HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y

AMINOÁCIDOS
La hidrólisis de proteínas es un proceso en el cual se produce la ruptura de la
estructura primaria, es decir la ruptura de la secuencia normal de una proteína; lo
cual termina por fragmentar las proteínas para convertirlas en aminoácidos. Durante
la práctica se llevó a cabo la hidrolisis de una proteína así como su identificación,
para esto, se llevó a cabo la preparación de cuatro disoluciones, la disolución A
(Hidrolizado de Grenetina); disolución B (disolución neutralizada de la disolución A);
la disolución C (grenetina sin hidrolizar) y disolución D (disolución de albúmina). A
continuación, se efectuaron las reacciones de identificación correspondientes.
1) Reacción Xantoproteica. Se utiliza para la identificación de aminoácidos que
cuentan con anillos aromáticos, dando una prueba positiva cuando presenta una
coloración amarilla (Xanthos: Amarillo), lo cual significa que puede que haya
presencia de aminoácidos portadores de grupos bencénicos como la tirosina,
triptófano y fenilalanina. La prueba se realizó en las disoluciones A y D, al
momento de agregar HNO3 a la disolución de albumina se observó la formación
de un precipitado blanco que después de calentar a baño maría y agregar NaOH
cambio a un color anaranjado resultando la prueba positiva, ya que esta proteína
cuenta con los aminoácidos mencionados anteriormente, mientras que la
solución A solo tiene trazas de tirosina y fenilalanina, pero carece de triptófano,
en consecuencia presento una ligera coloración amarilla.
2) Reacción de precipitación: Esta prueba identifica los enlaces disulfuro en los
aminoácidos proporcionando un precipitado negro, resultado de la interacción
del plomo con los puentes de disulfuro presentes en los aminoácidos cisteína y
metionina de la albumina (disolución D), en la cual la prueba fue positiva. La
reacción en la grenetina hidrolizada (disolución A) fue negativa, lo cual indica la
ausencia de aminoácidos azufrados.
3) Reacción de Biuret. Permite la identificación de la presencia de enlaces
peptídicos, de más de tres unidades. Se basa en la reacción de sulfato de cobre
con compuestos que tengan los enlaces peptídicos en un medio alcalino, el
producto es un complejo de coordinación entre el Cu+2 y cuatro átomos de
nitrógeno proveniente de enlaces peptídicos, presentando una coloración
violeta, cuya intensidad depende de la cantidad de enlaces presentes. De las
pruebas realizadas, solo dos tubos de ensaye que contenían las disoluciones
resultaron positivos, estos fueron el número 2 y el 5. A pesar de que los tubos 3
y 5 contenían albumina, el medio alcalino del tubo 5 fue el responsable de que
la reacción se llevara a cabo. De igual forma, el tubo 2 pudo virar a violeta, caso
contrario a los tubos 4 y 6 donde la hidrolisis de la grenetina destruyó los enlaces
peptídicos.
4) Reacción con ninhidrina: Permite identificar aminoácidos libres primarios
debido a que la ninhidrina reacciona con un aminoácido produciendo un anión
violeta obscuro estabilizado por resonancia llamado purpura de Ruhemann.
 Como resultado, la solución de grenetina hidrolizada y la disolución patrón
tomaron una tonalidad violeta.
5) Reacción con ácido nitroso. Esta reacción determina la cantidad de grupos
amino libres en la proteína midiendo la cantidad de nitrógeno liberado y esto se
puso de manifiesto mediante un burbujeo, en consecuencia el tubo etiquetado
por el número 2 que contenía grenetina sin hidrolizar presento mayor cantidad
de burbujas de nitrógeno gaseoso lo que significa que los grupos amino libres
de la grenetina reaccionaron con el acido nitroso.
6) Acción reguladora de aminoácidos. Con esta identificación se comprueba el
carácter anfótero que presentan los aminoácidos, sometiéndolos a un medio
alcalino y un medio acido. La zona de viraje del rojo Congo es de 5.2, así que el
empleo de gotas de HCL para alcanzar una coloración azul en la solución B
confirma la reacción acido-base. La zona de viraje de la fenolftaleína es un pH
de 8.6 de tal forma que la adición de NaOH a la solución B demuestra la
propiedad anfótera, es decir que puede reaccionar ya sea como un ácido o una
base.
7) Cromatografía en placa fina. Se separaron la mezcla de aminoácidos de la
solución B en una fase móvil con solventes polares (acetato de etilo y agua),
debido a estas polaridades, los aminoácidos ascienden en la placa con rapidez
distinta quedando los aminoácidos con polaridad más fuerte retenidos en la parte
inferior mientras que los menos polares ascienden con mayor rapidez.
Posteriormente se revelo con la ayuda de un atomizador con ninhidrina y se
calentó en la parrilla eléctrica con la finalidad de revelar los pigmentos de los
aminoácidos presentes, las coloraciones obtenidas fueron purpura y un ligero
amarillo en la parte baja.