustancias tienen colores estables,
adaptándose lo suficientemente bien a la Ley de Beer y tienen absortividades
molares lo suficientemente grandes a ciertas longitudes de onda para permitir
análisis directos a los niveles de concentración empleados. Sin embargo, ocurren
muchos casos en las cuales la sustancia no posee propiedades que permitan una
medida óptica exacta. Tales sustancias deberán convertirse, por reacción con
algún reactivo cromogénico apropiado, en una nueva especie que tenga las
propiedades convenientes antes de que pueda hacerse un análisis directo. La
reacción productora del color puede ilustrarse por la siguiente ecuación:
Muestra + reactivo cromogénico producto coloreado
En este experimento consideramos algunas de las propiedades que son
deseables para un reactivo cromogénico y para las especies que serán medidas
por colorimetría. Ya sea que la muestra tenga color por si misma, o requiera la
adición de un reactivo formador de color, la solución destinada para la medida
colorimétrica deberá poseer idealmente estas cinco propiedades:
1. Estabilidad por tiempo suficiente para permitir medidas exactas. La
inestabilidad, que da como resultado decoloraciones, es algunas veces, el
resultado de la oxidación por acción del aire, descomposición fotoquímica,
efectos de acidez, temperatura, solventes, u otras condiciones. Algunas veces,
puede obtenerse mayor estabilidad modificando las condiciones.
2. Color intenso (gran absortividad molar). Esto puede controlarse en muchos
casos, cambiando el solvente y seleccionando un reactivo de sensibilidad
apropiada.
3. Libertad de efectos causados por pequeñas variaciones en el pH de la
temperatura o de otras condiciones.
4. Solubilidad del producto coloreado.
5. Conformidad del sistema coloreado con la ley de Beer.
Cuando se requiere un reactivo formador de color, el reactivo seleccionado
deberá poseer tantas como sea posible de las siguientes propiedades:
1. Estabilidad en solución. Aquellos reactivos que se deterioran rápidamente, se
fermentan, o desarrollan hongos por almacenamiento, por lo general tienen
que ser preparados frecuentemente y deberá hacerse una curva de calibración
para cada nuevo lote de reactivo.
2. Desarrollo rápido del color.
3. Reacción estequiométrica con el constituyente deseado. Si la reacción llega
hasta su completación, la cantidad exacta de reactivo, si es incoloro, no es
crítica, y puede emplearse un exceso para hacer posible la determinación
28
dentro de un amplio rango de concentraciones y que además haya suficiente
para las reacciones de interferencia que consumen reactivo. La intensidad del
color será entonces proporcional a la concentración suponiendo que el
producto coloreado obedece la Ley de Beer. Algunas veces, cuando existen
condiciones desfavorables de equilibrio, hay que añadir un gran exceso de
reactivo para permitir el equilibrio en la dirección deseada.
4. Transparencia (absortividad molar cero) en la región espectral utilizada para la
medición.
5. Selectividad o especificidad, de tal manera que el color sea una medida del
constituyente deseado, únicamente.
6. Libertad de interferencias por otros constituyentes los cuales podrían convertir
los reactivos o constituyentes en una forma no reactiva o complejos que
conducen a un desarrollo incompleto del color.
7. Capacidad para funcionar entre los mejores solventes disponibles.
Lo anterior es un breve resumen de las propiedades deseables para soluciones
y reactivos, si se quieren utilizar provechosamente en análisis colorimétrico,
también la escogencia del solvente en el cual va a hacerse la medida del
colorimétrica es importante.
PROCEDIMIENTO
Nota: Es mejor leer la totalidad del procedimiento antes de comenzar este
experimento de tal manera que esté en capacidad de emplear su tiempo de
laboratorio más eficazmente, se recomienda empezar el análisis realizando el
efecto del tiempo en los dos sistemas e ir realizando los otros parámetros mientras
transcurre el tiempo de lectura y para el próximo laboratorio terminar lo que falta
del resto de la practica
29
Graficar absorbancia Vs tiempo (en minutos) para todas las medidas que se
hicieron.
30
hasta con agua destilada. Obtener la absorbancia de la solución a 480 nm.
Pasar inmediatamente a la parte ID que se encuentra más adelante.
3. pH>1. Preparar una solución de pH>1 de la siguiente manera. A 1mL de la
solución de provisión de hierro y 0.5 mL de solución saturada de NH4SCN en
un beaker de 50 mL, agregar 3 gotas de solución de NaOH 1 M, y 100
microlitros de acetato de sodio 2.0 M, midiendo pH con PHmetro, hasta que el
pH sea mayor que 1.Transferir a un balón volumétrico de 25 mL. Diluir hasta el
aforo y medir la absorbancia de esta solución a 480 nm. Medir la absorbancia
inmediatamente.
Graficar absorbancia Vs pH (aproximado) para todas las medidas realizadas en
esta parte del experimento.
31
Pipetear 1mL de la solución de provisión de Fe (III) en un beaker de 50 mL, añadir
0.25 mL de solución de NH2OH.HCl (clorhidrato de hidroxilamina) al 10 %. Agitar el
balón con movimiento circular por unos pocos segundos, dejarlo en reposo por 1 a
2 minutos y añadir luego 0.5 mL de una solución de orto-fenantrolina al 0.1 %
(abreviado O-phn de aquí en adelante). Adicionar 4 gotas de acetato de sodio,
homogenizar, mirar con el Phmetro que el pH de la solución este entre 3 y 5. (El
propósito del clorhidrato de hidroxilamina es reducir el Fe (III) a Fe (II), el cual
forma un complejo más estable con la O-phn; el acetato de sodio ajusta el pH de
tal manera que el color del complejo se desarrollará más rápidamente). Transferir
a un balón volumétrico de 25 mL.Diluir hasta el aforo con agua destilada y
homogenizar bien. Medir inmediatamente la absorbancia de la solución a 510 nm
el agua destilada puede emplearse como blanco, colocar la celda con la solución
en la gradilla y repetir la medida aproximadamente cada 30 minutos por un periodo
de 2 a 3 horas.
Nota: Esta solución es de pH aproximadamente 5 y su medida va a ser la misma
de la parte IIC (3) y además se va a usar esta solución en la parte IID de este
experimento.
Graficar la absorbancia Vs tiempo (min) para todas las medidas obtenidas.
32
Solución # Volumen de Ophn 0.3% (mL)
adicionado antes de aforar
1 0.0
2 0.2
3 0.4
4 0.6
5 1.0
6 3.0
7 4.0
Nota:
Siempre se debe ajustar el pH en forma constante así que si en la primera medida
se adicionaron 20 gotas de acetato de sodio se debe proceder de igual forma para
las demás soluciones.
Cuando se adicionan 1.0 mL de hierro y 0.25mL de clorhidrato de hidroxilamina es
recomendable dejar en reposo 2 minutos la solución para que al final el equipo
haga una lectura de absorbancia constante.
El pH siempre se debe controlar con el PHmetro.
Graficar la absorbancia Vs mililitros de O-phn. Deberán resultar dos líneas
interceptadas, con el punto de intersección correspondiente a la cantidad de O-
phn justamente necesaria para formar el complejo con el hierro presente en la
solución.
33
marca con agua destilada homogenizar la solución y mezclar bien. Medir la
absorbancia inmediatamente usando la longitud de onda 510 nm
pH5. Usar la primera medida de absorbancia obtenida con la solución en la parte
IIA. Esta misma solución se usa en la parte IID.
pH9. A 1mL de la solución de provisión de hierro, en un beaker de 50 mL,añadir
0.25 mL de la solución de NH 2OH.HCl, 0.5 mL de O-phn al 0.1 % y gotas de NaOH
1 M lentamente hasta obtener un pH cercano a 9, este pH se controla con papel
Indicador universal.Transferir la solución a un balón volumétrico de 25 mL y diluir
hasta el aforo con agua destilada homogenizar la solución, Medir la absorbancia
inmediatamente usando la longitud de onda 510 nm
pH12. A 1 mL de la solución de provisión de hierro en un beaker de 50 mL,
añadir 0.25 mL de la solución de NH 2OH.HCl, 0.5 mL de O-phn al 0.1 % y gotas
de NaOH 1 M lentamente hasta obtener un pH cercano a 12, este pH se controla
con el Phmetro.Tranferir la solución a un balón volumétrico de 25 mL, diluir hasta
el aforocon agua destilada y homogenizar la solución. Medir la absorbancia
inmediatamente usando la longitud de onda 510 nm
Graficar la absorbancia vs pH (aproximado) para cada una de las cinco medidas.
La absorbancia de este sistema es casi independiente del pH solamente en la
región del pH entre 3.0 y 10.0 aproximadamente.
34
Informar las observaciones como el efecto de cada una de las sales sobre la
absorbancia del sistema hierro-ortofenantrolina, como parte de la discusión a
la pregunta 1 más adelante.
RESIDUOS
PREGUNTAS
a. Discutir clara, pero brevemente, los efectos causados por los iones tiocianato y
O-phn como reactivos colorimetricos para el hierro. Incluir en la discusión los
siguientes puntos:
Estabilidad (en el tiempo).
Cantidad necesaria de reactivo colorimétrico.
Efecto del pH.
Efecto de los aniones.
Otros factores pertinentes.
b. Interpretar cualitativamente la forma de la curva de absorbancia Vs mililitros de
O-phn, obtenida en la parte IIB.
35
c. Si el complejo Fe (II)-O-fenatrolina se ha disociado apreciablemente, qué se
puede esperar para la curva absorbancia Vs mililitros de O-phn? (Trace un
esbozo).
d. Se sabe que el Fe (II) y la O-phn forman un complejo estable en relación 1:3,
es decir:
++
[Fe(O-phn)3]
N
.. N
..
f. Calcular la sensibilidad (en mg por litro por cada 0.01 unidad de absorbancia)
para los dos sistemas Fe/O-phn y Fe/SCN (SCN/Fe relación de 2000) cuando
se analiza hierro. Discutir este resultado.
36
DETERMINACIÓN DEL pK DE UN INDICADOR
Los datos espectrofotométricos pueden usarse para determinar la concentración
de una solución desconocida, pero además se pueden utilizar muy frecuentemente
para determinar constantes físicas relacionadas con los cambios de color. Estas
aplicaciones son en última instancia un problema analítica en las cuales la lista de
los cálculos implicados requieren un tratamiento especial de los datos. La
determinación de la constante de disociación de un indicador es un ejemplo típico
de estas aplicaciones de la espectrofotometría. En este experimento se obtendrá
el espectro de absorción de azul de bromotimol en soluciones ácidas, neutras y
alcalinas para determinar entonces las longitudes de onda apropiadas para
mediciones posteriores de absorbancia. Se harán entonces medidas de
absorbancia de una serie de soluciones a diferentes valores de pH, que contengan
una concentración constante del indicador. Estos datos se emplearán en el cálculo
del pK de la siguiente reacción:
Hin ↔ H+ + In-
PROCEDIMIENTO
1. Obtener tres espectros completos de azul de bromotimol en soluciones ácida,
neutra y alcalina.
a. Solución ácida (pH ~ 1,70): En un balón volumétrico de 25 mL pipetear 1.0
mL de solución de azul de bromotimol (preparado 0.1% en etanol al 20 %),
agregar unos pocos mililitros de agua destilada, luego agregar cuatro gotas
de HCl 12 M, diluir hasta completar el volumen y homogenizar la solución.
b. Solución neutra (pH ~ 7.0 ): En un balón volumétrico limpio de 25 mL
pipetear 1.0 mL de azul de bromotimol, 5.0 mL de NaH 2PO4 0.10 M y 5.0 mL
de Na2HPO4 0.10 M, diluir hasta completar el volumen y homogenizar la
solución.
c. Solución alcalina (pH ~ 13,0): En un balón volumétrico limpio de 25 mL
pipetear 1.0 mL de azul de bromotimol, y agregar unos pocos mililitros de
agua destilada, agregar 12 gotas de NaOH 4 M, diluir hasta completar el
volumen y homogenizar la solución
Homogenizar cuidadosamente cada solución y colocar una porción en las
celdas. Emplear agua destilada como referencia y obtener el espectro (leyendo
la absorbancia) desde los 360 nm hasta los 580 nm a intervalos de 10 nm.
