Departamento de Ciências Básicas da Vida

Histologia e Embriologia

Métodos de estudo em Histologia

Prof. Bruno Guedes

 Métodos de estudo em Histologia
– Histologia:
• estudo das células e tecidos do corpo e como estas
estruturas se organizam para construir os órgãos.
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1) – Microscopia de Luz:
• 1590: invenção (Hans Janssen e seu filho Zacharias);

• Antonie van Leeuwenhoek: observação de materiais

biológicos (embriões de plantas, os glóbulos vermelhos e os
espermatozoides) século XVII.
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1) – Microscopia de Luz:
• evolução dos microscópios.

John Yarwel, 1600 1860

Robert Hooke, 1665 1881

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1) – Microscopia de Luz:
• Robert Hooke (1665): primeira pessoa a utilizar o
termo “célula” / lâminas de tecidos vegetais
(cortiça).
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1) – Microscopia de Luz:

Partes Mecânicas Partes Ópticas

tubo ocular

revólver
objetiva
platina

charriot condensador

base
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1) – Microscopia de Luz:
• conjunto de lentes nas
objetivas.
 Poder de resolução X Aumento
• poder de resolução: menor distância entre duas partículas que
permite que elas sejam vistas como dois objetos separados.
(partículas com distância = 0,3µm);
Fora do poder de resolução

PR=0,5µm

poder de Aumento
resolução

PR=0,2µm

Dentro do poder de resolução

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Unidade Representação e valor
micrômetro 1µm = 0,001 milímetro (10-3mm)

nanômetro 1nm = 0,000001 milímetro (10-6mm) ou 0,001 micrômetro (10-3µm)

Boa imagem = Resolução

Poder de Resolução
Microscópio Microscópio Olho
eletrônico óptico humano

10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1 1 (mm)

0,0001 0,001 0,01 0,1 1 10 100 1000 (µm)

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1) – Microscopia de Luz:
1.1- Preparo de amostras:
a)- FIXAÇÃO: preservar a morfologia e a composição dos
tecidos / evitar a autólise / endurecer as amostras;
*perfusão;
b)- DESIDRATAÇÃO: remover a água dos tecidos;
* clarificação: xilol;
c)- INCLUSÃO (ou EMBEBIÇÃO): a peça é colocada em um
molde contendo a parafina fundida ou resina;
d)- MICROTOMIA: cortes delgados das peças em micrótomo
(1-10 µm espessura) para colocação sobre lâminas de
vidro;
e)- COLORAÇÃO: utilização de corantes para evidenciar os
componentes dos tecidos.
 Métodos de estudo em Histologia
1) – Microscopia de Luz:
1.1- Preparo de amostras:
 Métodos de estudo em Histologia
1) – Microscopia de Luz:
1.1- Preparo de amostras:
 Métodos de estudo em Histologia
1) – Microscopia de Luz:
1.1- Preparo de amostras:
 Métodos de estudo em Histologia
1) – Microscopia de Luz:
1.2- Plano de corte:

(Cedido pela Profa. Gleydes G. Parreira)

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1) – Microscopia de Luz:
1.2- Plano de corte:
 Métodos de estudo em Histologia
1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
A- Coloração Histológica: evidenciar a morfologia
• estrutura de caráter ácido  afinidade por corante básico;
• estrutura de caráter básico  afinidade por corante ácido;

Corantes básicos:
Hematoxilina, Azul de Toilidina, Azul de Metileno;
HE
Corantes ácidos:
Eosina, Laranja de Acridina, Fucsina Ácida.
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1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
A- Coloração Histológica: evidenciar a morfologia

Hematoxilina

Eosina

Lâmina 69 – corte de Fígado / Coloração histológica: HE

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1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
B- Coloração Histoquímica: caracterização química
- P.A.S. (Ácido Periódico-Schiff)
• demonstração de estruturas ricas em açúcar (radical 1,2-glicol).

- EX: Glicogênio;
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- P.A.S. (Ácido Periódico-Schiff)

Hematoxilina

PAS

Corte de Fígado / Coloração histoquímica: PAS / Contra-coloração: Hematoxilina

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- P.A.S. (Ácido Periódico-Schiff)

Corte de Rim / Coloração histoquímica: PAS / Contra-coloração: Hematoxilina

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1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
B- Coloração Histoquímica: caracterização química
- Tricrômio de Gomori:
• núcleo: azul ou preto / fibra muscular: vermelho / fibras
conjuntivas: verde.
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1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
B- Coloração Histoquímica: caracterização química
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1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
B- Coloração Histoquímica: caracterização química
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1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
B- Coloração Histoquímica: caracterização química
 Métodos de estudo em Histologia
1) – Microscopia de Luz:
1.3- Técnicas de coloração:
B- Coloração Histoquímica: caracterização química
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1) – Microscopia de Luz:
1.4- Tipos:
A- Campo claro:
- permite o exame de células e tecidos fixados e corados (distinção
de estruturas);
- detecção da luz transmitida.
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1) – Microscopia de Luz:
1.4- Tipos:
B- Contraste de fase:
- permite o exame de células e tecidos vivos (não corados);
- detecção de pequenas diferenças de difração da luz.
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1) – Microscopia de Luz:
1.4- Tipos:
C- Fluorescência:
- utilizam anticorpos conjugados a compostos fluorescentes / baseia-
se na reação antígeno-anticorpo.
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2) – Microscopia Eletrônica:
- utiliza feixes de elétrons acelerados como fonte de energia
(luz = 500nm / elétrons = 0,005nm);
- interação entre os e- e componentes dos tecidos;
*contrastação;
- LR do ML: 0,2 µm;
- LR do ME: 0,2 nm;

Microscopia eletrônica

Transmissão Varredura
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:

- David Robertson (1957): descreveu a

estrutura da bicamada da membrana
celular o / pioneiro na microscopia eletrônica
de transmissão;
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:
- Preparo das amostras:
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:
- Preparo das amostras:
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:
- Preparo das amostras:
- Contrastação:

Acetato de Uranila
• solução a 2% de 3 a 10 minutos
• lavar 3 vezes em água destilada.

Citrato de Chumbo
• solução a 3% a 10 minutos
• lavar 3 vezes em água destilada.
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:
- Preparo das amostras:
- Contrastação:

Citrato de chumbo Acetato de Uranila

Citrato de chumbo
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:
- Formação da imagem:
- a imagem é formada pela passagem diferencial do feixe
de elétrons pela amostra.
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:
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2.1) – Microscopia Eletrônica de Transmissão:
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2.2) – Microscopia Eletrônica de Varredura:
- e- não atravessam a amostra, “varrem” a superfície;
- e- refletidos são coletados por um detector e processados
para serem exibidos em uma imagem.
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2.2) – Microscopia Eletrônica de Varredura:
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2.2) – Microscopia Eletrônica de Varredura: