CRISTALOGRAFÍA DE RAYOS X

La cristalografía de rayos X es una técnica consistente en hacer pasar un haz de rayos X a

través de un cristal de la sustancia sujeta a estudio. El haz se escinde en varias direcciones
debido a la simetría de la agrupación de átomos y, por difracción, da lugar a un patrón de
intensidades que puede interpretarse según la ubicación de los átomos en el cristal,
aplicando la ley de Bragg.
Es una de las técnicas que goza de mayor prestigio entre la comunidad científica para
dilucidar estructuras cristalinas, debido a su precisión y a la experiencia acumulada durante
décadas, elementos que la hacen muy fiable. Sus mayores limitaciones se deben a la
necesidad de trabajar con sistemas cristalinos, por lo que no es aplicable a disoluciones, a
sistemas biológicos in vivo, a sistemas amorfos o a gases.
Es posible trabajar con monocristales o con polvo microcristalino, consiguiéndose
diferentes datos en ambos casos. Para la resolución de los parámetros de la celda unidad
puede ser suficiente la difracción de rayos X en polvo, mientras que para una dilucidación
precisa de las posiciones atómicas es conveniente la difracción de rayos X en monocristal.
La cristalografía de rayos X desempeñó un papel esencial en la descripción de la doble
hélice de la molécula de ADN .
Esta técnica se utiliza ampliamente en la determinación de las estructuras de las proteínas.
PROCESO DE OBTENCION DE ESTRUCTURAS MOLECULARES EN LOS CRISTALES

1. Una vez que se ha obtenido el cristal, se produce un patrón de difracción por irradiación
de rayos X. Este patrón consiste de miles de puntos que son los datos crudos.
2. La posición e intensidad de cada punto es determinada relativamente fácil, las fases de las
ondas que formaron cada punto debe ser también determinada para producir un mapa de
densidad electrónica.
3. Resolver el "problema de la fase" es el segundo obstáculo. A menudo esto se acompaña
al irradiar dos o más derivados del mismo cristal que difieren solamente en la presencia de
iones de metales pesados. Este es el método del "remplazo isomórfico" y requiere que los
iones de metal sean incorporados en un cristal sin afectar la estructura, lo cual en ocasiones
no es posible. Una solución más reciente para resolver el problema de la fase involucra utilizar
la radiación de zincrotrón a varias longitudes de onda y ha acelerado la velocidad para
resolver estructuras cristalinas. La descripción completa de cada reflexión - su posición,
intensidad y fase - es denominada "factor de estructura". Los factores de estructura están
disponibles en el PDB para aproximadamente 25 % de las entidades cristalográficas. Al
publicar los factores de estructura, permite a otros investigadores generar y examinar los
mapas de densidad o tratar refinamientos alternativos o métodos de fase.

Los rayos X que más interesan en el campo de la Cristalografía de rayos X son aquellos que
disponen de una longitud de onda próxima a 1 Angstrom (fundamentalmente los
denominados rayos X "duros" en el esquema superior) y corresponden a una frecuencia de
aproximadamente 3 millones de THz (tera-herzios) y a una energía de 12.4 keV (kilo-electrón-
voltios), que a su vez equivaldría a una temperatura de unos 144 millones de grados. Estos
rayos X se producen en los laboratorios de Cristalografía o en las llamadas grandes
instalaciones de sincrotrón (como el ESRF: European Synchrotron Radiation Facility).
Los equipos que se utilizan en los laboratorios de Cristalografía para producir estos rayos X
son relativamente sencillos. Disponen de un generador de alta tensión (unos 50.000 voltios),
que se suministra al llamado tubo de rayos X, que es realmente donde se produce la
radiación.
Esos 50 kV se suministran como diferencia de potencial (alto voltaje) entre un filamento
incandescente (por el que se hace pasar una corriente i de bajo voltaje, unos 5 A a unos 12
V) y un metal puro (normalmente cobre o molibdeno), estableciéndose entre ambos una
corriente de unos 30 mA de electrones libres. Desde el filamento incandescente (cargado
negativamente) saltan electrones hacia el ánodo (cargado positivamente) provocando, en los
átomos de este último, una reorganización electrónica en sus niveles de energía.
Este es un proceso en el que se genera mucho calor, por lo que los tubos de rayos X deben
estar muy refrigerados. Una alternativa a los tubos convencionales son los llamados
generadores de ánodo rotatorio, en los cuales el ánodo, en forma de cilindro, se mantiene
con un giro continuo, consiguiendo con ello que la incidencia de los electrones se reparta
por la superficie del cilindro y así se puedan obtener potencias mayores de rayos X.

MÉTODOS DE DIFRACCIÓN DE RAYOS X

Existen tres métodos para producir difracción de rayos X. Método de Laue, Método de
rotación de cristal y método Powder.

MétododeLaue
Consiste en hacer incidir en un cristal un espectro continuo de rayos X, de tal manera que
para cada longitud de onda, existirá un determinado ángulo. El método de transmisión de
Laue (a) en la figura consiste en colocar esta película detrás del cristal como se ve a la derecha.
Por el contrario, en el método de reflexión (b) en la figura de Laue, la película se interpone
entre la fuente y el cristal, esta posee un agujero que deja pasar los haces de rayos X.
En el método de transmisión de Laue los haces difractados forman un patrón de machas
circular o elíptico y en cambio, el patrón formado en el método de reflexión de Laue son
hipérbolas.
Método de rotación de cristal
Se hace incidir un haz de rayos X monocromáticos sobre un cristal. Para detectar los haces
difractados, la película es envuelta de forma cilíndrica de tal manera que rodee al cristal. El
cristal se hace girar sobre el eje perpendicular al haz incidente, el cual coincide con el eje
del cilindro. Para encontrar el ángulo al cual se cumple la ley de Bragg, el giro del cristal se
hace sucesivamente de 0° a 90°, hasta encontrar el patrón de difracción mostrado en la
figura.
Método del polvo
El cristal a analizar es reducido a polvo de tal manera que forme un conjunto de pequeños
cristales. Si se tuviese un cristal y en él se hiciera incidir un haz monocromático, el haz se
difractaría a un ángulo en particular. Al hacer girar este cristal de 0° a 360°, el haz formará un
cono cuyo eje coincide con el del haz incidente. El interés de este método en tomar varios
cristales, es formar este cono con las distintas orientaciones posibles de los diversos cristales

Ley de Bragg
La fórmula de Bragg permite calcular la longitud de onda de los rayos a partir de la constante
reticular d, o inversamente, ésta última si se conoce la longitud de onda, y de aquí su doble
aplicación al estudio de los rayos X y de la estructura de los cristales. Esta técnica también
juega un importante papel en los estudios de la estructura de líquidos y moléculas orgánicas,
y ha sido decisiva en la determinación de la estructura de la doble hélice del ADN y
subsiguiente investigación en genética molecular.

Donde
n es un número entero,
λ es la longitud de onda de los rayos X,
d es la distancia entre los planos de la red cristalina y,
θ es el ángulo entre los rayos incidentes y los planos de dispersión.