Hacer una gráfica del espectro (absorbancia Vs. Longitud de onda) para todas
las tres soluciones en el mismo papel.
2. A partir de sus datos escoger una longitud de onda de cada lado del punto
isobéstico (lectura en forma ácida, básica y neutra son similares) para hacer
mediciones posteriores de absorbancia. Estas longitudes de onda deben
corresponder a los puntos en los cuales las formas ácida y básica del indicador
muestren diferentes máximas en absorbancia. Para estas dos longitudes de
onda medir la absorbancia para cada una de las siguientes soluciones:
37
mL mL H2PO4- mL HPO42- pH
indicador
a. 1.0 5.0 0.0 4.40
b. 1.0 5.0 1.0 6.50
c. 1.0 10.0 5.0 6.90
d. 1.0 5.0 10.0 7.50
e. 1.0 1.0 5.0 7.90
f. 1.0 1.0 10.0 8.20
g. 1.0 0.0 5.0 9.75
h. 1.0 2.0 0.0 4.65
RESIDUOS
Se recogen los residuos en garrafones de plástico ubicados en el puesto # 73
rotulados como: Residuos determinación del pK de un indicador por
Espectroscopia visible, composición: PO 43- ,H3O+ Y OH– de los cuales
posteriormente se precipitan los fosfatos, los residuos restantes se neutralizan
y descartan por el desagüe.
TRATAMIENTO DE LOS DATOS
Asumiendo que el Ka2 del ácido fosfórico es 6.3 x 10 -8 (pKa2=6.2), Ka1 del acido
fosfórico es 7.1 x 10–3 y Ka3 es 4.5 x 10-13. Calcular el pH de cada solución. En
papeles separados graficar la absorbancia en función del pH para cada
longitud de onda, incluyendo los datos obtenidos en los espectros.
Las curvas deben tener el aspecto de la figura siguiente:
Punto isobéstico
A =440 nm
Forma Ácida (II)
pH
1.0 13.0
38
3. Se debe determinar el pK del indicador de dos maneras:
a. El punto medio en la curva de la figura anterior corresponde a
concentraciones iguales de HIn a In -. El pH en este punto es igual al pK del
indicador y se debe obtener un valor para cada una de las dos longitudes
de onda.
b. En cada punto a lo largo de la figura anterior, la relación de [HIn] a [In -] debe
obtenerse por medida de la desviación de ese punto de la línea horizontal
que corresponde a tener todo el indicador en una de las formas. Por
ejemplo, la diferencia de absorbancia de la línea superior al punto en la
curva es proporcional a la cantidad de indicador en forma básica la relación
[HIn]/[In-] puede obtenerse por la desviación de estas absorbancias. Hacer
una gráfica de log Ai /(At-Ai) y del log (At-Ai)/Ai en función del pH y
determinar el pK a partir del punto en que se cruzan las dos formas ácida y
básica.
c. Explicar cualquier diferencia que se presente en los valores de pK
determinados por estos dos métodos. Comparar los valores de pK
obtenidos con los de la literatura y discutir las posibles razones en caso de
que haya diferencia.
39
ESPECTROSCOPÍA DE “PRECISIÓN” O “DIFERENCIAL”
OBJETIVO
Analizar muestras muy concentradas o muy diluidas empleando soluciones
apropiadas para calibrar el cero y 100 % de transmitancia.
MARCO TEÓRICO
El método colorimétrico ordinario aunque es más ampliamente utilizado que otros
métodos de análisis, tiene dos defectos:
a. Su operación está limitada a muestras que transmiten entre 20 y 65 %.
b. Tiene una precisión menor que las técnicas volumétricas y gravimétricas. Por
esta razón la determinación de componentes mayores rara vez se hace por
colorimetría.
Estas dos limitaciones frecuentemente se evitan, sin embargo, por una
aproximación diferencial a las medidas espectofotométricas y se obtienen
resultados cuya precisión se acerca a la de los procedimientos volumétricos. Este
experimento ilustra tal aproximación.
Los cuatro tipos de medida espectrofotométricas pueden clasificarse de acuerdo
con los “estándares” empleados para establecer el “0” y el 100 % como puntos en
la escala de porcentajes de transmitancia. Estos estándares corresponden en
realidad a concentraciones conocidas (C 1 y C2) de las especies en las muestras:
se usa C1 para establecer el “0” y C2 para establecer el “100”; C corresponde a la
concentración desconocida de la especie en la muestra cuyo valor se va a
determinar por este procedimiento.
40
concentración (o mejor aún, de alta absorbancia). En el método colorimétrico
ordinario se emplean dos celdas o cubetas, una que contiene la solución de la
mezcla que se va a analizar y la otra que contiene el solvente puro (el blanco del
100 % T). Se hacen arreglos instrumentales de tal manera que la absorbancia del
solvente y la cubeta se sustraigan de la absorbancia de la muestra y la diferencia
es entonces la absorbancia del compuesto analizado. Mientras que este método
es aplicable a soluciones de absorbancia moderada, no se pueden medir con
exactitud las soluciones de alta absorbancia. Para conseguir mediciones exactas
de soluciones de alta absorbancia, una solución conocida de la sustancia que se
va a medir se emplea como blanco para el 100 % T en lugar del disolvente puro.
La solución conocida que se va emplear como un “blanco” se escoge que sea
ligeramente más diluida que la solución problema. Al ubicar el 100 % T con esta
solución conocida, lo que se hace es que efectivamente se aumenta la escala de
% T (lo que una vez fue 2 ó 10 % T, por ejemplo, puede ahora leer 100 % T
mientras que no se efectúa ningún cambio con el 0% T). En consecuencia es
posible tener mayor exactitud en las lecturas de % T en las determinaciones de
concentraciones.
0 C C2 100
Método ordinario
41
Con el método de la absorbancia baja, al contrario de la absorbancia alta y la
colorimetría ordinaria, se debe hacer la gráfica de una curva de calibración del
log % T Vs C (o de A Vs C) para determinar fácilmente la concentración de una
solución desconocida ya que C y el log % T no son directamente proporcionales.
42
Ar
A' s A' s As
As
Donde A’s es la absorbancia calculada y A *s es la absorbancia corregida. La
determinación del valor de β se hará en la parte I del procedimiento.
Nota: la corrección de las celdas se debe realizar siempre que se trabaje
espectroscopía diferencial.
REACTIVOS
Soluciones patrón de colorante amarillo de las siguientes concentraciones: 8ppm,
12 ppm, 16ppm, 20 ppm, 28 ppm, 32 ppm ,40 ppm, 48 ppm, 52 ppm, 60 ppm, 72
ppm, 80 ppm, 84 ppm, 88 ppm, 92 ppm, 96 ppm y 100 ppm.
PROCEDIMIENTO.
Lavar las celdas y depositar en una de ellas agua destilada y la otra con la
solución de 32 ppm del colorante, correr el espectro desde 350 nm hasta 600 nm
cada 10 nm, esto es para seleccionar la lambda de máxima absorción. (430 nm)
Realizar la evaluación de las cubetas para el análisis posterior
43
Es muy importante en este experimento que la cubeta empleada como referencia
se conserve como el “blanco” y la otra cubeta para las soluciones. También es
importante que las cubetas se coloquen en el compartimiento de muestras
siempre exactamente en la misma posición. La longitud de onda analítica
empleada λ=430 nm
CURVAS DE CALIBRACIÓN
Recuerde purgar la celda con cada una de las soluciones de colorante que va a
utilizar en cada rango, y de volverlas a su frasco original sin contaminar ya que
estas soluciones las usaran los integrantes de los demás grupos.
Las concentraciones de las soluciones de los colorantes son las siguientes: 8 ppm
12ppm, 16 ppm, 20 ppm, 28 ppm, 32 ppm, 40 ppm, 48 ppm, 52 ppm, 60 ppm, 72
ppm, 80 ppm, 84 ppm, 88 ppm, 92 ppm, 96 ppm y 100 ppm
a. Ahora empleando agua destilada como referencia (blanco), con la debida
atención y la celda apropiada y su colocación en el compartimiento, medir el
100 % de T, luego leer el % de transmitancia a cada una de las soluciones
de: 8 ppm, 12 ppm, 16 ppm, 20 ppm, 28 ppm y 32 ppm. Leer las muestras
en este rango.
b. Con la solución de 32 ppm cuadrar el 100 % de T, luego leer el %T de cada
una de las soluciones de colorante de: 40 ppm, 48 ppm, 52 ppm, 60 ppm y
72 ppm teniendo cuidado de no contaminarlas ya que son necesarias para
los otros grupos que realizaran la práctica. Leer las muestras en este
rango.
c. Con la solución de 72 ppm cuadrar el 100% de transmitancia y leer el % T
de cada una de las soluciones de colorante de: 80 ppm, 84 ppm, 88 ppm,
92 ppm, 96 ppm y 100 ppm. Leer las muestras en este rango.
Notas:
Tener cuidado de no contaminar las soluciones ya que son necesarias para los
otros grupos que realizan la práctica.
Si el instrumento no se puede fijar en el 100 % con la solución 72 ppm como
referencia, emplear las soluciones de concentraciones sucesivamente más bajas
hasta encontrar una que permita fijar el 100 % T. Con las soluciones de alta
concentración, los errores debido a las fluctuaciones en las lecturas del % T
pueden disminuirse si se hacen lecturas rápidas y consecutivas de las soluciones
de muestra, también si se deja calentar el spectronic un buen tiempo.
Apagar spectronic, dejar el botón de entrada de radiación totalmente cerrado,
dejar equipo y puesto de trabajo organizado y limpio
RESIDUOS
Se descartan por el desagüe ya que los colorantes que se usan son grado
alimenticio.
44
TRATAMIENTO DE LOS DATOS
a. Convertir todas las lecturas de % T a absorbancia y corregir estos valores
de A empleando su factor β.
b. Hacer una gráfica de los valores corregidos de A Vs C. Las curvas
resultantes deben consistir en varias líneas inclinadas que son
aproximadamente rectas y paralelas entre sí.
c. A partir de los valores de % T y empleando el factor β, obtener la
absorbancia corregida para cada solución desconocida.
Nota: el factor β debe determinarse de nuevo cada día que se hagan lecturas
de % T. Así, cualquier valor de % T leído el segundo día debe corregirse
empleando el factor β determinado ese día.
d. Determinar la concentración de las dos soluciones desconocidas en ppm
ANÁLISIS DE ERROR
(Métodos ordinarios y de alta absorbancia)
Suponiendo que el sistema obedece la Ley de Beer y que el error puede atribuirse
sólo a la inexactitud en las lecturas de la escala de % T, se puede hacer un
tratamiento bastante completo y simple del error en el análisis. Este tratamiento
consiste en calcular el error esperado en cada punto experimental de su curva de
calibración y luego tomando nota de como el error esperado varía de un punto a
otro en la curva.
