INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

SISTEMAS DE CONTROL DE CALIDAD

Profesores:
M en C Aura Hernández Olicón
M en C Elizabeth Jiménez Gutierrez
M en C Hilda Pérez Cervantes
Dr. Luis R. Carreno Durón

Autor: Suarez Gómez Alexis Gabriel

Práctica: Verificación de la calibración, sensibilidad y linealidad
de los espectrofotómetros empleados en el laboratorio clínico
Grupo: 5QM2
Sección: 4
Equipo: 10

Ciclo escolar 2019

Fecha de entrega
Ciudad de México, 15 de marzo de 2018

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INTRODUCCIÓN

En la actualidad las determinaciones analíticas en química clínica se realizan utilizando

instrumentos y equipos relativamente complejos en el laboratorio clínico, por ello para asegurar
la confiabilidad de los datos es necesario conocer tanto como sea posible las características,
potencialidades, limitaciones y particularidades de los instrumentos analíticos, debido a que
dependen entre otros aspectos tanto del uso adecuado como del buen funcionamiento de los
equipos fotométricos.
Un espectrofotómetro es un instrumento que se utiliza para medir la luz que transmite una
solución en una celda. Sirve para determinar la concentración de una sustancia absorbente de
luz en una celda, basándose en la ley de Lambert-Beer. La adecuada obtención de resultados
obtenidos por dichas mediciones empleando métodos fotométricos, requiere-en primer lugar-
verificar que el instrumento de medición está funcionando correctamente. La revisión del
rendimiento de los espectrofotómetros UV-VIS es indispensable en el control de calidad. Para
llevar acabo este tipo de comprobaciones es común el empleo de substancias estándar, cuyas
propiedades espectrales han sido estudias cuidadosamente. Posteriormente, se evalúa el
funcionamiento del instrumento en función de los resultados obtenidos del análisis de estos
estándares.
La calibración, la sensibilidad y la linealidad, son tres características que permiten verificar el
correcto funcionamiento de los espectrofotómetros. Las dos primeras se verifican mediante la
determinación del espectro de absorción de una solución de cloruro de cobalto (CoCl2)
(absorbancia máxima de 0.5 a 510 nm) y la última a través de la medición de la absorbancia de
soluciones de diferentes concentraciones conocidas de dicromato de potasio (K2Cr2O7) o de
permanganato de potasio (KMnO4).
OBJETIVO
Verificar la calibración, sensibilidad y linealidad de los espectrofotómetros, utilizando una solución
de cloruro de cobalto y dicromato de potasio e interpretar los resultados de acuerdo a la ley de
Lamber-Beer.
FUNDAMENTO
Cuando la luz de una apropiada longitud de onda atraviesa una cubeta conteniendo una solución
colorida, parte de la luz es absorbida por la solución, el resto es transmitida a través de la muestra
hasta el detector. La luz que llega al detector se conoce como transmitancia.
Cada solución colorida tiene un espectro de absorción característico que se establece a partir de
la medición de la absorbancia a diferentes longitudes de onda. La longitud de onda a la cual se
analiza una sustancia es generalmente, aquella a la cual se obtiene la máxima absorbancia. Por

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lo regular se selecciona aquella que dé la mayor sensibilidad y que más

se aproxime a la ley de Beer.

RESULTADOS
BITÁCORA DE RESULTADOS FECHA: 20 DE MARZO DEL 2018
Verificación de la calibración, sensibilidad y linealidad de los espectrofotómetros
empleados en el laboratorio clínico
Resultados y observaciones
Espectrofotómetro: Thermo scientific Genesis 20 Marca: Thermo scientific
Codificación de usuario: 11 Unidades: nm
Condiciones físicas del instrumento: buenas condiciones.
Tipo de celda utilizada: volumen semireducido
Solución utilizada: CoCl2 2.2% Vol. Seleccionado: ¾ de la celda
Ajuste de instrumento con: HCl 1% Intervalo de λ: 450-500 nm

Tabla 1. Verificación de la calibración y sensibilidad

λ (nm) A
450 0.216
460 0.290
470 0.342
480 0.388
490 0.431
500 0.477
510 0.509
520 0.496
530 0.438
540 0.342
550 0.249

λ mínima seleccionada: 450 nm λ máxima seleccionada: 550 nm

Verificación de la linealidad
Solución utilizada: K2Cr2O7 Longitud de onda: 500 nm
Ajuste del espectrofotómetro: Agua destilada

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Tabla 2. Verificación de la linealidad

Conc.
Conc. Absorbancia
calculadas % de error
Teóricas mg/dl (500 nm)
mg/dl
26.5 0.148 41.83 57.84%
53 0.219 61.90 16.79%
106 0.375 105.99 -9.43x10-3
159 0.598 169.03 6.30
212 0.761 215.10 1.46
265 0.910 257.22 -2.93
318 1.078 304.71 -4.17
371 1.234 348.81 -5.98
424 1.411 398.84 -5.93
477 1.546 437.00 -8.38
530 1.724 487.31 -8.05

Solución con la que se hicieron las diluciones: K2Cr2O7

Factor de calibración utilizado:
Fórmula para calcular las concentraciones de las diluciones:
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
Factor de dilución =
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑐𝑟𝑜𝑚𝑎𝑡𝑜

530 𝑚𝑔/𝑑𝐿
Concentración =
𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
:
106
Factor =
A106
106
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = = 282.6666
0.375
Ecuación empírica para calcular las concentraciones calculadas

Concentracion calculada = F ∗ Absorbancia

[ ] = 282.6666 ∗ 0.148 = 41.83
Tomando en cuenta los valores observados se determinó mediante la siguiente ecuación
el porciento de error:
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑜𝑏𝑠𝑒𝑟𝑣𝑎𝑑𝑜 − 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙
%𝐸 = 𝑥100
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙
41.83−26.5
%𝐸 = 26.5 𝑥100 =57.84%

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0.6

0.5

0.4
Absorbancia

0.3

0.2

0.1

0
440 460 480 500 520 540 560
lonitud de onda (nm)

Figura 1. Espectro de absorción del CoCl2 al 2.2% en HCl al 1%.

