AISLAMIENTO DE DNA PLASMÍDICO

Nombres: Mayén Bernal David; Fuentes Jiménez Luis Eduardo; Suárez

Gómez Alexis Gabriel
Grupo: 4QM2. Sección: 1
Correos: fcbdmb97@gmail.com sixcela@hotmail.com
Luis.a.r.e.c7@gamil.com

INTRODUCCION: la detección y selección de las bacterias que contienen

plásmidos.
Los plásmidos existen naturalmente en muchas especies
diferentes de bacterias. Fueron descubiertos por los OBJETIVO:
médicos y los científicos debido a que a menudo son
portadores de genes que le dan a sus bacterias Aislar DNA plasmídico bacteriano, comprobando dicho
huéspedes resistencias a uno o más antibióticos. En aislamiento mediante electroforesis en gel de agarosa
efecto, antibióticos históricamente potentes perdieron su RESULTADOS:
efectividad contra muchas de las infecciones bacterianas
de la actualidad debido a que los plásmidos se dispersan
entre las especies bacterianas mediante transferencias
horizontal. Los plásmidos que se emplean para la
investigación de DNA recombinante son derivados a DNA
partir de estos plásmidos naturales; sin embargo, son -Superenrrollado.
típicamente mucho más simples, dado que solo
contienen los elementos de DNA mencionados.

Los plásmidos son moléculas circulares de DNA de doble

cadena que se encuentran naturalmente en varias
especies de bacterias. Estos elementos genéticos son
extracromosomales, se replican de manera
independiente del cromosoma bacteriano y codifican para
una gran variedad de enzimas que confieren resistencia
a antibióticos y metales pesados, degradan complejos
orgánicos y/o producen toxinas, etc. Dadas estas
características, los plásmidos han sido empleados como
vectores o vehículos de clonación de moléculas de DNA
foráneas que permiten el transporte y manipulación de
este. Es así como, hoy en día, se dispone de una gran
variedad de plásmidos sintéticos de naturaleza modular
con características diversas para lograr ya sea la
clonación de un fragmento de DNA genómico, de cADN
o de PCR, o para la expresión de estos y obtención del
respectivo producto proteico.
Entre las propiedades de los plásmidos que favorecen su
utilización como vector de clonación se incluyen: su
pequeño tamaño que hace el DNA sea fácil de aislar y de
manipular ; su naturaleza circular que hace que el DNA
sea más estable durante la extracción; su origen de
replicación independientemente del control directo de la
replicación del cromosoma bacteriano; su múltiple
número de copias, de manera que se aumenta la
eficiencia de la extracción del DNA plasmídico; y la
presencia de marcadores seleccionables, tales como
genes de resistencia a antibióticos, haciendo así más fácil
-Lineal.
RNA
-Circular relajado.
Figura 1: Gel de electroforesis a base de agarosa, para
el corrimiento del DNA plasmídico, identificando las tres
posibles isoformas: superenrrollado, circular relajado y
lineal.
DISCUSIONES:
Para la obtención de DNA plasmídico se usan bacterias
con el plásmido, los cuales codifican para una gran
variedad de enzimas que confieren resistencia a
antibióticos y metales pesados, principalmente para
resistir a la presencia de estas sustancias.
Después de obtener el DNA plasmídico de las bacterias
sometidas a antibióticos, este se somete a varias
soluciones; la solución 1 (solución de GTE) la cual tiene
una fuente de carbono que es la glucosa, un regulador
osmótico que se le Tris y el EDTA, la función de esta
solución es retirar el cofactor y neutralizar. Después se
añadió la solución 2 la cual contienen SDS y NaOH esto
para lisar la bacteria con la presencia del detergente y
que se libere el contenido de la célula. Después se añadió
la solución 3 la cual tiene acetato de potasio el cual tiene
un efecto de Salting out para separar las
macromoléculas. Después se adiciona la solución 4 la
cual contiene Isopropanol la cual precipita al DNA
plasmídico que es el de interés. Después se agrega la
solución 5 la cual tienen la regulador tris-EDTA la cual
sirve para regular el pH y que el DNA se encuentre con
carga para que se pueda separa en la electroforesis.
Cabe recalcar que las soluciones 1 y 5 que tiene EDTA
sirve como agente quelante para el calcio y el magnesio
presente, los cuales son cofactores de nucleasas las
cuales degradan el DNA, es por ello que se utiliza y el
DNA se encuentre completo para su identificación.

CONCLUSIONES

Logramos observar la presencia de las distintas

estructuras del DNA plasmídico de unas bacterias esto
por medio de la electroforesis.

Bibliografía:
- Concepción J. Puerta B. Prácticas de biología
molecular. México: editorial Pontificia
Universidad Javeriana.c; 2005. 36p.