El primer paso en el tratamiento consiste en evaluar el error en concentración (dC)
que resulta de un error en la lectura del porcentaje de transmitancia en la escala
de una cantidad dada (dT). Este error, dC, es el error absoluto. Este depende
fuertemente de la porción de la escala de transmitancia en la cual se hace la
lectura: En la región de alta transmitancia el error absoluto es menor que en la
región de baja transmitancia. Esta relación cuantitativa se deriva fácilmente de la
Ley de Beer:
A= - log T = 1 (C-C2) ó
-A= log T = -k (C-C2)
ln T = -k (C-C2)
Por consiguiente:
0.43
dC dT
kT
45
cuando se hace una gráfica de A Vs C, entonces se podrá calcular fácilmente el
valor de k a partir de sus curvas de calibración.
Determinar los tres valores de k correspondientes a las tres líneas rectas de la
gráfica de A Vs C (los tres valores de k deben ser semejantes). Empleando los
valores de k y las relaciones de arriba, calcular el error absoluto para cada uno
de los puntos experimentales, asumiendo un error del 1 % en la lectura del
porcentaje de la escala de transmisión (dT=0.01).
De mayor significado para el analista es, sin embargo, el error relativo que es el
error absoluto en concentración divido por la concentración real y frecuentemente
multiplicado por 100 para obtener el porcentaje relativo de error, es decir,
dC
100
C
Calcular el porcentaje relativo de error (para un error de 1 % en la lectura del
porcentaje de la escala de transmitancia) para cada punto experimental y registrar
cada uno de estos valores en los puntos apropiados en la gráfica de A Vs C.
PREGUNTAS
a. Calcular el porcentaje relativo de error causado por una lectura errónea de la
escala % T de un 1 % en el punto de error mínimo para el método colorimétrico
ordinario (es decir, a 36.8 % T).
b. Hallar en su curva de calibración (técnica de la alta absorbancia) el punto
donde el porcentaje de error relativo es más bajo. Cuanta mayor precisión (es
decir, 2 veces, 8.2 veces?) resulta por operación cerca a este punto al usar la
técnica de la alta absorbancia, más bien que diluir la muestra de tal manera
que se opere en el 36.8 % T (óptima) región empleando la técnica ordinaria
colorimétrica?
c. Cuál de sus 17 soluciones estándar debe emplearse como la solución de
referencia de 100 % T para obtener un análisis óptimo de una solución
desconocida que tiene una concentración 57 ppm? o de sus 2 soluciones
desconocidas de colorante
d. Si se van a determinar las concentraciones de colorante utilizando la longitud
de onda de 430 nm, cual de los cuatro métodos de colorimetría, descritos
arriba emplearía para soluciones en los siguientes rangos de concentración y
por qué?
Entre 4 ppm- 8 ppm
Entre 40 ppm-50 ppm
Entre 80 ppm -100 ppm
Entre 100 ppm -105 ppm
46
REFRACTOMETRÍA: ANÁLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO
OBJETIVOS
Conocer el refractómetro y su manejo.
Obtener el índice de refracción de sustancias puras y utilizar el índice de
refracción como criterio de pureza.
Analizar cuantitativamente mezclas binarias, aprovechando la dependencia
del índice de refracción de la concentración sus componentes.
MARCO TEÓRICO
El índice de refracción es una de las propiedades físicas que caracteriza los
compuestos puros, puede ser usada para confirmar la identidad de un compuesto
o para medir su pureza.
Cuando un rayo de luz monocromática atraviesa la superficie de separación entre
dos medios de densidad diferente, el ángulo con respecto a la normal a la
superficie de separación cambia, esto se debe a que la velocidad de la radiación
en los dos medios es diferente.
La relación entre la velocidad de la radiación en el vacío (V 1) y la velocidad de la
radiación en el material de interés (V 2), se llama el índice de refracción (n) del
material.
n = V1/V2
Para propósitos prácticos, se usa el aire en lugar del vacío como referencia, pues
su índice de refracción es muy cercano a uno.
El índice de refracción depende no solo de la naturaleza de las sustancias, sino
también de la longitud de onda de la radiación empleada (generalmente la línea D
del sodio, 589.6 nm) y de la temperatura, por tal razón, se escribe n en función de
y T, por ejemplo:
n D20 H 2 O = 1.3330 n D20 C diamante = 2.4170
47
n2 1 1
Refracción específica: r 2
n 2
donde:
r la refracción específica
n el índice de refracción y
la densidad de la sustancia (g/mL)
Refracción molar: R= r x M
donde:
R refracción molar
r refracción específica
M el peso molecular de la sustancia
Esto permite también calcular el aporte de los átomos y de los enlaces que forman
las moléculas a la refracción molecular de la sustancia.
48
4. Separar los prismas ejerciendo una ligera presión y rotando un poco la
perilla que los une.
5. Aplicar dos o tres gotas de la muestra sobre el prisma fijo (sin tocar el
prisma, para no correr el riesgo de rayarlo) de tal manera que la muestra
forme una película delgada .Ajustar los prismas, suavemente.
6. Observar a través del ocular, con el tornillo macro (ubicado en la parte
inferior derecha del equipo) trate de hallar dos zonas una coloreada y
brillante en la mitad y otra oscura en la parte inferior.
7. Con el tornillo micro de dispersión y ajuste de la longitud de onda (ubicado
en la parte superior, derecha, con una escala graduada), se selecciona una
sola línea de la luz de las lámparas, para ello mover el tornillo hasta que se
obtengan dos zonas, una clara en la parte superior y otra oscura en la parte
inferior, es decir quitar los colores que hay en el centro del campo.
8. Ubicar el ángulo crítico, con el tornillo macro, hacer que la línea divisoria
corte el cruce exacto de las líneas de los dos campos, claro y oscuro.
9. Leer a través del ocular, en la parte inferior de la pantalla hay dos escalas,
una corresponde al índice de refracción (va de 1.3000-1.7000) y la otra
escala es para leer sólidos suspendidos (va de 0-95).
10. Leer el índice de refracción de la muestra, la lectura se da a partir de la
línea vertical hacia la izquierda) que se observa en la pantalla, se lee
estimando la cuarta cifra decimal por medio de la escala del vernier.
11. Después de seguir las instrucciones anteriores, hacer las mediciones
necesarias.
12. Separar los prismas y limpiarlos con papel higiénico suave y con agua
destilada o etanol.
13. Colocar el pedacito de papel higiénico entre los prismas,
14. Tapar con los respectivos forros el ocular del refractómetro y, guardar el
equipo en la caja y taparlo con su respectivo forro.
15. Dejar el material y el sitio de trabajo limpio y organizado
REACTIVOS
1. Compuestos patrón (de alta pureza)
2. Soluciones Estándar:
Preparar soluciones estándar, de propanol en agua, de concentración 20, 40,
60 y 80% (V/V) tomando 2, 4, 6 y 8 mL de propanol, en balones de 10 mL y
completando a volumen con agua. Homogenizar cada una de las soluciones
por agitación.
PROCEDIMIENTO
En el refractómetro Abbe el rayo de luz pasa a través de una película delgada del
líquido muestra, luego ilumina un punto de referencia y el movimiento de un botón
permite alinear este punto de referencia y correlacionarlo con una escala para
hacer la lectura
49
En esta práctica se deben seguir los siguientes pasos:
1. Recibir instrucciones sobre el uso del equipo.
2. Siguiendo las instrucciones anteriores determine el índice de refracción de los
siguientes compuestos: agua, etanol, benceno, propanol, cloroformo, éter
etílico, tetracloruro de carbono y glicerina.
3. Medir el índice de refracción de las sustancias puras y anotarlos en un cuadro
como el siguiente:
Sustancia n DT Densidad Refracción Refracción R % Error=
específica molar calcula ((R -R )/Rt)
exp teo
da
(r) (Rexperimental) x100
Rteórica
Agua
Benceno
Clorofom
Etanol
Eter
etílico
Glicerina
Propanol
Tetracloru
ro de
Carbono
Concentración de Concentración de n DT
propanol/agua % v/v propanol/agua
Fracción molar (X)
20-80
40-60
60-40
80-20
Muestra #
5. Limpiar los prismas del refractómetro con suavidad usando etanol y papel
higiénico suave
6. Colocar papel higiénico suave en medio de ellos.
50
7. Limpiar el equipo, dejar la mesa limpia y en orden.
RESIDUOS
Se recogen en frascos de vidrio ubicados en el puesto # 48 rotulados como:
Residuos índice de refracción de mezclas, composición: Propanol, agua, los
cuales posteriormente se recuperan por destilación (Ver instructivo ITR-3514-08- )
51
VARIACIÓN DEL ÍNDICE DE REFRACCIÓN CON LA TEMPERATURA
OBJETIVO
Analizar el comportamiento del índice de refracción de la glicerina (u otra
sustancia poco volátil) con la temperatura.
MARCO TEÓRICO
Si se hace pasar un rayo de luz monocromática a través de un medio
transparente, el rayo sufre un cambio de ángulo en la salida o es refractado
completamente, el grado de esta refracción está dado por la razón de los senos de
los ángulos de incidencia y refracción:
sen i v1
n
sen r v 2
En donde: n es el índice de refracción, i es el ángulo que hace el rayo incidente
con una línea perpendicular a la normal a la superficie que separa los dos medios,
r es el ángulo del haz refractado que viaja en el segundo medio y v1 y v2 son las
velocidades de la luz en el primero y segundo medio respectivamente.
Usualmente el aire es escogido como medio de referencia y el índice de refracción
dado en tablas, se refiere a aquel calculado cuando la luz sale de la sustancia
hacia el aire, en ese caso este índice con respecto al aire debe ser multiplicado
por la razón
(n vacío/n aire)=1.00029
para conseguir el verdadero índice de refracción. Este índice tiene múltiples usos,
para determinar concentración de materiales, identificar sustancias, determinar
pureza de reactivos y como ayuda en la determinación de estructuras.
El índice de refracción depende no solamente de la longitud de onda usada, sino
de factores que afecten la densidad del medio como la temperatura y la presión,
para la mayor parte de los líquidos orgánicos un incremento en temperatura de 1
°C causa una disminución en n de 4.0x10- 4 a 6.0x10- 4.
PROCEDIMIENTO
En primer lugar, sujetar firmemente la base del refractómetro y asegurarse de que
la fuente luminosa esté trabajando en perfectas condiciones. Con cuidado soltar el
enganche del prisma. Si los prismas no están limpios frotarlos con un papel suave,
cuidando que no queden fibras sobre la superficie. Limpiar el prisma empleando
etanol. NUNCA USE ACETONA PARA LIMPIAR LOS PRISMAS.
Desde un gotero dejar caer a la base del prisma una o dos gotas de glicerina cuyo
índice de refracción se quiere medir. NUNCA PONGA GOTEROS O PIPETAS EN
CONTACTO DIRECTO CON LA SUPERFICIE DEL PRISMA. Cerrar suavemente
52
el compartimiento de las muestras. Con la perilla de la derecha buscar una
posición tal que la línea divisoria de las 2 zonas quede exactamente en el cruce de
las líneas perpendiculares que se observan por el ocular del instrumento. La línea
divisoria deber ser muy nítida, de lo contrario se puede ajustar con la perilla
graduada que está en la parte superior derecha del instrumento.
Leer el índice de refracción cuatro veces y promediar la lectura, anotar la
temperatura.
