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Grupo 5QM2
Sección 3
Objetivos:
Conocer el manejo de un fluorómetro de filtros.
Conocer los factores fisicoquímicos que pueden abatir la fluorescencia.
Determinar el efecto del pH del disolvente sobre la intensidad de fluorescencia.
Determinar el efecto de la concentración de riboflavina en la intensidad de
fluoescencia.
Fundamento
La radiación electromagnética se origina cuando las partículas excitadas (átomos, iones o
moléculas) se relajan a niveles de menor energía cediendo su exceso de energía en forma
de fotones. La excitación puede producirse por diversos medios, tales como el bombardeo
con electrones u otras partículas elementales, que generalmente conduce a la emisión de
rayos X; la exposición a achispas de corriente alterna o al calor de una llama, un arco o un
horno, la cual produce radiación ultravioleta, visible o inflarroja; la irradiación con haz de
radiación electromagnética, que produce radiación fluorescente; una reacción química
exotérmica que produce quimioluminiscencia. La radiación emitida por una fuente excitada
se caracteriza adecuadamente por medio de un espectro de emisión, que generalmente
toma la forma de una representación gráfica de la potencia relativa de la radiación emitida
en función de la longitud de onda o de la frecuencia.
Entre los métodos de fotoluminiscencia. La fluorescenica y la fosforescenica son el
resultado de la absorción de la radiación electromagnética y la disipación de la energía
mediante la emisión de la radiación.
Resultados
Tabla1. Resultados de la curva de calibración de riboflavina en diferentes medios.
Riboflavina Intensidad de Intensidad de Intensidad de Intensidad de
(ppm) fluorescencia en fluorescencia en HCl fluorescencia en fluorescencia en
H20 0.1M CH3COOH 0.9M NaOH 0.1M
0 4.83 4.81 4.84 4.83
1 5.77 4.78 5.59 4.83
2 6.62 4.79 6.3 4.85
3 7.11 5.17 6.69 4.86
4 8.06 5.33 7.27 4.87
5 8.71 5.4 8.09 4.87
10 11.5 5.83 10.29 4.69
50 15.96 6.28 13.52 4.93
pH 5 1 3 13
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10
9
Intensidad de fluorescenica (RFC)
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0 1 2 3 4 5 6
Riboflavina (ppm)
Preguntas adicionales.
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Fluorescencia Fosforescencia
Ocurre de manera más rápida, se Ocurre de manera más lenta, se puede
completa en 10-5segundos o menos a extender durante minutos u horas
partir del tiempo de excitación. después.
En las mediciones de fluorescencia, la Dado a su baja intensidad para aumentar
fuente excita el analito y provoca la emisión la eficiencia, la fosforescencia se realiza a
de radiación característica, la cual se mide bajas temperaturas en medios rígidos,
generalmente de manera perpendicular al como los vidrios.
rayo incidente que proviene de la fuente.
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5. Aplicaciones de la fluorescencia
Discusión.
Haciendo referencia a la fluorescencia cabe mencionar que es uno de los diversos
mecanismos por los que una molécula puede regresar al estado basal después de que ha
sido excitada por absorción de radiación, entre los factores que pueden abatir dicho
mecanismo son el pH, la concentración del analito, presencia de la luz visible y la
temperatura, entre los cuales se evaluó el pH, con respecto a la figura 1 y 2 de la curva de
calibración de la riboflavina en diferente medios: agua, ácido acético, HCl y NaOH, cabe
mencionar que el agua en función al cambio de la concentración de la riboflavina y de las
lecturas de intensidad de fluorescencia expresada en unidades de fluorescencia resonante
(RFU), mantiene la proporcionalidad cumpliendo la ley de Bouguer y Beer, dado a que la
radiación emitida es proporcional a la concentración del analito. Con respecto al medio en
ácido acético igualmente se cumple con dicha proporcionalidad aunque en menor medida
en comparación con el agua.
Con respecto al ácido clorhidrico posiblemente a mayores concentraciones se llegara a
cumplir dicha proporcionalidad dado a la tendencia del gráfico, mientras que a medio
alcalino se pierde completamente la proporciolnalidad, teniendo baja fluorescencia, entre
las causas de una baja fluorescencia se atribuye al pH parámetro que se varió, por ejemplo
a pH ácido la fluorescencia baja dado a que los grupos amino se protonan perdiendo
resonancia en la molécula, por ello a pH 7 (H2O) hay mayor RFU, dado a que en la molécula
ocurren mayor número de resonancias por su conjugación. Sin embargo a pH alcalino no
hay fluorescencia, dado a que la molécula se desprotona, llegandose a romper perdiendo
la capacidad de poder llegar a emitir la radiación electromagnética que se le hacía incidir.
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Conclusión.
Referencia bibliográfica
José María Tijón Rivera, Rosa Olmo López, Amando Garrido Pertierra, César
Teijón López, María Dolores Blanco Gaitán. Bioquímica estructural. 2ª ed. Madrid:
Editorial TÉBAR; c2009. 35pp.
Douglas A. Skoog, Donal M. West, F. James Holles, Stanley R. Crouch. Química
analítica. 9a ed. México: CENGAGE Learning; c2015. Pp. 762-769
Plagio.