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TRITERPENOS Y ESTEROLES DE
Salvia leucantha (LAMIACEAE) Y EVALUACIÓN
DE SU CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
Fecha de recepción: 10 de abril de 2014 • Fecha de aceptación: 30 de mayo de 2014
RESUMEN
1. Grupo de investigación en Productos Naturales, Universidad Distrital Francisco José de Caldas, Bogotá, Colombia.
2. Autor Corresponsal: mikerinos66@hotmail.com
ABSTRACT
In order to improve our understanding of the Colombian flora, particularly those present in the region
of Guavio, the specie Salvia leucantha was selected for further preliminary phytochemical studies, chemical
composition studies and antioxidant bioactivity. Preliminary phytochemical analysis of leafs was carried out
to establish the main groups of secondary metabolites presents, those were analyzed by GC-MS comparing
the obtained spectra with the NIST-08 database, in addition antioxidant activity was determined using DPPH
method. High amounts of pentacyclic triterpenes was determined according to expectations of the genere
Salvia, rich in essential oils and this kind of compounds. This family of compounds is widely used in food, cos-
metics and pharmaceutical industry due to its physicochemical and pharmacological properties; unfortunately
they do not report high inhibition percentages to be classified as strong antioxidants. The present work shows
the results as a first approximation to expansion of chemical knowledge of various Colombian species.
INTRODUCCIÓN
La familia Lamiaceae tiene importancia económi- es el caso de varias especies de los géneros Scute-
ca mundial, ya que básicamente en todos los conti- llaria y Ocimun, principalmente en las comunidades
nentes y culturas el hombre ha utilizado numerosas afrocolombianas e indígenas del litoral pacífico.
especies de labiadas como medicina, condimento o Son también frecuentes en nuestros parques y jar-
alimento. También han sido usadas en numerosos dines algunas especies ornamentales introducidas,
casos como plantas ornamentales muy apreciadas de los géneros Ajuga, Leonotis, Mentha, Ocimum,
por su aroma y por sus flores. Sólo por citar algunas Plectranthus, Salvia, Scutellaria, Stachys y Teucrium,
de las labiadas más comúnmente usadas en nues- y algunas especies nativas del género Salvia (Fer-
tro medio tenemos plantas como la albahaca (Oci- nandez-Alonso, 2006).
mum), alegrías (Scutellaria), marrubio (Marrubium), Son numerosas las actividades biológicas que se
hierbabuena, menta y poleo clásico (Mentha), oré- han reportado en la familia de las labiadas dentro
gano clásico y mejorana (Origanum), orégano ore- de las cuales vale la pena mencionar la actividad
jón (Plectranthus), orégano andino (Mintostachys), antimicrobiana, anti fúngica y actividad antioxidan-
ajedrea y poleo americano (Satureja), Salvia (Sal- te (Esmeralda et al., 2010). Esta última es quizá una
via y Lepechinia), mastranto (especies de Hyptis y de las más importantes ya que durante los últimos
Salvia), tomillo (Satureja, Thymus),toronjil (Melissa) años los campos de aplicación de los antioxidantes
y romero (Rosmarinus). Por otra parte, algunas la- son muy variados, además de terapias farmacológi-
biadas son tradicionalmente utilizadas en los ritos cas, también tienen interés como suplementos nu-
mágicos religiosos de algunas comunidades, como tricionales, ingredientes cosméticos para prevenir
el envejecimiento cutáneo, alimentos funcionales y Morales, quien adicionó la especie en estudio al her-
como conservantes alimentarios. La industria agro- bario de colecciones del Jardín Botánico de Bogotá
alimentaria se enfrenta continuamente a problemas bajo el código: WFCV-001. El nombre de la especie
de estabilidad de alimentos derivados de la oxida- clasificada fue Salvia leucantha, especie pertenecien-
ción de los mismos. El uso de antioxidantes sinté- te al género Salvia y a la familia de las labiadas.
ticos está muy generalizado pero existe controver-
sia debido a que algunos presentan problemas de Preparación de Extractos Crudos
toxicidad por ello los antioxidantes naturales están
constituyendo en la actualidad una alternativa y por 507 g de material vegetal (hojas) seco y molido
esta razón que se han adelantado numerosos estu- fueron sometidos a una extracción por maceración
dios en diferentes familias vegetales a fin de ana- en frio con éter de petróleo durante un mes reconsti-
lizar sus propiedades antioxidantes (Esmeralda et tuyendo el solvente cada 72 horas, los extractos fue-
al., 2010). ron concentrados a presión reducida en un rotaeva-
porador obteniendo el extracto éter de petróleo (E.