Usando el baño termostatizado empiece a calentar primero tome el índice de
refracción a temperatura ambiente, luego empiece a calentar abriendo el reóstato
tome unos 4 –5 valores por encima, apague el baño, cierre el reóstato, cambie el
agua caliente por agua de la llave y empiece a rebajar la temperatura (usando
hielo) por debajo de la temperatura ambiente y lea el índice de refracción
nuevamente (hacer unas 4 -5 mediciones). Anotar la temperatura y el índice de
refracción a la cual se están haciendo estas mediciones.
TRATAMIENTO DE DATOS
a. Graficar el índice de refracción de la sustancia Vs. Temperatura y correlacionar
estas variables por medio de una ecuación empírica.
b. A qué cree se atribuye el cambio de índice de refracción con la temperatura?
c. Según los datos obtenidos, se podría afirmar que un cambio en 1 °C causa un
cambio en el índice de refracción en el rango de 4.0x10 - 4 a 6.0x10- 4.
Demostrarlo.
d. Para tener una precisión en el cuarto decimal en la medición de índice de
refracción de líquidos. Cual es la máxima variación de temperatura permisible?
Nota: Anotar la bibliografía consultada.
53
ÍNDICE DE REFRACCIÓN DE MEZCLAS
(CÁLCULO DE LAS CONCENTRACIONES)
MARCO TEÓRICO
Hay tres métodos ampliamente empleados (propiedad aditiva de la refracción
específica, método de Clemens y método gráfico) para calcular las
concentraciones salinas basados en las medidas de los índices de refracción. Los
cuales se ilustrarán a continuación con ejemplos.
1.4738 2 1 1
C para la mezcla r 0.2311
1.4738 2
2
1.2156
54
Se pueden establecer las dos ecuaciones:
X+Y = 24.31
0.1719 X + 0.3382 Y = (24.31)(0.2311)
= 5.618
Al resolver las dos ecuaciones simultáneamente, se tiene:
X=15.66 g y Y=8.65 g
15.66
% en peso de C C l 4 100 64.4 %
24.31
8.65
% en peso de xileno 100 35.6 %
24.31
55
Nota: Obtener este dato para cada solución y sacar promedio asi:
NaBr 5 %= (1.0277-1.000) / 5 = 0.00554
NaBr 10 % = (1.0552-1.000) /10 = 0.00552 X= 0.00555
NaBr 15 % = (1.0840-1.000) / 15 = 0.00560
56
0.0900
14.44% NaCl
0.00623
0.0900
16.22% NaBr
0.00555
El porcentaje de sal calculado a partir de la densidad dividido por el factor de
índice de refracción apropiado (TABLA 2) dará una lectura del índice de refracción
para la sal:
14.44
60.17 NaCl
0.2400
16.22
43.02 NaBr
03770
Al adicionar la lectura del refractómetro observada para el agua, se obtiene la
lectura del refractómetro de la solución de una sola sal que tenga la misma
densidad que la mezcla.
60.17 + 11.4 = 71.57 NaCl
43.02 + 11.4 = 54.42 NaBr
la diferencia entre la lectura del refractómetro de las sales de la mezcla y la
lectura del NaBr solo respectiva dividido por la diferencia entre la lectura
observada del refractómetro para la mezcla y la lectura del NaBr solo da la
proporción de NaCl en la mezcla tomada como unidad así:
57
III. MÉTODO GRÁFICO
Ejemplo 3:
Se obtuvieron experimentalmente los siguientes datos. Determinar la cantidad de
NaCl y NaBr en la solución desconocida.
Lecturas del
Concentración (g/100 Densidades (25°C) Refractómetro
mL) de inmersión (25 °C)
42.5
1.04 40 NaCl (densidad)
refractómetro
Lecturas del
Densidad
37.5
1.03 35 NaB r (lect.
32.5 refrac.
1.02 30 inmersión)
NaCl (lect.
27.5 refrac.
1.01 25 inmersión)
22.5
1 20
2.5 5 7.5
g de sal/100 mL de solución
58
3. Obtener la pendiente de cada curva.
Pendientes:
Del grafico 1 y 2 de las densidades saco las pendientes
y 0.0563
m Br- x 10
0.00563 m Cl-
y 0.0620
0.00620
x 10
2.55(0.09-0.00620Y/0.00563)+4.04Y=52.2
X = 5.76 g NaBr/100 mL
Y = 9.28 g NaCl/100 mL
59
REFRACTOMETRÍA DE INMERSIÓN
OBJETIVOS
Conocer el manejo del refractómetro de inmersión y estudiar una de las
aplicaciones más útiles del refractómetro de inmersión: el análisis de
soluciones.
MARCO TEÓRICO
EL REFRACTÓMETRO DE INMERSIÓN
El refractómetro de inmersión es un “refractómetro de escala”. Por consiguiente
los valores leídos no son magnitudes físicas, sino que deben convertirse, en los
casos que así lo requieran, a índices de refracción por medio de tablas auxiliares
que vienen con los instrumentos.
El rango de medición se cubre con varios prismas intercambiables (designados
por E) o con termoprismas (designados por T). Una combinación de los prismas
de inmersión y las cajas de paso (designadas por D), permite medir líquidos
transparentes que fluyen continuamente o muestras fácilmente volátiles o aquellas
que varían rápidamente al estar expuestas al aire.
De acuerdo con sus rangos de medición, los primas están numerados de 1 a 10.
60
aparece con una franja coloreada la cual puede eliminarse por giro del anillo
ranurado que opera el compensador. Con sustancias muy dispersivas, es posible
que no llegue a producirse una línea límite completamente incolora, en ese caso
es necesario trabajar con una lámpara de sodio.
Se hace la lectura de la posición de la línea límite dentro de la escala: si la línea
límite se encuentra entre dos divisiones de escala, por ejemplo, entre la 35 y 36,
por medio del tornillo micrométrico se hace coincidir con la división más baja (en
este caso la 35) la línea límite y en el tambor micrométrico se hace la lectura de
las décimas que se han de agregar a la lectura inferior.
Por regla general, la evaluación en mediciones en serie se efectúa con ayuda de
una curva de contraste en la cual se consignan las lecturas del refractómetro
contra la concentración de la muestra que se quiere determinar.
100
80
Lecturas del refractómetro
60
40
20
0
0 10 20 30 40 50 60
g / 100 m L de solución
61
PROCEDIMIENTO PARA ANÁLISIS DE MEZCLAS
Por medio del refractómetro de inmersión es posible analizar una solución de una
mezcla de dos compuestos si, además de las lecturas del refractómetro, se
conoce la densidad de la solución.
1. Preparar 100 mL de cada una de las siguientes soluciones: 5, 10 y 15% de
NaCl y 5, 10 y 15% de NaBr. Durante el procedimiento, no contaminar ni
descartar estas soluciones, regresarlas al recipiente bien tapado y
debidamente rotulado provisto para ello, ya que estas soluciones las usaran los
otros grupos del Laboratorio
2. Determinar la densidad de las seis soluciones más la de una solución
desconocida suministrada por el profesor. Usar la balanza analítica y el
picnómetro, para determinar la densidad de cada una de las soluciones de
sales y de la muestra problema. Pesar el picnómetro vacio, luego con agua y
por último con cada una de las soluciones de sales y la muestra.
3. Colocar de 5 a 10 mL de las soluciones salinas en los vasitos del refractómetro
y la misma cantidad de agua desionizada en otro. Colocar cada vasito en el
soporte numerado del baño de temperatura y esperar 10 minutos para
conseguir el equilibrio térmico.
4. Colocar cuidadosamente el prisma dentro del vaso de agua desionizada para
que alcance la temperatura adecuada.
5. Ajustar la posición del instrumento y del espejo hasta conseguir el mejor
contraste entre las porciones clara y oscura del campo.
6. Ajustar el compensador con el anillo ranurado hasta obtener una línea divisoria
libre de color. Enfocar, moviendo el ocular hasta obtener una línea nítida.
7. Hacer una serie de cinco mediciones y tomar el promedio.
8. Es mejor mantener el prisma en el agua desionizada para conservarlo a la
temperatura apropiada cuando no se está midiendo una solución ya que se
gasta menos tiempo para alcanzar la temperatura de la solución.
9. Remover cuidadosamente el prisma del agua, enjuagarlo con ayuda de un
frasco lavador que contenga agua destilada, secarlo con papel muy suave y
colocarlo con cuidado en la solución que se va a analizar. Hacer una serie de
cinco lecturas y tomar el promedio (al terminar las mediciones, enjuagar el
prisma con agua desionizada y secarlo como antes, teniendo cuidado de no
rayar el prisma).
10. Graficar: densidad vs concentración y lecturas del refractómetro de inmersión
vs concentración. A partir de las pendientes de las curvas establecer dos
ecuaciones y resolverlas simultáneamente para calcular las concentraciones
de NaCl y NaBr (recordar el ejemplo).
11. Determinar factores de densidad y de índice de refracción similares a los
explicados para el NaCl y el NaBr. Empleando estos valores calcular el
porcentaje en peso de cada componente empleando el método de Clemens.
62
Notas:
Este método es válido para otras sustancias que cumplan las condiciones
antes indicadas.
Si se miden soluciones de alcohol o de otras sustancias volátiles es mejor
emplear un vaso de tapa metálica. También es aconsejable mantener los
vasitos en el baño cubiertos con tapas de crisoles para evitar pérdidas por
volatilización.
Si obtiene una línea divisoria ondulante, es posible que la temperatura del
prisma no esté uniforme aún.
63
INFRARROJO
OBJETIVO
Familiarizar al estudiante con las técnicas de espectroscopía Infrarrojo y su
uso para la identificación de sustancias sólidas, líquidas y gaseosas.
Conocimiento de las diferentes celdas a usar en el infrarrojo, celdas
desmontables fijas, celdas desmontables selladas y formas de manejo de
muestras para análisis por infrarrojo.
DISCUSIÓN TEÓRICA
La espectroscopía Infrarroja da información sobre las vibraciones de las moléculas
y estructura de las mismas, es decir mide la excitación vibracional de los átomos
de los enlaces que los conectan.
El infrarrojo de un compuesto es la superposición de bandas de absorción de
grupos funcionales específicos.
SOLVENTES Y MATERIALES
64
Para estandarizar el equipo se requiere un patrón que generalmente es una
película de poliestireno.
Grupo 1: Sustancias que tienen en su estructura el enlace C=O estos son, entre
otros: metil etil cetona, benzaldehído, isobutil aldehído, acetona, ciclohexanona,
acetaldehído, acetofenona, benzofenona.
Ciclohexanona
Grupo 2: Sustancias con el grupo OH, entre las que están: N-butil alcohol, sec-
butil alcohol, alcohol bencílico, ter-butil alcohol, etanol y propanol.
Nitrobenceno
65
Grupo 4: Sustancias conteniendo en sus estructura el grupo COO -, entre ellas:
benzoato de etilo, malonato de etilo, anhídrido acético, acetato de etilo, anhídrido
ftálico, acetato de amilo y acetato de propilo.
Acetato de amilo
Una de las técnicas más empleada `para preparar una muestra sólida para el
análisis I.R es la suspensión fina o Mulling , para obtener buenos resultados de
esta técnica, el tamaño de la partícula debe ser menor que la longitud de onda que
ha de ser transmitida, o el medio empleado para suspender las partículas debe
tener aproximadamente el mismo índice de refracción de la muestra, como esto es
un poco difícil, se debe reducir el promedio de las partículas de la muestra a un
tamaño de 1-2 micrones, la muestra debe quedar totalmente triturada.
66
CCl 4 conjugados para cubrir todo el rango del instrumento ya que el tetracloruro
de carbono presenta bandas de absorción entre 650-1600 cm –1 y el disulfuro de
carbono presenta bandas de absorción entre 1400-2400 cm -1 .sin embargo,
PROCEDIMIENTO
Acido benzoico
67
minutos hasta obtener una mezcla homogénea o polvo fino con la cual se fabrica
la pastilla siguiendo las instrucciones de manejo del troquel y la prensa.
NOTAS
Las partes ópticas y las celdas empleadas en infrarrojo son muy sensibles a la
humedad, por esto: No se debe respirar sobre las ventanas de las celdas.
68
Si es necesario emplear solventes higroscópicos, la celda empleada ya no
puede ser de NaCl, se requiere celdas especiales que no se dañen con el
agua.
RESIDUOS
Cabe anotar que acá se usan 1-2 gotas de cada compuesto al que se le corre el
espectro de infrarrojo
1. Para cada uno de los espectros obtenidos identificar las frecuencias para las
señales más representativas de cada uno de los grupos funcionales y
comparar con las correspondientes en los espectros de referencia.
PREGUNTAS
1. Discuta los métodos que se pueden emplear para analizar por espectroscopía
infrarroja, las sustancias que solo son solubles en agua, que ventajas y que
limitaciones tiene?
4. ¿Cree usted que es válido identificar una sustancia solamente con su espectro
infrarrojo? Explique.
69
CROMATOGRAFIA DE GASES
PRINCIPIOS TEORICOS
70
DETERMINACION DEL CONTENIDO DE ETANOL EN UNA BEBIDA
ALCOHOLICA POR EL METODO DEL ESTANDAR INTERNO.
PROCEDIMIENTO
ANALISIS CUANTITATIVO
ppm * FD
%etanol
10 4
71
POLARIMETRÍA
OBJETIVO
Conocer el polarímetro y su funcionamiento.
Analizar cuantitativamente una sustancia ópticamente activa en una
muestra problema, empleando el método de estándar externo.
DISCUSIÓN TEÓRICA
La polarimetría es una técnica sensible, no destructiva para medir la actividad
óptica de compuestos orgánicos e inorgánicos que son ópticamente activos.
Las sustancias, que se llaman ópticamente activas, hacen girar en forma
característica el plano de la luz polarizada porque dichas sustancias tienen poder
óptico rotatorio.
La luz se propaga en todas las direcciones. Para una radiación determinada se
pueden obtener los vectores en X o en Y resultantes de la combinación de todos
los vectores en X o en Y de todos los componentes de esa radiación. La luz
polarizada resulta cuando una radiación pasa a través de un medio que de alguna
manera "elimina" uno de los dos planos resultantes, generando un rayo orientado
en una sola dirección.
La rotación óptica es el fenómeno por el cual el plano de polarización de un rayo
de luz es rotado durante el paso a través de un material. La magnitud de la
rotación causada por una sustancia ópticamente activa está determinada por la
estructura molecular de dicha sustancia y depende de la concentración de la
sustancia.
Cada sustancia tiene su propia rotación específica que puede expresarse por la
ley de Biot:
100
T
Cl
donde:
T rotación específica
l longitud del camino óptico en decímetros,
Longitud de onda
T temperatura en oC,
Rotación óptica
C concentración en g/ 100 mL
si + (giro en el sentido de las manecillas del reloj), la sustancia es dextrógira.
si - (giro en sentido contrario a las manecillas del reloj ), la sustancia es
levógira.
La rotación es afectada por la temperatura, la concentración y la longitud de
onda, como se verá en la siguiente discusión:
72
La temperatura
Los cambios en la temperatura afectan la rotación producida por una
solución o por un líquido por varias razones; por ejemplo, al aumentar la
temperatura se incrementa la longitud de la celda y la densidad de la
sustancia disminuye, lo que causa que haya un menor número de moléculas
ópticamente activas que desvíen el plano de la luz polarizada, también se
producen cambios en el poder rotatorio por asociación o por choques entre
las moléculas, igualmente cuando la temperatura se disminuye también
afecta la capacidad de la sustancia de producir desviación del plano de la luz
polarizada. En resumen el efecto de la temperatura sobre el poder rotatorio
de una sustancia se puede expresar por la siguiente ecuación:
T = 20 + Z ( t - 20 )
donde:
T temperatura en grados centígrados
Z coeficiente de rotación con la temperatura, propio de cada sustancia.
La concentración
No siempre la relación entre la concentración y la rotación es lineal, pero sí
hay algunas relaciones entre la concentración y la rotación que pueden
usarse para análisis cuantitativo, estas relaciones son:
= A + Bq (Lineal)
= A + Bq + Cq2 (Parabólica)
A Bq
= C q (Hiperbólica)
73
= 589.3 nm entre la lámpara y el polarizador. Para medidas con luz de
otras longitudes de onda se pueden utilizar otras lámparas y otros filtros.
La polarimetría se puede aplicar tanto en análisis cualitativo como
cuantitativo.
Cualitativo
La rotación óptica de un compuesto puro es una constante física que
contribuye a la identificación y cualificación de sustancias, tanto en el
laboratorio como en control de procesos en fábricas.
Cuantitativo
Hay tres formas de cuantificar una sustancia óptimamente activa en una muestra:
1. Ya se había dicho que la rotación específica de una sustancia se puede
expresar por la siguiente ecuación; = 100 / C l, si se despeja
concentración se tiene:
100
C
T l
Esta ecuación permite conocer la concentración de una sustancia ópticamente
activa en una muestra, si se conocen los valores de , y l que es la
longitud de la celda.
2. Gráficamente se puede, como ya se dijo, obtener una curva de Vs
Concentración y en ella por interpolación, calcular la concentración de la
sustancia ópticamente activa en la muestra problema.
3. Sacarimetría:
Uno de los usos más comunes de la polarimetría es el análisis de azúcares,
puede suceder que la sacarosa sea el único constituyente ópticamente activo
en la muestra y entonces se puede calcular su contenido por el método gráfico
o por la ley de Biot visto anteriormente.
Si además de la sacarosa hay en la muestra otras sustancias ópticamente
activas, se puede cuantificar la sacarosa determinando el cambio en la rotación
por hidrólisis ácida, esta reacción hace que la sacarosa se "invierta" para
formar glucosa y fructosa según la siguiente reacción:
C12H22O11 + H2O Ácido
C6H12O6 + C6H12O6
Sacarosa Fructuosa Glucosa
+ 66.6 - 93 + 52.5
Según la ecuación anterior, debido a la inversión, la rotación específica cambia
de 66.6 a (-93 + 52.5) / 2 = - 20.2. Si se mide el cambio de rotación después
de la inversión es posible determinar la cantidad de sacarosa que contiene la
muestra aún en presencia de otras sustancias ópticamente activas.
74
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN EN LA ROTACIÓN ÓPTICA.
PROCEDIMIENTO
a. Preparar una solución madre de glucosa o de tartrato de sodio y potasio,
pesando con exactitud entre 15 y 20 g. de la sustancia y disolviéndola con
agua destilada, llevar a volumen en balón volumétrico de100 mL y
homogenizar la solución. A partir de esta solución, preparar soluciones patrón
de diferentes concentraciones, tomando 10, 15, 20 y 25 mL y diluirlos a 100 en
balones volumétricos para trabajar la curva de calibración.
b. Llenar la celda del polarímetro con el agua destilada
c. Cuadrar el cero del equipo con el tornillo plateado (ubicado al lado del equipo)
de tal forma que los 2 ceros que aparecen en la escala del polarímetro
coincidan, de esta manera se realiza la lectura del cero.
d. Purgar y llenar la celda con la solución a la cual se le va a medir el ángulo de
rotación.
e. Si la sombra aparece al lado izquierdo, rotar el tornillo plateado hacia adelante.
f. Leer tanto las soluciones patrón como la muestra problema, teniendo en
cuenta cuadrar el cero antes de hacer cada lectura.
g. Hacer una gráfica de la rotación Vs concentración de la sustancia ópticamente
activa en las soluciones patrón y por interpolación, calcular el contenido de la
sustancia en la muestra problema.
h. Informar el resultado en gramos de sustancia ópticamente activa por 100 mL
de solución teniendo en cuenta diluciones, si estas fueron necesarias.
PROCEDIMIENTO
a. Preparación de la solución de acetato de plomo:
Pesar 0.6 g de acetato de plomo y disolver con aproximadamente 7 mL de
agua, agitar.
b. Pesar aproximadamente 4.0-5.0 g de chocolate, chocolisto u otro alimento que
contenga azúcar, adicionar aproximadamente 4 mL de alcohol, agregar cerca
de 40 mL de agua y calentar durante 15 minutos al baño maría, agitando
constantemente con una varilla de vidrio, dejar enfriar y trasferir la solución a
un balón volumétrico de 100 mL; esta solución filtrarla al vacío, del filtrado
pipetear 30 mL con pipeta volumétrica y llevarlos a un balón volumétrico de 50
mL, añadir la solución de acetato de plomo(los 7 mL con el fin de clarificar la
solución), llevar a volumen, homogenizar, transferir esta solución a un beaker
75
de 100 mL y dejar en reposo durante 30 minutos, filtrar en un beaker en forma
rápida el sobrenadante, usar un embudo y papel. Medir el ángulo de rotación
de esta solución.
c. Calcular el porcentaje de azúcar en la muestra de chocolatina, míster tea,
nestea etc, aplicando la ecuación de la ley de Biot
100
C
T l = ws (g / 100 mL)
% Sacarosa = ws / g muestra 100
RESIDUOS
Los residuos se recogen en botellas de vidrio ubicadas en el puesto # 73 rotuladas
como: Residuos análisis de azúcar en un alimento, composición: complejos
orgánicos de plomo, etanol y acetato de plomo, los cuales posteriormente se
depositan en un garrafón grande de plástico ubicado en la mesa de madera donde
están los residuos líquidos tóxicos y se encuentra rotulado como: residuos metales
pesados selectivos, composición: mezcla de azúcar, complejos orgánicos acetato
de plomo. Etanol, los cuales posteriormente los recoge ASEI.
SACARIMETRÍA
PROCEDIMIENTO
1. Obtener una muestra de cualquier producto (sirope, miel de caña, azúcar, etc.).
Pesar con exactitud entre 15 y 20 g de la muestra en un vaso de precipitados,
disolverlos con agua destilada y transferir la solución a un balón volumétrico de
100 mL haciendo lavados con pequeñas porciones de agua destilada.
2. Agregar a la solución en el balón volumétrico, una o dos gotas de NaOH 1.0 M
y mezclar bien para asegurar que la molécula de sacarosa permanezca tal
cual.
3. Completar el volumen hasta los 100 mL con agua destilada y agitar para
homogenizar la solución.
4. Llenar la celda del polarímetro con la solución anterior y leer su ángulo de
rotación teniendo cuidado de cuadrar el cero del equipo antes de hacer la
lectura de la solución de la muestra problema.
5. Transferir 50 mL de la solución restante a otro balón volumétrico de 100 mL,
agregarle 5 mL de ácido clorhídrico concentrado. Insertar el termómetro y
calentar al baño maría hasta 68C, sacar el frasco del baño y dejar que la
solución se enfríe unos tres grados y luego volver a colocar en el baño por
cinco minutos, o sea mantener la solución a 65 C durante cinco minutos.
Retirar el frasco del baño y enfriar la solución a 30C, colocar el balón con la
solución en un baño a temperatura de 20C, esperar a que se alcance el
76
equilibrio térmico, completar a 100 mL con agua destilada. y homogenizar la
solución.