Figura 1.1 Espectro de absorción del CoCl2

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1.8
1.6
Absorbancia
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4 y = 0.0031x + 0.0702
R² = 0.9988
0.2
0
0 100 200 300 400 500 600
Concentraciones teóricas (mg/dL)

Figura 2. Curva tipo relacionando las concentraciones teóricas del K2Cr2O7 con sus
absorbancias leídas a una longitud de onda de 500 nm.

2
1.8
1.6
1.4
Absorbancia

1.2
1
0.8
0.6
y = 0.0035x + 2E-05
0.4 R² = 1
0.2
0
0 100 200 300 400 500 600
Concentraciones calculadas (mg/dL)

Figura 3. Curva tipo relacionando las concentraciones calculadas del K2Cr2O7 con sus
absorbancias leídas a una longitud de onda de 500 nm.

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600

Concentraciones calculadas (mg/dL)

500

400

300

200

100
y = 0.8872x + 19.824
R² = 0.9988
0
0 100 200 300 400 500 600
Concentraciones teóricas (mg/dL)

Figura 4. Verificación de la linealidad.

800.00%

600.00%

400.00%

200.00%
% de error

0.00%
0 100 200 300 400 500 600
-200.00%

-400.00%

-600.00%

-800.00%

-1000.00%
Conc. calculadas mg/dl

Figura 5. Porciento de error en cada uno de los puntos.

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PRGUNTA EXTRA.

Figura 1.1 Espectro de absorción del CoCl2

DISCUSIÓN
Considerando la primer experiencia sobre la verificación de la calibración y sensibilidad del
espectrofotómetro con respecto a el espectro de absorción obtenido del cloruro de cobalto
(CoCl2), corresponde al esperado ya que teóricamente como se observa en la figura 1.1 la
absorbancia máxima de este compuesto se encuentra a los 510nm, valor de longitud de
onda en la que se encontró experimentalmente la mayor absorbancia del compuesto,

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mediante dicho principio se puede decir que el espectrofotómetro tiene sensibilidad y está
calibrado. La absorbancia registrada en esta longitud de onda (510 nm) fue de 0.509,
considerando que teóricamente la absorbancia máxima es de 0.500, es posible conocer
+
mediante un parámetro de 0.025 de error si se encuentra en el intervalo de 0.475-0.525,
−
cabe mencionar que el valor obtenido experimentalmente entra en dicho intervalo
comprobando que el espectrofotómetro tiene sensibilidad.
Haciendo referencia a la verificación de la linealidad de acuerdo a la curva de calibración
obtenida en la relación de las concentraciones teóricas del dicromato de potasio (K2Cr2O7)
con su respectiva absorción figura 2, se observa en comparación con la curva de calibración
de la relación de las concentraciones calculadas figura 3 se comprueba realmente con la
segunda curva que hay una linealidad dado al valor del coeficiente de correlación que es
igual a 1 (r=1).
Con respecto a la relación de las concentraciones teóricas y calculadas se esperaría un
coeficiente de correlación de 1 para comprobar la linealidad de ambas sin embargo en la
figura 4, con la relación del porciento de error y la concentraciones calculas figura 5 fue
posible conocer que tanto no cumplen con la linealidad. Con respecto a los valores del %
de error cabe mencionar que el primero al ser muy grande se debe a que la concentración
del analito es muy pequeña y se podría confundir con el ruido del equipo. En los demás
puntos donde se presenta un % de error mayor al 2.5% por arriba o por abajo del valor real,
el analista es responsable de ese error que se pudo haber cometido al momento de realizar
las diluciones. Es por eso que las determinaciones se deben realizar por lo menos 5 veces
para tener datos más representativos y confiables que reduzcan el grado de incertidumbre.
Una de las formas de poder obtener el grado de error del analista sería efectuar una prueba
de verificación de linealidad por triduplicado y posteriormente sacar promedios y realizar
posteriormente el análisis estadístico correspondiente.
CONCLUSIONES

 Es necesario realizar 5 veces la determinación para validar los datos.

 El equipo esta calibrado y presenta sensibilidad en un intervalo de 0.475-0.525 con
una absorbancia máxima de 0.509 a 500nm.
 El equipo presenta linealidad.
REFERENCIAS
1. Alva Estrada S.I., Benito Mercadé C., Programa de evaluación de la calidad entre
laboratorios. I. Diagnóstico del funcionamiento de espectrofotómetros. 1991: 17-
19.
2. Alva Estrada S.I., Benito Mercadé C., Programa de evaluación de la calidad entre
laboratorios. III. Estudio del efecto de la calibración sobre la calidad analítica. 1991:
19-24.

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3. Arderiu Fuentes X., Lacambra Castiñeiras M. J., Compaño Queralto M. J.,

Bioquímica clínica y patología molecular, Vol. I., Ed. Reverte, ed. 2a, Barcelona,
1998.
4. MSc. Yamilé Heredia-DíazI, MSc. Roberto Machado-GarcíaI, Lic. Marllelyn
Mendoza-SuárezII, Lic. Deylis Jardines-CalaIII, MSc. AlbisVázquez-DomínguezIV.
Desproteinización de muestras de suero y plasma para el estudio analítico de
carbamazepinan. Rev Cub Quim vol.28 no.3 Santiago de Cuba dic. 2016

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