REALIZACION Y TINCIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEO

INTRODUCCIÓN

El frotis sanguíneo, también llamado extendido, es de gran importancia en hematología ya que el

diagnóstico de muchas enfermedades hematológicas puede realizarse con solo observar las
características morfológicas de las células sanguíneas, de manera que este no solo debe ser
excesivamente grueso ni excesivamente fino. Todas las láminas por usar, sobre todo nuevas,
deben ser limpiadas con algodón y alcohol al 70% para eliminar la grasa que viene adherida.

Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las
estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste
entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean
visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.

La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky. Es extremadamente importante en el

laboratorio de hematología este tipo de tinción, ya que puede obtenerse una cantidad abundante
de información a partir del examen de un frotis de sangre periférica bien teñido.
I.- FROTIS SANGUÍNEO

Objetivo

Aprender a realizar una extensión sanguínea, o frotis sanguíneo.

Fundamentos

Podemos definir el frotis sanguíneo, o extensión sanguínea, como una fina película de sangre
extendida sobre un portaobjetos, de modo que las células sanguíneas estén dispuestas en una
capa. La finalidad de la extensión sanguínea es la observación al microscopio óptico de las células
presentes en la muestra.

Las extensiones sanguíneas se pueden realizar de forma manual o de forma automática. En esta
práctica se utiliza la técnica manual del portaobjetos, también llamada técnica de los dos
portaobjetos.

Un frotis sanguíneo ideal debe cumplir una serie de requisitos:

 No debe cubrir toda la superficie del portaobjetos.

 Su espesor debe ir disminuyendo desde el inicio hasta el final.
 La sangre debe ir dispuesta en una sola capa de tal modo que no queden huecos a lo largo
de la extensión sanguínea.
 Las bandas laterales deben ser lisas.
 Los bordes laterales de la extensión deben estar separados de los bordes del porta a 1-2
mm.

Además, una buena extensión sanguínea presenta tres zonas claramente diferenciadas:

Cabeza: Es la zona inicial de la extensión. Si atendemos a las características que debe presentar un
frotis sanguíneo ideal, la cabeza será la zona con mayor grosor. De hecho, los hematíes pueden
estar formando más de una capa.

Cuerpo: Es la zona intermedia de la extensión sanguínea y la más adecuada para el estudio de las
células. Existe una adecuada proporción de leucocitos en esta zona.

Cola: Es la zona final del frotis. En ella los hematíes se disponen en forma de mosaico, deformados,
y homogéneamente coloreados. Los leucocitos dispuestos en esta zona suelen ser los más grandes
(monocitos y granulocitos).
Precauciones de bioseguridad

La manipulación inapropiada puede convertirse en una fuente de riesgo biológico para las
personas que están en contacto o para el medio ambiente. Utilizar los elementos de protección
personal necesarios para evitar exposición con riesgo biológico, de acuerdo con la fuente de la
muestra.

 Guantes.
 Bata.
 Contenedores para especímenes, a prueba de fugas y de fácil sellamiento.

Cumplir con las recomendaciones de manejo de elementos corto punzantes:

 No refundar agujas.
 Disponer y utilizar adecuadamente el contenedor para cortos punzantes.

Material

 Portaobjetos.
 Portaobjeto esmerilado.
 Pipeta Pasteur.
 Muestra de sangre anti coagulada con EDTA.
 Algodón
 Alcohol al 70%
Técnica del portaobjetos

 Se pipetea una pequeña cantidad de sangre, utilizando una pipeta Pasteur, procedente del
tubo con la muestra.
 Colocamos una gota, de pequeña cantidad de sangre, en un extremo del portaobjetos.
 Se coloca encima el portaobjetos esmerilado con un ángulo de 30-45º. Lo deslizamos
hasta que el extremo que contacta con el porta, tome contacto, a su vez, con la gota de
sangre.
 Movemos ligeramente, de un lado a otro, el portaobjetos esmerilado para que la gota de
sangre se extienda bien en su extremo.
 Arrastramos el extremo del portaobjetos esmerilado por la superficie del portaobjetos
horizontal para extender la sangre en una fina capa que conformará el frotis sanguíneo.
 Debemos levantarlo antes de llegar al final del extremo del portaobjetos.
 El secado del frotis es a temperatura ambiente y en posición horizontal.
Resultados

Frotis sanguíneo

Realización de un frotis sanguíneo

Observaciones:

 Nos encontramos muchos portaobjetos sucios y con grasa, por lo que algunas extensiones
tuvieron que ser desechadas por ese motivo.
 Las primeras extensiones salieron muy largas y con mucha celularidad debido a que
poníamos una gota de sangre demasiado grande. Es decir, con mucha cantidad de sangre.
 Una vez que nos acostumbramos a colocar la cantidad justa de sangre, nos encontramos
con el problema de usar una angulación muy grande con el portaobjetos esmerilado. El
resultado era un frotis sanguíneo corto y grueso.
 La colocación de los dedos es fundamental para que no nos molesten durante la
realización de la técnica y para que el portaobjetos no se mueva.
 La limpieza de los portaobjetos es muy importante para evitar encontrarnos grasa y
suciedad en futuros usos.
II.- TINCIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEO

Objetivos

Realizar una tinción de las células blancas presentes en un frotis de sangre mediante la técnica de
tinción de Wright.