6. Medir la rotación óptica de esta solución, recordar que el valor de la rotación
óptica obtenido aquí debe multiplicarse por dos porque solo se emplearon 50
mL de la solución original y se diluyeron a 100 mL para hacer la última medida.
7. Con los datos obtenidos calcular el contenido de sacarosa en la muestra
analizada basándose en la estequiometría de la inversión de la sacarosa
8. Informar el porcentaje de sacarosa en su muestra problema.
9. NOTA: Si el azúcar utilizada es blanca siga el anterior procedimiento si es
morena proceda de la siguiente forma luego del ítem 3 proceda a pipetear 10
mL de la solución anterior y llevarlos a un balón volumétrico de 50 mL, acá
proceda a leer el ángulo de rotación y realizar lo mismo con el ítem 5 o sea
luego de llevar a volumen (100 mL), pipetear de esta solución 10 mL y
trasvasarlos a un balón volumétrico de 50 mL, enrasar y leer el ángulo de
rotación.
10. Recuerde tener en cuenta los factores de dilución para el cálculo del porcentaje
de sacarosa.
después inversión - antes de la inversión = -1.7479 ws
% sacarosa = ws / g azúcar 100
RESIDUOS:
Los residuos se recogen en botellas de vidrio ubicadas en el puesto# 73 rotuladas
como: Residuos Determinación del contenido de azúcar en sacarosa por
polarimetría, los cuales posteriormente se neutralizan (ver instructivo ITR-3514-08-
04 ) y se descartan por el alcantarillado.
77
ESPECTROSCOPÍA ATÓMICA
OBJETIVOS
Conocer un espectrofotómetro de llama, y algunos detalles de su
funcionamiento.
Cuantificar un metal en una muestra problema por emisión atómica.
MARCO TEÓRICO
Cuando un átomo de un elemento es sometido a la acción de una radiación lo
suficientemente energética, sus electrones son promovidos de su estado basal o
no excitado a niveles mas altos de energía y si se mide esta energía absorbida se
está trabajando en el modo de absorción atómica. Los átomos en este estado
excitado no son estables y tienden a emitir la radiación absorbida, si esta radiación
emitida se mide, se está trabajando en el modo de emisión atómica.
En cualquiera de los dos casos la cantidad de radiación involucrada en el
fenómeno de absorción o de emisión es proporcional a la concentración del analito
(elemento) que se está estudiando.
Cuando la luz emitida por un átomo excitado pasa a través de una pequeña
rendija y es dispersada por un prisma o por una rejilla, el espectro resultante
consiste en pequeñas líneas discretas y se llama espectro de líneas, este espectro
es obtenido por exposición de un material al calor de la llama, pasando una chispa
eléctrica de alto voltaje a través del elemento en estado gaseoso o generando un
arco eléctrico entre electrodos uno de los cuales es del elemento que va a ser
excitado.
En fotometría de llama una solución que contiene una sal del elemento de interés
es atomizada en la llama de temperatura apropiada, la cual tiene varias funciones
como son; evaporar el solvente, vaporizar la sal y disociar las moléculas
produciendo átomos neutros disponibles para absorber la radiación cuya energía
coincide con la de sus transiciones electrónicas. Las líneas más útiles
corresponden a la transición del estado fundamental a uno de sus estados
excitados (líneas de resonancia).
La espectroscopía de absorción o de emisión atómica también está regida por la
ley de Beer pero su linealidad es limitada a algunas concentraciones (rango lineal)
debido a que en la llama suceden algunos otros eventos que afectan la relación
lineal entre la absorbancia o la emisión y la concentración del elemento en la
muestra.
Las siguientes son algunas de las llamas apropiadas para algunos elementos y las
concentraciones para calibración.
78
Metales en Absorción Atómica
CONCENTRACIÓN
ELEMENTO PARA CALIBRAR EN GASES TIPO DE LLAMA
0.4 DE ABS (mg/L) *
ANTIMONIO 3.3 AIRE/ACETILENO ESTEQUIMÉTRIC
CADMIO 3 AIRE/ACETILENO ESTEQUIMÉTRIC
CALCIO 1.4 AIRE/ACETILENO RICA
CROMO 4.5 AIRE/ACETILENO RICA
COBALTO 7.4 AIRE/ACETILENO POBRE
COBRE 3.7 AIRE/ACETILENO POBRE
HIERRO 5.5 AIRE/ACETILENO POBRE
MAGNESIO 0.3 AIRE/ACETILENO ESTEQUIMÉTRIC
MANGANESO 2.6 AIRE/ACETILENO POBRE
NIQUEL 5.7 AIRE/ACETILENO POBRE
PLOMO 9.4 AIRE/ACETILENO ESTEQUIMÉTRIC
POTASIO 1.1 AIRE/ACETILENO ESTEQUIMÉTRIC
SODIO 0.5 AIRE/ACETILENO POBRE
ZINC 1.2 AIRE/ACETILENO POBRE
PROCEDIMIENTO
79
MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE SODIO EN
JUGOS DE TUTTI FRUTI O HIT (MANGO, NARANJA, PIÑA, UVA, LULO,
MANDARINA, MORA, TROPICAL O SALPICON)
ANÁLISIS
Leer en el espectrofotómetro de emisión de llama, la emisión de las soluciones
estándar y de la solución de la muestra problema.
80
A partir del Li2CO3 (disuelva 5.324 gramos de carbonato de litio, en un volumen
mínimo de HCl 1:1 y diluya hasta un litro con agua destilada.
En 6 balones volumétricos de 100 mL pipetear Cloruro de sodio de 0 ppm, 10 ppm,
20ppm, 40 ppm, 60 ppm y 80 ppm, añadir a cada solución 100 ppm del ion litio.(10
mL)
El balón volumétrico que tiene 0 ppm de sodio debe llevar 100 ppm del ion Litio,
este servirá de blanco
Al filtrado del jugo se le debe agregar 100 ppm de litio y luego llevar a volumen en
el balón volumétrico de 100 mL.
ANÁLISIS
Leer en el espectrofotómetro de emisión de llama, la emisión de las soluciones
estándar y de la solución de la muestra problema, las longitudes de onda del sodio
y del litio son:
Na, = 589 nm y Slit = 0.2
y Li +2 , = 670.8 nm y Slit = 0.7.
RESIDUOS
Se depositan así: La muestra en un garrafón plástico rotulado como residuos para
neutralizar, los estándares se desechan por el desagüe.
81
min., enfriar, filtrar en un balón volumétrico de 100 mL, lavar el residuo con
porciones de 15-20 mL de HCl al 1%, completar a volumen con agua.
82
ANÁLISIS DE SODIO Y POTASIO EN CEMENTO POR EL METODO DEL
ESTANDAR INTERNO
OBJETIVO
Aplicar las técnicas de fotometría de llama a un análisis industrial.
PROCEDIMIENTO
Preparar las siguientes soluciones de provisión:
1. Solución de sodio de 100 ppm (0.1 mg de Na/mL); disolver 0.254 g de NaCl en
un litro de agua desionizada.
2. Solución de potasio de 100 ppm (0.1 mg de K/mL); disolver 0.190 g de KCl en
un litro de agua desionizada.
3. Solución de calcio de 5000 ppm (5.0 mg de Ca/mL); disolver 12.4 g de CaCO 3
en 400 mL de HCl 1:3 (V/V) y diluir con agua desionizada hasta un litro.
4. Tratamiento de la muestra.
Nota: en todos los casos se debe emplear agua destilada.
Triturar una muestra representativa de cemento, pesar en un vaso de
precipitados, entre 3.0-4.0 g si el cemento es gris , o entre 1.5-2.0 g si el
cemento es blanco, agregar en el vaso 40 mL de agua desionizada y luego
agregar lentamente 5mL de HCl concentrado tapar el vaso con un vidrio de
reloj, calentar con agitación durante unos 15 minutos a una temperatura cerca
al punto de ebullición, dejar enfriar y llevar a volumen en un balón volumétrico
de 100 mL, filtrar a través de papel de filtro de textura media recogiendo el
filtrado en un beaker de 100 mL, si el cemento es gris pipetear de este filtrado
10 mL y transferir a un balón volumétrico de 50 mL, agregarle 10 mL de la
solución de Calcio de 5000 ppm y llevar a volumen con agua destilada.
Si la muestra es cemento blanco, pipetear 40 mL del filtrado y transferirlo a un
balón volumétrico de 50 mL, agregarle 10 mL de la solución de 5000 ppm de
calcio y llevar a volumen, agitar bien para homogenizar las soluciones.
5. Preparación de las soluciones patrón.
En seis balones volumétricos de 50 mL colocar en cada uno 10 mL de solución
de calcio de 5000 ppm que va a servir como estándar interno, pipetear luego1
mL, 2 mL, 4mL, 8 mL, 15 mL y 20 mL de la solución de cloruro de sodio a los
balones volumétricos 1, 2, 3, 4, 5 y 6 respectivamente, completar a volumen
todas las soluciones incluyendo la del balón número 6 que se va a emplear
como blanco (esta debe llevar 10 mL de solución de calcio y se lleva a 50 mL
con agua destilada).
6. En cinco balones volumétricos de 50 mL colocar en cada uno 10 mL de
solución de calcio de 5000 ppm, el cual va a servir como estándar interno
pipetear luego1 mL, 2 mL, 4 mL 8 mL, y 20 mL de la solución de cloruro de
83
potasio a los balones volumétricos 1, 2, 3, 4 y 5 completar a volumen con agua
destilada agitar bien para homogenizar las soluciones.
Nota: Todas las once soluciones anteriores se conservan hasta cuando termine
el experimento.
7. Siguiendo las instrucciones de manejo del equipo seleccionar la longitud de
onda del sodio (589 nm), empleando la solución mas concentrada de sodio y
con la tecla de option energy encontrar la longitud de onda del sodio. A esta
longitud de onda leer la emisión de todas las soluciones patrón para obtener
una curva de calibración y también de la solución del cemento problema.
8. Seleccionar ahora la longitud de onda del calcio, = 422.7 nm y Slit = 0.7, a
esta longitud de onda y con las soluciones de calcio obtener la emisión tanto
de las soluciones patrón como de la solución del cemento problema.
9. Siguiendo las instrucciones de manejo del equipo seleccionar la longitud de
onda del potasio = 766.5 nm y Slit = 0.7, empleando la solución más
concentrada de potasio y con la tecla de option energy encontrar la longitud de
onda del potasio. A esta longitud de onda, leer la emisión de todas las
soluciones patrón para obtener una curva de calibración y también de la
solución del cemento problema y la del blanco.
10. Aspirar finalmente agua destilada para limpiar el equipo y apagar la llama
cerrando las llaves del acetileno primero y luego la llave del aire, eliminar
gases con tecla de gases on /Off.
RESIDUOS
Los residuos de la muestra se recogen en garrafa plástica ubicada en el Puesto #
73 rotulada como: residuos determinación de Na y K en cemento, composición :
cemento, hierro, sulfatos, calcio, sodio, ácido ,los cuales posteriormente se
neutralizan (ver instructivo ITR-3514-08-04) y se descartan por el desagüe.
84
EFECTO DE LA COMPOSICION Y DE LA VISCOSIDAD
Preparar tres soluciones patrón de H3BO3 al 2% en metanol al 20%
H3BO3 al 2% en metanol al 40%
H3BO3 al 2% en metanol al 60%
Determine el efecto de la viscosidad, leer cada una de las soluciones anterior a la
longitud de onda del Boro = 471.2 y Slit = 0.7, teniendo en cuenta cuadrar el 0
del equipo con agua.