MATERIALES Y MÉTODOS EdP) (12,7011g). El material vegetal utilizado durante
la maceración con EdP se dejó secar a temperatu-
Material Vegetal ra ambiente y se sometió a una segunda extracción
con etanol aplicando el mismo procedimiento del
El material vegetal se recolectó en el municipio extracto anterior obteniéndose el extracto etanólico
de Chipaque en Cundinamarca a una altura de 2668 (E. EtOH) (38.098 g).
msnm cuyas coordenadas son: Latitud 04° 56’ 10.58”
N, Longitud 73° 50’ 5.97” O. El municipio presenta Ensayo Fitoquímico Preliminar del E. EtOH.
un clima templado, óptimo para la adaptación de la
especie en estudio y alcanza temperaturas que osci- Se realizó un análisis Fitoquímico cualitativo para
lan los 17 y 20 °C. Los ejemplares se recolectaron de alcaloides, taninos, compuestos fenólicos, triterpe-
acuerdo a los parámetros indicados en el Jardín Botá- nos y esteroides, flavonoides, saponinas, cumarinas
nico José Celestino Mutis. La clasificación taxonómi- y glucósidos cardiotónicos, siguiendo los paráme-
ca de la especie vegetal la realizó el biólogo Gustavo tros reportados por Ugochukwu et al., 2013.
Taninos +
Capacidad antioxidante
Cardiotónicos +
(captación de radicales DPPH)
Saponinas -
Se prepararon soluciones de los extractos secos a
+ = Detectado (prueba positiva); - = No detectado
y fracciones a una concentración 25 mg/mL. Pos-
teriormente se preparó una solución de DPPH de La identificación de terpenos arrojó resultados
trabajó disuelta en metanol a una concentración positivos. Se realizó la caracterización cualitativa ha-
10 mM. Posterior mente se tomaron alícuotas de ciendo uso de la prueba de Lieberman Burchard y
extractos y fracciones correspondientes a 50, 100, utilizando como patrón colesterol. De esta manera
43
100 I
95 189
69 109
81
121
55
135
50
218
147 204
0
161175
0
29 468
229 249 276
257 298 357 453
393 408
325 339 425438
0
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480
100 II
218
50
43 189203
69 93107120135 468
81
55 147161
175 249 272 453
29 229 286 325342355368 393 408
0
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480
III
165
100
HO
0
50
43 57
430
71
85
29
205
97 121 135 149 177189 225239251264281295 316328341353368 387402415
0
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440
218
100 IV
OH
50
203
122135 189 426
69 81 95109 147161175
28 43 55 231243257272285 339 365 393 411
0
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440
43
100
55
50 81
95107
69 HO 414
145
303
85 119133 161 213 396
29 329
255 381
231 273
173
187199
241 288 314 341354367
0
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420
Figura 1. A) Estructuras de los compuestos aislados de la extracto soluble en EdP (1-3) y del extracto etanólico (4-5); B) Espectros de masas a 70
eV de los compuestos aislados 1-5.
se observó que cuando se trata tanto el patrón como el primer ejemplo de otro nuevo tipo de esqueleto
el extracto de EdP con el reactivo mencionado se carbonado C23-terpenico cuya serie se ha denomi-
observa una coloración que va desde azul hasta ver- nado Hassananos (Luis et al., 1996) Otras especies
de intenso dando positiva esta prueba para terpe- como Salvia amarissima (Esmeralda et al., 2010) han
nos y esteroles (Shreya-Mandal et al., 2013). reportado grupos de metabolitos del tipo carote-
Los resultados preliminares están acorde con noide, flavonoide y cumarina. Finalmente el estudio
los resultados reportados para Salvia apiana (Luis de Salvia uruapana (Manjarréz et al., 2003) muestra
et al., 1996), en donde se encontraron terpenoides fracciones ricas en glucósidos y un compuesto ses-
apiánanos (Saficinólido, Salvigenina) y una nueva quiterpenico denominado tonalesina, el cual ya ha-
sustancia, cuya estructura fue establecida por mé- bía sido reportado en Salvia tonalensis (Manjarréz
todos espectroscópicos, resultando asimismo ser et al., 2003).
80
100
A B
60 80
% Inhibición
% Inhibición
IC50:34.39 ug/mL 60
40
40 IC50:14.04 ug/mL
20
20
0 0
1.0 1.5 2.0 1.0 1.5 2.0
Log de la Concentración Log de la Concentración
900
800
700
600
500
IC50: (ug/mL)
400
300
200
100
0
E. EdP E.EtOH 1 2 3 4 5 Ácido
ascórbico
Figura 3. Concentración inhibitoria media de los extractos crudos y los compuestos aislados.
molecular m/z 468. Los fragmentos más importantes corresponde a un reordenamiento Retro-Diels-Alder
para el diagnóstico estructural son: m/z 249, que (RDA), en el anillo que posee el doble enlace, siendo
coincide con la eliminación de parte de la estructura una evidencia de la existencia de esa instauración.
hidrocarbonada correspondiente a los anillos C (par- De acuerdo al anterior análisis, este compuesto fue
cialmente), D, E y el grupo isoprenilo. El fragmento identificado como el acetato de α
-amirina (2), cuya
m/z 189 (249-AcOH), que corresponde a la elimina- comparación con la librería NIST-08 mostró un 95%
ción del grupo acetato. El patrón de fragmentación de coincidencia.