Identificar los tipos de células sanguíneas presentes en la muestra de sangre una vez teñida.

Fundamento

La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky. Es extremadamente importante en el

laboratorio de hematología este tipo de tinción, ya que puede obtenerse una cantidad abundante
de información a partir del examen de un frotis de sangre periférica bien teñido.

Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una
solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El
alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste
en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los
diferentes componentes celulares.

Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como
eosina, la acción combinada de estos colorantes producen el efecto Romanowsky y da una
coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y de color rosado a
los eritrocitos.
Materiales

 Frotis sanguíneo
 Colorante Wright
 Solución tamponada
 Aceite de inmersión
 Microscopio

Procedimiento:

 Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia
arriba
 Cubrir completamente el portaobjetos con el colorante de Wright gota a gota.

 Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los
glóbulos sanguíneos.
 El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por
los bordes.
 Agregar directamente al colorante un volumen igual de agua tamponada, para evitar la
coloración débil.
 Esperar la formación de brillo metálico
 Dejar actuar de 10-15 minutos.

 Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto
rosado al examinarlo a simple vista.

 Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión

Observaciones

 1: plaquetas
 2: eritrocitos
 3: eosinófilo
 4: neutrófilo
 5: linfocito

Análisis de observaciones:

 Los monocitos se observan más grandes que las otras células, su núcleo se pinta de color
violeta.
 Los neutrófilos se observan con 2, 3 hasta 4 núcleos, segmentados por hilos de cromatina.
 Los eosinófilos se observan bilobulados y en su citoplasma se observan granulaciones de
color naranja.
 Los linfocitos se observan con la mayor parte del núcleo que ocupa casi todo el citoplasma
 Los eritrocitos se observan de color rosados, con una pequeña claridad central.
 Las plaquetas son pequeñas y de color moradas.
 Para realizar la lectura de células sanguíneas se debe realizar entre el cuerpo y la cola
donde existe mayor distribución de los leucocitos.
 Las plaquetas se leen en la cola del frotis, donde los glóbulos rojos se hayan bien
separados uno de otro.

Causas de error en las tinciones realizadas a frotis sanguíneos

Si la tinción de una extensión sanguínea es demasiado rosa, probablemente esto se deba a:

 Un pH bajo del colorante.

 Un tiempo de coloración insuficiente.
 Un lavado excesivamente prolongado.

Si la tinción es demasiado azul, posiblemente, esto esté causado por: ungrosor excesivo de la
extensión, o un pH alto del colorante.

 Una coloración excesivamente prolongada.

 Un lavado insuficiente.
Si tras la tinción aparecen artefactos o/y precipitados en la extensión, probablemente esto se deba
a:

 Un empleo de portaobjetos sucios.

 Una falta de filtración del colorante.
 Una coloración excesivamente prolongada.
 Un secado del colorante durante la tinción.
 Un lavado insuficiente.

LOS LEUCOCITOS:

Se encargan de proteger el cuerpo de sustancias extrañas, como infecciones.

Se dividen en: Granulocitos, y agranulocitos.

GRANULOCITOS: son los que poseen gránulos en su citoplasma, los gránulos se encargan de
liberar sustancias de tipo proteico para segregar sustancias de tipo proteico.

En la familia de los granulocitos podemos encontrar tres tipos:

1. Neutrófilos: sus funciones son:

 Fagocitar y destruir bacterias

 Migrar a sitios invadidos por microorganismos

2. Eosinófilos: Sus funciones son:

 destruir invasores parasitarios y actúan en reacciones alérgicas.

3. Basófilos. Sus funciones son:

 actúan en el proceso de inflamación, y en reacciones alérgicas.

AGRANULOCITOS: Son los que carecen de gránulos en su citoplasma. En estos encontramos dos
tipos:

1.-linfocitos: Sus funciones son

 mantener el funcionamiento del sistema inmunitario: los linfocitos T se producen en el

Timo, y tienen a cargo la inmunidad celular. Y los linfocitos B se producen en el bazo y se
encargan de la inmunidad de tipo humoral.

2. Monocitos: Sus funciones son:

 Fagocitar material indeseado ( Bacterias y células muertas)
 Producir citosinas para las reacciones inflamatorias e inmunitarias
 Se convierten en macrófagos

Basófilo Linfocitos

Neutrófilos en banda o cayados eosinófilos

Neutrófilo segmentado monocito

Referencias bibliográficas

http://articulosdemedicina.com/biometria-hematica

http://tinciones-hematologicas.html

http://es.org/Tinción_de_Wright

http://www.bio-optic.com/introduccion/Teoria_de_la_Microscopia.pdf

http://articulosdemedicina.com/biometria-hematica

http://html.tincioneshematologicas.html
http://org.Tinción_de_Wright
http://www.bio-optic.com/introduccion/Teoria_de_la_Microscopia.pdf

https://celulassanguineas.wordpress.com/about/

Beltrán F. de E, M; R., Tello y Náquira, C. 2003. Manual deprocedimientos de laboratorio para el

diagnóstico hematológico. Serie de Normas Técnicas Nº 37.
http://bvs.minsa.gob.pe/archivos/INS/165_NT37.pdf