La viscosidad de la solución de H3BO3 al 2% con metanol al 20% es de 2.40 CP
La viscosidad de la solución de H3BO3 al 2% con metanol al 40 % es de 2.35 CP
La viscosidad de la solución de H3BO3 al 2% con metanol al 60% es de 2.15 CP
Preparar las siguientes soluciones que contengan cada una de ellas 200 ppm de
Calcio preparadas a partir de:
a. CaCl2/ 200 ppm de Ca
b. Ca(NO3 )2 200 ppm de Ca
c. CaCl2 /H3PO4 0.1M, de 200 ppm de Ca
d. CaCl2 /AlCl3 0.1 M, de 200 ppm de Ca
Emplear la longitud de onda del Calcio = 422.7 nm y Slit = 0.7 y leer la emisión
de cada una de las soluciones.
Colocar la lámpara de calcio y leer las soluciones de calcio en el modo de
absorción atómica para comparar los resultados del análisis por ambas
técnicas (Emisión y Absorción Atómica)
TRATAMIENTO DE DATOS
Graficar los datos de Porcentaje de Emisión Vs Viscosidad
Correlacionar en una tabla el efecto de la composición iónica y las intensidades de
las lecturas para cada una de las soluciones de 200 ppm de calcio.
Que conclusiones generales pueden sacarse del efecto iónico y de la absorción y
emisión de las diferentes soluciones de calcio.
-
85
ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
OBJETIVO
Aprender el funcionamiento y uso de un instrumento de absorción atómica,
teniendo en cuenta los cambios con respecto al equipo de emisión.
Analizar la relación que existe entre la absorción de radiación y la
concentración de un ión metálico en solución.
Determinar el contenido de un metal en una muestra problema, empleando
el método de absorción atómica.
MARCO TEÓRICO
La absorción atómica se fundamenta en que los átomos individuales también
absorben radiación ultravioleta y visible para alcanzar estados electrónicos
excitados.
Los espectros de absorción atómica son mas simplificados que los espectros de
absorción molecular debido a que los estados de energía electrónicos no tienen
subniveles de energía vibracional ni rotacional y en este método de análisis se
obtienen espectros de líneas muy definidas que permiten analizar con gran
selectividad un metal aún en presencia de otras sustancias en solución.
Cada metal tiene unas líneas características y generalmente se emplea una línea
que es la más fuerte y que corresponde a la diferencia de energía entre el estado
basal y el primer estado excitado del elemento
La absorción de radiación por átomos neutros en estado gaseoso es, en la
mayoría de los casos, directamente proporcional a la cantidad de átomos
presentes en la solución. Lo anterior se aprovecha para hacer análisis cuantitativo.
En absorción atómica se requiere una lámpara de cátodo hueco del material que
se va a utilizar, que sirve como fuente de la radiación, pero también es necesario
tener el elemento en estado atómico ya sea mediante llama, arco o chispa.
PROCEDIMIENTO
1. A partir de un compuesto puro y soluble que contenga el elemento que se va a
determinar preparar una solución madre de 100 ó de 50 ppm del elemento.
2. A partir de la solución madre preparar soluciones estándar de concentraciones
conocidas que estén dentro del rango de linealidad del elemento.
3. Extraer el elemento de interés de la muestra problema sometiéndola al
tratamiento apropiado en cada caso.
4. Siguiendo las instrucciones para el manejo del espectrómetro de llama,
seleccionar la longitud de onda más apropiada para analizar el elemento de
86
interés y optimizar esta longitud de onda y los parámetros necesarios para el
análisis.
5. En la longitud de onda seleccionada leer la absorción de cada una de las
soluciones patrón y de la muestra problema, teniendo en cuenta que antes de
aspirar cada una de las soluciones se debe limpiar el instrumento aspirando el
blanco (en la mayoría de los casos es agua desionizada).
6. Apagar el equipo y dejarlo en orden.
MÉTODO I
DETERMINACIÓN DE HIERRO EN UN FERTILIZANTE. EFECTO DEL ANCHO
DE RANURA Y DE LA LONGITUD DE ONDA
PROCEDIMIENTO
Macerar un poco de fertilizante verde y pesar entre 0.18 mg y 0.9 mg de éste en
un beaker de 100 mL, ( si el fertilizante es blanco-grisáceo pesar entre 0.6-0.8 mg)
agregar 40 mL de agua destilada y 3 mL de ácido clorhídrico concentrado, calentar
durante 15 minutos con el recipiente tapado, dejar enfriar.
Si el fertilizante es verde proceda así: En un balón volumétrico de 500 mL, filtrar y
hacer lavados con agua destilada, hasta aproximadamente 200 mL, recogiendo
los lavados en el balón de 500 mL completar a volumen con agua destilada,
homogenizar muy bien.
Si el fertilizante es blanco- grisáceo pipetear de la solución anterior 20 mL,
transferir a un balón volumétrico de 50 mL, hacer lavados con porciones de 10 mL
de agua (4 lavados), completar a volumen con agua.
87
a = 386 y Slit = 0.7 para el Fe +2
RESIDUOS
CALCULOS
7. Graficar en un solo grafico las absorbancias de Hierro Vs concentración a
distintas longitudes de onda y Graficar absorbancia de Hierro Vs concentración
a los dos anchos de ranura
8. Seleccionar de este grafico la mejor longitud de onda y el mejor ancho de
ranura.
9. Realizar los respectivos cálculos y teniendo en cuenta la lectura en el grafico y
multiplicando por el respectivo factor de dilución. Informar el % de hierro en el
fertilizante.
PREGUNTAS
a. Qué sucede en la llama cuando se analiza una sustancia por el método de
absorción atómica?
b. Cuál de los dos métodos, absorción o emisión atómica, es más sensible para la
mayoría de los elementos? Justificar la respuesta.
c. Escriba la fuente que se emplea en este método de análisis y diga como
funciona dicha fuente.
d. El espectro de emisión de una lámpara de cátodo hueco consiste en un gran
número de líneas pero solo algunas de estas líneas son absorbidas por una
llama que contiene el elemento que se está estudiando. ¿A qué se debe esto?
e. Cuando se trabaja con llama, tanto en absorción como en emisión atómica, se
presentan cuatro tipos de interferencias que son: absorción de fondo,
interferencia de líneas espectrales, vaporización y efectos de ionización. En
qué consiste cada una de estas interferencias y cómo se puede corregir?
88
MÉTODO II
DETERMINACIÓN DE COBRE EN UN ABONO FOLIAR POR EL METODO DE
LA ADICION DE ESTANDAR
Idealmente ,los estándares de calibrado deben aproximarse a la composición de
las muestras a analizar, no solo respecto a la concentración de analito sino
también respecto a la concentración de las otras especies de la matriz de la
muestra, con el objeto de minimizar los efectos de los diversos componentes de la
muestra en la medida de la absorbancia.
El método de adición de estándar implica la adición de uno o mas incrementos del
mismo tamaño de la solución estándar a las alícuotas de la muestra. Cada
solución se diluye entonces a un volumen fijo antes de la medida de la
absorbancia.
Lo que se hace es mantener constante el volumen de la muestra y variar las
concentraciones de los estándares, lo contrario del método del estándar interno.
El grafico que se realiza será de esta forma:
PROCEDIMIENTO
2. Macerar una muestra representativa del abono foliar, pesar alrededor de 500
mg de muestra en un beaker, agregar 50 mL de agua destilada, 3.0 mL de
HNO3 concentrado y 3.0 mL de HCl, someter a digestión durante media hora,
89
dejar enfriar, filtrar en un balón volumétrico de 100 mL, hacer lavados con
porciones de 10 mL de agua (hacer 4 lavados) y completar a volumen con
agua destilada.
3. A 4 balones volumétricos de 100 mL, adicionar 20 mL (con una pipeta
volumétrica) de la muestra (abono foliar), y luego a cada balón adicionar 0 mL,
5mL, 10mL y 15 mL de una solución de 100 ppm de Cu , enrasar (100 mL) con
agua destilada
4. Leer en el espectrofotómetro la absorción de los estándares y de la solución de
la muestra Cu +2 = 324.8 y Slit = 0.7.
5. Para hacer el análisis cuantitativo interpolar la absorción de la solución de la
muestra problema en la curva de calibración obtenida graficando absorción vs.
la concentración del cobre en las soluciones estándar. (recuerde al graficar
como se le indica en la parte anterior).
6. Informar el contenido de cobre en el abono en porcentaje en peso, extrapolar la
muestra en el grafico y no olvide multiplicar por el factor de dilución.
RESIDUOS
Se recogen los residuos en garrafa plástica ubicada en el puesto # 73 rotulada
como residuos determinación de cobre en abono foliar por absorción atómica
Composición: Cu +2, ácido, cloruros y nitratos. Los residuos anteriores se
depositan en el garrafón de plástico grande ubicado en la mesa de madera donde
están los residuos líquidos y rotulada como: residuos metales pesados selectivos,
caracterización del residuo: mezcla: Cu +2, H3 O+, Cl-, NO3 - , los cuales los recoge
posteriormente la empresa ASEI.
MÉTODO III
DETERMINACIÓN DE MANGANESO EN SUELOS
PROCEDIMIENTO
1. Macerar unos 10 g del suelo (I; II; III o IV), pesar exactamente entre 1.0 y 1.5 g,
agregar 50 mL de agua destilada, 3.0 mL de HNO 3, 3.0 mL de HCl, someter a
digestión durante 30 minutos, trasferir a un balón volumétrico de 100 mL,
haciendo unos cuantos lavados con agua destilada y completar a volumen.
2. Filtrar en un beaker de 100 mL unos 50 mL de la solución anterior, continuar
con el Ítem 3 o 4 dependiendo del suelo que utilizo.
3. Para el suelo II y IV pipetear 10 mL de la solución anterior en un balón
volumétrico de 50 mL, aforar con agua y homogenizar.
4. Para el suelo III y luego de realizar el procedimiento 1, pipetear 20 mL de la
solución madre, en un balón volumétrico de 50 mL, aforar con agua y
homogenizar.
90
5. A partir de una solución patrón de 50 ppm de Manganeso, preparar 50 mL de
cada uno de los siguientes estándares: de 1 ppm, de 3 ppm, 5 ppm y 6 ppm
6. Leer en el espectrofotómetro la absorción de los estándares y de la solución de
la muestra de suelo empleando la lámpara de Mn +2 su = 279.5 y Slit = 0.2.
7. Para hacer el análisis cuantitativo interpolar la absorción de la solución de la
muestra problema en la curva de calibración obtenida graficando absorbancia
vs. la concentración.
8. Informar el contenido de manganeso en el suelo en porcentaje por peso.
lectura grafico( mg/L) x FD ( volumen final / x al.tom) V (Lt) x100
% Mn = ----------------------------------------------------------------------------------------------
mg pesados de suelo
RESIDUOS
La muestra restante se recogen en garrafa plástica ubicada en el puesto # 73
rotulada como residuos determinación del contenido de Mn +2 en suelos,
composición: manganeso, nitratos, y ácido, los cuales posteriormente se
neutralizan (ver instructivo ITR-3514-08-04) y se desechan por el desagüe.
91
ULTRAVIOLETA
OBJETIVOS
Identificar un compuesto orgánico por su espectro de absorción en el
ultravioleta y cuantificar una muestra problema aplicando la Ley de Beer.