del compuesto 1 pertenece a las rupturas típicas de Compuesto 3 (F.1.3.1): Sólido blanco (7,1 mg),
triterpenos pentacíclicos (César et al., 2009), que de soluble en EdP y CHCl3, obtenido por CC utilizan-
acuerdo con lo mencionado, este compuesto fue do como fase móvil Hex:Me2CO (7:3). El espectro de
identificado como con el acetato de lupeol (1), cuya masas muestra una señal a 430 uma, lo que es indi-
comparación con la librería NIST-08 mostró un 97% cativo de la señal correspondiente al ion molecular.
de coincidencia. Se observa el pico base con m/z 165 formado por
Compuesto 2 (F.1.2.4): Sólido marrón (5,6 mg), la ruptura del anillo saturado contiguo al anillo de
obtenido por CC utilizando un sistema cromatogra- benceno sustituido. Se presentó el ion de m/z 205
fico Hex-Me2CO (7:3) como fase móvil (Rf en CCD relacionado con la pérdida de la cadena lateral hi-
de 0,80). Igualmente se sometió a las pruebas de drocarbonada. El análisis por espectrometría de ma-
Lieberman–Burchard y revelado en placa con Vaini- sas (EM) a 70 eV y la respectiva comparación con la
llina- H2SO4, cuyo resultado en ambos casos fue po- biblioteca NIST-08 reporto un 96% de concordancia
sitivo, lo cual es característico para compuestos del con α
-tocoferol (3).
tipo triterpeno.
El Espectro de masas permitió establecer el pa- Extracto soluble en Etanol
trón de fragmentación en la cual se observó la pre- Las fracciones obtenidas del extracto EtOH por
sencia del ion molecular m/z 468, con la fórmula fraccionamiento liquido-liquido (solubles en EdP,
molecular, C32H52O2. Los fragmentos m/z 249, 218, diclorometano (DCM), acetato de etilo (AcOEt) y
203, y 189 constituyeron a los denominados picos un residuo hidroalcohólico) fueron monitoreadas
diagnóstico para esqueletos tipo amirina. El frag- por CCD. La fracción soluble en DCM resultó ser
mento m/z 218 es el más representativo, porque más promisoria dado que mostró un mejor perfil en
compuestos de interés (triterpenos y esteroides), a están en correspondencia con lo reportado por (Cé-
razón de la prueba de Lieberman–Burchard y al reac- sar et al., 2009) para la α
-amirina, cuya comparación
tivo en placa con vainillina-H2SO4. A continuación se con la librería NIST-08 arrojo un 95% de coincidencia.
muestran los compuestos mayoritarios de la fracción Compuesto 5 (F. 8.1.1): Corresponde a un sóli-
soluble en DCM, separados por cromatografía en do gris (4,1 mg) fue monitoreada por CCD utilizan-
columna empleando como fase móvil DCM-AcOEt do una mezcla de disolventes DCM-MeOH 8:2 (Rf =
(7:3) e identificados por EM. 0,68) y posteriormente revelada con Vainillina-H2SO4,
Compuesto 4 (F.1.4.1): Corresponde a un sólido generando un punto de color morado, indicando la
blanco que peso 6.3 mg, soluble en EdP y CHCl3, presencia de terpenos, para lo cual se confirmó con
eluido tras una CC cuya fase móvil fue DCM-AcOEt la prueba de Lieberman–Burchard.
(7:3) (Rf =0.64). Este compuesto fue revelado con Vai- En el espectro de masas muestra el perfil de frag-
nillina-H2SO4 y Lieberman–Burchard, dando prueba mentación característica de esteroides, en el cual se
positiva para ambos casos, indicando que probable- observaron señales a m/z 396, correspondientes a un
mente se trata de un triterpeno. fragmento del esteroide con una pérdida de una mo-
El espectro de masas mostró el ion molecular lécula de agua (m/z M+-18), (proveniente del grupo
en m/z 426 acorde a la fórmula molecular C30H50O. OH de la posición 3). Este fragmento sufre una nueva
Se observa un pico de pequeña intensidad con m/z fragmentación dando origen al fragmento a m/z 255,
411, correspondiente a la pérdida de un grupo CH3 el cual se forma por la pérdida de la cadena lateral
a partir del ion molecular, siendo el pico base del es- unida carbono 17. Por otra parte, se ven claramente el
pectro m/z 218, el cual se forma tras una reacción de fragmento del esteroide a 273 m/z obtenido a partir
Retro Diels-Alder en el anillo C, a partir del cual se de la pérdida de la cadena lateral por parte del este-
originan los iones con m/z 203 por la pérdida de un roide original y la posterior perdida de una molécula
grupo CH3 y m/z 189, debido a la pérdida del grupo de agua (m/z M+-18), proveniente del grupo OH de la
C2H5 por la ruptura del enlace que une a los anillos posición 3. De esta manera el compuesto 5 fue identi-
D y E. También se presenta un ion a m/z 207 que ficado como el γ
-sitosterol, cuya comparación con la
contiene a los anillos A y B. Los resultados obtenidos librería NIST-08 arrojo un 95% de coincidencia.
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