Test de Fragilidad Eritrocitaria:

I.- INTRODUCCIÓN:
 La fragilidad osmótica es la susceptibilidad de los eritrocitos a la hemolisis cuando se les
exponen a soluciones de presión osmótica decreciente, en condiciones constante de pH
y temperatura. La presente explicación de laboratorio ponemos en exposición a los
eritrocitos a soluciones tamponadas de Cloruro de Sodio (soluciones hipotónicas). Esta
prueba evalúa por tanto la capacidad que tienen los glóbulos rojos de soportar un
incremento de su contenido acuoso (resistencia osmótica eritrocitaria o ROE) hasta que
la capacidad de la membrana se sobrepasa y estalla.
II.- MATERIALES Y PROCEDIMIENTO:

a.- MATERIAL:

1. Material Biológico: Sujetos aparentemente sanos (Estudiantes de ambos sexos).

2. Material No Biológico:
a. Aparatos y Equipos:
- Centrifuga
- Fotocolorimetro Klett Summerson
b. Material de Vidrio:
- Micropipeta
- 8 Tubos de ensayo
- Lancet
c.-Soluciones y/o Reactivos: (ver anexo)
- Sangre recién extraida.
- Solución salina de las siguientes concentraciones: 0.10% 0.20% 0.30% 0.40% 0
0.50% 0.60% 0.70% 0.90%
b.-PROCEDIMIENTO:

Determinación: Método de Gordon Smith.

Fundamento:

 Consiste en determinar la resistencia a

hemólisis de los hematíes en contacto con una
serie de soluciones de cloruro de sodio de
concentración gradualmente progresiva
(soluciones hipotónicas).
Procedimiento:

 A 5 ml. de cada solución iso o hipotónica se añade 0.05 ml. de sangre total y se agita
rápidamente.
 Los tubos se dejan en reposo durante 30 minutos a temperatura ambiente pasado
este tiempo se vuelven a agitar y centrifugar a 3000 r.p.m. durante 5 minutos.
 Leer la densidad óptica en el fotocolorímetro con filtro verde y calcular el porcentaje
de lisis de los hematíes.
Ex
 % de lisis = % de lisis  x100
E1.0

 Determinar el número de eritrocitos que sufrieron hemolisis en cada tubo de ensayo.

III.-RESULTADOS

TUBO % de NaCl Lectura

I 0.9 0
II 0.7 0
III 0.6 1
IV 0.5 15
V 0.4 139
VI 0.3 186
VII 0.1 385

 Método Gráfico de la Fragilidad Osmótica de los Eritrocitos:




VII VI V IV III II I ← Nº de tubo de ensayo

 La hemólisis se inicia en NaCl al 60 %

 50% de hemólisis en NaCl al 30 %
  la hemólisis completa en NaCl al 10%

IV.- DISCUSION
La prueba de fragilidad osmótica indica la resistencia de
los eritrocitos a la ruptura por acción de la presión
osmótica, ejercida sobre la membrana eritrocitaria, al
colocarlos en soluciones salinas hipotónicas; es un
indicador de la razón volumen/superficie celular,
importante para el diagnóstico diferenciado y la
evolución de determinados tratamientos.

En individuos supuestamente sanos y sin alteraciones en la membrana de los eritrocitos, la

hemólisis se produce entre 0,45 % y 0,35 % de NaCl. Para la resistencia globular mínima se
toma como valor de referencia el 10 % de hemólisis, que representa el valor máximo
permisible para considerar la hemólisis dentro de los límites normales. Se toma como valor
de referencia para la resistencia globular máxima el 90 % de hemólisis. Cuando los eritrocitos
se colocan en una solución hipotónica, se incrementa el flujo de agua hacia el interior para
lograr el equilibrio de concentraciones de solutos entre el interior y el exterior celular, los
eritrocitos se hinchan hasta alcanzar el punto crítico, donde la membrana pierde su integridad
y ocurre la hemólisis.

La habilidad de los eritrocitos normales para resistir la hipotonicidad proviene de su forma

bicóncava y las propiedades elásticas de las membranas, las que permiten que la célula
aumente su volumen hasta un 70 % antes de que la membrana se estire; una vez superado
este límite ocurre la hemólisis. Se observa gran dispersión en los valores obtenidos, debido
fundamentalmente a la variabilidad biológica entre muestras, que se evidencia en diferencias
en la concentración de hemoglobina, el hematocrito y la presencia de estados patológicos,
etcétera.
V.- CONCLUSION
En la práctica observamos que la fragilidad de la membrana en los eritrocitos a un medio
hipotónico hace permeable a la entrada de agua hasta hacerlo estallar, esto indica que al
aumento de volumen al interior del eritrocito lo hace más frágil.