MARCO TEÓRICO
Ya se vio que la luz visible corresponde a radiaciones con longitudes de onda
entre 400 y 750 nm. Más allá del extremo violeta del espectro visible ( menor que
400 nm) está la región ultravioleta.
Los espectrómetros para ultravioleta de uso común miden la absorción de luz en la
región visible y ultravioleta cercano, es decir, en el rango de 200 a 750 nm.
Todas las moléculas pueden absorber radiación en el ultravioleta-visible porque
tienen electrones compartidos o sin compartir que se pueden excitar a niveles de
energía más elevados. Las longitudes de onda en las que ocurre la absorción
dependen de la fuerza con la que están unidos los electrones a la molécula.
Cuando los electrones que están formando enlaces son excitados, se absorbe
radiación de alta energía, o de longitud de onda corta entre 120 y 200 nm, este
rango se conoce como ultravioleta lejano. Cuando las sustancias absorben
radiación por encima de 200 nm se produce la excitación de electrones de
orbitales p, d, y particularmente sistemas -conjugados, dando como resultado
un espectro de bandas anchas especialmente cuando las sustancias están
condensadas porque cuando las sustancias están en fase de vapor se presentan
espectros de estructura fina.
Cada sustancia tiene un espectro característico en el ultravioleta, pero este
espectro cambia un poco dependiendo del solvente utilizado. Por lo anterior, el
espectro ultravioleta puede ser utilizado para identificación teniendo especial
cuidado con el solvente utilizado en cuanto a su identidad y a su pureza, debe ser
grado espectral.
La espectroscopía ultravioleta sirve no solo para identificar sustancias sino
también para hacer análisis cuantitativo utilizando la Ley de Beer.
92
IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACION DE UN COMPUESTO ORGANICO
PROCEDIMIENTO
Cada estudiante recibe un compuesto puro desconocido (sustancia problema) que
puede ser uno tomado de la siguiente lista: Fluoreno, naftaleno, antraceno,
bifenilo, ácido benzóico, ácido 4-aminobenzóico, ácido salicílico, ácido pícrico,
hidroquinona, 1-naftol, 2-naftol y antraquinona. Con el desconocido trabaje la
práctica siguiendo las pautas que se dan a continuación:
93
RESIDUOS
Los residuos se depositan en frascos rotulados como Residuos U.V 1, los cuales
posteriormente se destilan para recuperar el etanol.
PREGUNTAS
a. Discutir la concordancia entre el espectro obtenido en su práctica y el espectro
de la sustancia encontrado en la literatura, con respecto a la localización de
máximos y mínimos en la escala de longitud de onda, si encuentra algunas
diferencias sugiera cuáles son las causas.
b. Calcular la absortividad molar de la sustancia problema a la longitud de onda
de máxima absorbancia y compararla con la absortividad molar de la sustancia
a la misma longitud de onda pero obtenida del espectro modelo.
c. Para la sustancia problema, escribir su estructura química y decir a cuáles
constituyentes de su estructura se debe que esta sustancia presente absorción
en el ultravioleta.
94
ANÁLISIS DE UN SISTEMA DE DOS COMPUESTOS CONTENIENDO
BENCENO Y TOLUENO
MARCO TEÓRICO
Las absorbancias de estas dos sustancias son aditivas. Por ello la absorbancia de
una solución que contenga benceno y tolueno es la suma de las absorbancias
individuales de los dos componentes. Esta regla se aplica a cualquier longitud de
onda y puede expresarse en un sistema de ecuaciones de la forma:
A = AB +AT
n n n
como A=bC
entonces:
A = B( )bCB+ T( )bCT
1 1 1
95
mientras que el tolueno presenta un pico nítido. Por lo tanto a 269 nm, para una
solución que contenga cantidades comparables de benceno y tolueno, o más
tolueno que benceno, la absorbancia total puede considerarse (en primera
aproximación) debida solo al tolueno. De esta manera se mide directamente la
concentración del tolueno; la concentración de benceno puede encontrarse
entonces midiendo la absorbancia a cualquier otra longitud onda, por ejemplo a
248 nm, donde el benceno muestra un máximo de absorbancia y el tolueno tiene
absorbancia mucho menor.
REACTIVOS
Benceno
Tolueno
Etanol
Nota: RA o preferentemente de calidad “espectroscópica”
PROCEDIMIENTO
CURVAS DE ABSORCIÓN
Preparar soluciones de benceno en etanol de la siguiente forma: Pesar 0.05 g de
de benceno en un pesasustancias, trasferir a un balón volumétrico de 25 mL, diluir
hasta el aforo con etanol y agitar bien (solución A). Pipetear 1.0 mL de la solución
A a un balón volumétrico de 25 mL, diluir hasta el aforo con etanol y agitar bien
(solución B). Finalmente pipetear alícuotas de 2.0; 4.0; 5.0 y 6.0 mL de la solución
B en cuatro balones volumétricos de 25 mL y completar como antes a 25 mL con
etanol. Denominar C, D, E, F, respectivamente, a estas soluciones.
Utilizar la solución E del benceno para obtener el espectro de absorción, usando
etanol como “blanco” medir la absorbancia entre 200 y 300 nm. Deben utilizarse
cubetas de cuarzo en el espectrofotómetro de UV. Repetir el procedimiento
anterior utilizando tolueno en lugar de benceno.
96
cada una de las siguientes longitudes de onda; 243, 249, 255 y 261 nm. Para cada
longitud de onda (donde la absorbancia es máxima) trazar la gráfica absorbancia
Vs concentración para calcular la absortividad molar.
De modo semejante medir la absorbancia de las correspondientes soluciones de
tolueno de la muestra problema a las longitudes de onda de máxima absorbancia
en las vecindades de cada una de las siguientes longitudes de onda; 262 a 269
nm.
Las gráficas deben ser líneas rectas pasando por el origen, lo que índica la validez
de la Ley de Beer (la absorbancia es directamente proporcional a la
concentración).
La pendiente de la línea de la gráfica de la Ley de Beer es la absortividad molar,
pudiendo calcularse esta si la concentración se expresa en moles por litro.
Calcular así la absortividad molar del benceno a las longitudes de onda de máxima
absorbancia encontradas en las vecindades de 243, 249, 255, y 261 nm y del
tolueno en las longitudes de onda de máxima absorbancia en las vecindades de
262 y 269 nm.
Seleccionar para cada compuesto, benceno y tolueno, la longitud de onda mas
apropiada y en ellas calcular por interpolación la concentración de cada uno de
estos compuestos en la muestra problema.
97
244 nm) corresponda un mínimo para el tolueno (aproximadamente = 266 nm),
y viceversa.
A estas dos longitudes de onda máximas leer la absorbancia de cada uno de las
soluciones B o sea de la máxima del tolueno y de la = 266 nm y de la = 244
nm correspondiente al benceno, leer la absorbancia de la muestra problema tanto
a la longitud de onda de máximo del benceno y de la longitud de onda de máxima
de tolueno.
Empleando las ecuaciones simultaneas hallar la concentración en ppm de
benceno y tolueno en la muestra desconocida.
RESIDUOS
Los residuos se depositan en frascos rotulados como Residuos U.V 2,
posteriormente el etanol se recupera por destilación
SOLUCIONES NECESARIAS
1. Cloroformo grado espectroscópico o de la mayor pureza posible pues de su
calidad depende también la calidad del análisis.
2. Solución de bicarbonato de sodio al 4% al cual se le adicionan unas gotas de
HCl concentrado.
98
PROCEDIMIENTO
1. Triturar una muestra representativa del medicamento, pesar una cantidad
apropiada y disolverla con 80 mL de cloroformo, en un vaso de precipitados.
Agitando con varilla de vidrio. Transferir la solución a un embudo de separación
de 250 mL lavando varias veces el vaso de precipitados con cloroformo y
recogiendo todos estos lavados en el embudo de separación. Extraer la
solución dos veces con 40 mL de solución de bicarbonato de sodio al 4%
enfriado previamente, luego hacer una nueva extracción pero ahora con 20 mL
de agua destilada fría, lavar 3 veces los extractos acuosos combinados con
porciones de 25 mL de cloroformo y agregar estas porciones de lavado con
cloroformo a la solución original de cloroformo. Antes de continuar se debe
acidular la solución original de bicarbonato para evitar la hidrólisis de la
aspirina.
Filtrar la solución de cloroformo a través de un papel de filtro previamente
empapado en cloroformo con el objeto de remover el agua, recoger el filtrado
en un balón volumétrico de 250 mL, diluir hasta la marca con cloroformo y
homogenizar la solución. Tomar luego dos (2) mL de esta solución y diluirla
hasta 100 mL con cloroformo.
2. Acidificar la solución de bicarbonato que aún está en el embudo de separación
agregando lentamente 25 mL de ácido sulfúrico 1molar, el pH de la solución
debe quedar entre 1 y 2 (medir con papel indicador). Extraer la solución ácida
con 8 porciones sucesivas de 25 mL de cloroformo y filtrar los extractos a
través de papel de filtro empapado con cloroformo a un balón volumétrico de
250 mL, completar a volumen con cloroformo, homogenizar la solución. Sacar
de esta solución una alícuota de 10 mL y diluirla con cloroformo a 100 mL en
un balón volumétrico.
Nota: Las etapas de separación de los componentes, descritas en los numerales
anteriores se deben seguir cuando se va a analizar un medicamento como tal,
estas etapas no son necesarias cuando se trabaja con soluciones de los
compuestos puros como es el caso de este laboratorio.
En esta práctica se va a analizar cuantitativamente una mezcla que puede
contener una combinación de cualquiera de los siguientes compuestos; aspirina,
cafeína, fenacetina empleando sus espectros en el ultravioleta y el espectro
también en el ultravioleta de la muestra problema. Para lograr los objetivos se
deben seguir los siguientes pasos:
99
3. Pipetear 2mL de la solución estándar de 100 ppm cafeína en un balón
volumétrico de 10 mL y aforar con etanol
4. Pipetear 2mL de la solución estándar de 100 ppm fenacetina en un balón
volumétrico de 10 mL y aforar con etanol
5. Colocar (en orden alfabético) y en cada celda de cuarzo los estándares de 20
ppm de aspirina, de 20 ppm de cafeína y 20 ppm de fenacetina, no olvide
colocar el blanco (etanol) en otra celda de cuarzo.
6. Obtener el espectro de cada una de las soluciones patrón de aspirina,
fenacetina y cafeína y de la muestrea, entre 330 y 200 nm, recuerde anotar de
que color sale cada espectro para luego determinar cada espectro a que
compuesto corresponde para así determinar cuáles componentes están en la
muestra problema.
7. Por observación de los espectros de los patrones y de la muestra problema
definir que componentes tiene su muestra problema y en base a esto
seleccionar las 2 longitudes de onda correspondientes.
8. A las longitudes de onda seleccionadas leer la absorbancia de los estándares y
de la muestra para cuantificar los componentes de la muestra problema por
multicomponentes.
9. Conociendo cuales son los componentes de la muestra problema y las
concentraciones patrón obtener, de los espectros correspondientes, las
absortividades molares a las longitudes de onda seleccionadas.
10. Con los datos obtenidos calcular la concentración de cada uno de los
componentes de la muestra problema empleando ecuaciones simultáneas y
teniendo en cuenta las diluciones realizadas.
11. Informar el resultado del análisis en términos de ppm (p/v) de cada uno de los
componentes de la muestra estudiada
RESIDUOS
Los residuos se depositan en frascos rotulados como Residuos U.V 3,
posteriormente el etanol se recupera por destilación
100
BIBLIOGRAFÍA
101