RESUMEN

En esta práctica se realizó la Prueba de Coombs Directo e Indirecto, en la cual

la Prueba de Coombs Directo consiste en determinar la sensibilización de los
hematíes por anticuerpos no aglutinantes (IgG) o fracciones del complemento,
específicamente C3d, por lo cual detecta la presencia de anticuerpos sobre la
superficie eritrocitaria a través de la antiglobulina de Coombs. La Prueba de
Coombs Indirecta permite detectar glóbulos rojos sensibilizados. El suero en
estudio es incubado con los glóbulos rojos por el tiempo adecuado, luego se
lavan para eliminar anticuerpos y otras inmunoglobulinas que no se han fijado en
el eritrocito. Asi mismo los objetivos planteados son: Determinar la existencia de
glóbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas y/o complemento in vivo, en
particular IgG y C3d (Coombs directo), Determinar la presencia de anticuerpos
irregulares en el suero del receptor (Coombs indirecto) y Determinar la
compatibilidad entre la sangre del donante y el receptor a transfundir (Coombs
cruzado).
 MARCO TEORICO

FUNDAMENTO

La prueba de Coombs (también conocida como prueba de antiglobulina) es un

examen de sangre que se usa en inmunología y hematología. Este análisis
puede detectar la presencia de anticuerpos en suero que reaccionan con
antígenos en la superficie de los glóbulos rojos. Hay dos tipos distintos de la
prueba de Coombs: el directo y el indirecto. La prueba de Coombs directa
detecta anticuerpos ya unidos a la superficie de los glóbulos rojos, y la prueba
de Coombs indirecta detecta anticuerpos libres que pueden reaccionar in vitro
con glóbulos rojos que tienen antígenos específicos.(1)
Forma en que se realiza la prueba de Coombs

La sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior

del codo o del dorso de la mano. El sitio se limpia con un desinfectante
(antiséptico). El médico envuelve una banda elástica alrededor de la parte
superior del brazo con el fin de aplicar presión en el área y hacer que la vena se
llene de sangre.

Luego, el médico introduce suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre

en un frasco hermético o en un tubo pegado a la aguja. La banda elástica se
retira del brazo. Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la
aguja y se cubre el sitio de punción para detener cualquier sangrado.

En bebés o en niños pequeños, se puede utilizar un instrumento puntiagudo

llamado lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en
un tubo pequeño de vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o en una tira
reactiva. Finalmente, se puede colocar un vendaje sobre el área si hay algún
sangrado.(2)

Resultados normales
Un resultado normal se conoce como un resultado negativo. Esto significa que
no hubo agrupación de células y que usted no tiene anticuerpos para los glóbulos
rojos.

Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Algunos laboratorios utilizan diferentes mediciones o analizan
muestras diferentes. Hable con su proveedor acerca del significado de los
resultados específicos de su examen.

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES

Una prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa que usted tiene
anticuerpos que actúan contra sus glóbulos rojos, lo cual puede deberse a:

 Anemia hemolítica autoinmune

 Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno similar
  Enfermedad en la sangre en recién nacidos llamada eritroblastosis
fetal (también conocida como enfermedad hemolítica del recién nacido)
 Mononucleosis infecciosa
 Infección por micoplasma
 Sífilis
 Lupus eritematoso sistémico
 Reacción a una transfusión, como la ocasionada por unidades de sangre
cotejadas de manera impropia

El resultado de esta prueba también puede ser anormal sin una causa clara,
especialmente entre las personas mayores.

Una prueba de Coombs indirecta anormal (positiva) significa que usted tiene
anticuerpos que actuarán contra los glóbulos rojos que el cuerpo interpreta como
extraños. Esto puede sugerir la presencia de:

 Eritroblastosis fetal
 Incompatibilidad sanguínea (cuando se utiliza en bancos de sangre)

RIESGOS

Hay poco riesgo al extraer sangre. Las venas y las arterias varían de tamaño de
una persona a otra y de un lado del cuerpo a otro. Extraer una muestra de sangre
de algunas personas puede ser más difícil que de otras. (3)

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA:

Esta prueba se usa para determinar si hay complemento o anticuerpos ya fijados
a glóbulos rojos tomados directamente del paciente. Estas células, alcanzadas
de una venopunción, se lavan y se incuban con reactivo de Coombs. Los
anticuerpos del reactivo se unen a IgG, IgM, o complemento que está unido a la
superficie de los glóbulos rojos. Se emplea la antiglobulina para la detección de
anticuerpos incompletos antieritrocitarios, que ya se encuentran unidos "in vivo"
a los hematíes.

Estos se aglutinan, produciendo grupos de células que indican un resultado

positivo.

 Trastornos asociados con un resultado positivo

 Anemias hemolíticas inducidas por fármacos
 Anemias hemolíticas inmunitarias
 Reacciones a transfusión
 Enfermedad hemolítica del recién nacido
 Trastornos linfoproliferativos, como leucemia linfocítica crónica
 Mononucleosis infecciosa

ANEMIA HEMOLÍTICA AUTOINMUNE

Los anticuerpos del paciente que reaccionan con sus propios glóbulos rojos
provocan destrucción eritrocitaria in vivo.

REACCIONES TRANSFUSIONALES HEMOLÍTICAS

Los anticuerpos del paciente que reaccionan con los glóbulos rojos
transfundidos, provocan destrucción eritrocitaria in vivo.

ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIÉN NACIDO

Los anticuerpos IgG de la madre que atraviesan la placenta, provocan
destrucción in vivo de los glóbulos rojos fetales. (4)

PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA:

Se detectan anticuerpos específicos de ciertos antígenos que no
necesariamente están presentados en los glóbulos rojos del paciente, pero
puede estar en glóbulos rojos de otras personas. Si se mezcla suero tomado de
un paciente que contiene estos anticuerpos con glóbulos rojos que sí muestran
estos antígenos específicos, los glóbulos rojos se van a cubrir con anticuerpo.
Una vez cubiertas, las células se van a aglutinar después de una exposición al
reactivo de Coombs. Por ejemplo, en el diagnóstico de eritroblastosis fetal, el
suero tomado de la madre Rh- no reacciona con su propia sangre, sino con la de
su feto Rh+.

Se emplea la antiglobulina para la detección de anticuerpos incompletos

antieritrocitarios no unidos "in vivo" a los hematíes. Por ello se realiza en dos
fases, en la primera se enfrentan los anticuerpos frente a hematíes de
antigeinicidad conocida para provocar su unión, y posteriormente se añade al
antiglobulina hemaglutinante. (4)

Resultados Falsos Positivos

 Presencia de polvo o partículas en los tubos.

 Contaminación de un tubo a otro.
 Centrifugación muy rápida o muy prolongada.

Resultados Falsos Negativos

 Lavado inadecuado de los glóbulos rojos.

 Tubos sucios.
 Presencia de coágulos en el suero o las células.
 Solución salina de pH incorrecto.
 Centrifugación a velocidad inapropiada.
RESULTADOS COOMBS DIRECTO

 Se realiza el lavado de los

glóbulos rojos para el Grupo
Sanguíneo “A” y “B” y para el
Grupo Sanguíneo “O”, este
procedimiento se repetirá por 3
veces

Extraemos 50 ul. de sangre de

ambos tubos y lo colocamos en
dos tubos de ensayo.

Luego agregamos a los tubos

¾ partes de solución salina
fisiológica.

Centrifugamos a 2500 RPM

por 1 minuto.
Retiramos los tubos de la
centrifuga y desechamos la
parte liquida.

Preparamos una suspensión al

5% de glóbulos rojos lavados
tanto para el Grupo Sanguíneo
“A” y para el Grupo Sanguíneo
“O” en estudio (50 ul. De
Glóbulos Rojos Lavados + 950
ul. De Cloruro de Sodio).

Una vez obtenidos la

suspensión de Glóbulos Rojos
al 5% del Grupo Sanguíneo “A”
y “O”, en dos tubos
respectivamente rotulados se
le agrega 100 ul de Glóbulos
Rojos al 5% a cada uno de
ellos y luego le agregamos
100 ul del reactivo de
Coombs.

Centrifugamos a 2500 RPM

por 1 minuto.
Retiramos los tubos de la
centrifuga y se realiza la lectura.

• En el tubo con el Grupo

Sanguíneo “O”, se le agrega 100 ul
de células control para corroborar si
la prueba esta validada.
Centrifugamos el tubo del Grupo
Sanguíneo “O” con las células
control y al Grupo Sanguíneo “A” a
2500 RPM por 1 minuto y leemos el
resultado
RESULTADOS DE COOMBS INDIRECTO

• Teniendo ya estos tubos

a cada uno se le debe agregar
100 ul de Glóbulos Rojos
lavados al 5 % más 100 ul de la
muestra (suero o plasma) de
acuerdo a su grupo sanguíneo.

Llevar los tubos a centrifugar a

2500 RPM por 1 minuto y
leemos.

 Se obtuvo como resultado

NEGATIVO de estos tres
tubos, para lo cual agregamos
100 ul de albumina al 22 %.

Luego centrifugamos los tubos

a 2500 RPM por 1 minuto y
leemos
Al realizar la respectiva lectura
nos dio como resultado
NEGATIVO el cual nos dio a
entender que no hubo
presencia de anticuerpos fríos

Después estos tubos son

llevados a incubar por 15
minutos a 37 C°, se realiza este
procedimiento para ver la
presencia de Anticuerpos
calientes (IgM).

Al retirar los tubos de la

incubadora, estos se agitan,
pudiendo notar que no se
produjo ninguna aglutinación,
entonces decimos que el
resultado es NEGATIVO

Estos tubos se los lleva a

centrifugar a 2500 RPM por 1
minuto
 • Después de la
centrifugación estos tubos
serán lavados por tres veces
donde nuevamente se llevara a
centrifugar por las mismas
revoluciones que ya se
mencionaron anteriormente.

Obtuvimos como resultado

NEGATIVO, para lo cual
agregamos 100 ul de Reactivo
de Coombs.

 Luego centrifugamos a 2500

RPM por 1 minutos y leemos,
en esta prueba se obtuvo como
resultado NEGATIVO

Para corroborar que la prueba

estuvo correctamente realizada
se le agrega a los tres tubos
células control, se los lleva a
centrifugar y se realiza la
lectura. Finalmente dio como
resultado POSITIVO el cual
significa que el procedimiento
realizado es correcto
 REPORTE DE RESULTADOS

NOMBRES Y CÓDIGO FASE RESULTADO

FECHA HORA
APELLIDOS
Séri térmi Coombs
ca ca
16/11/ 5:00 0001    Negativo
18 pm
16/11/ 5:00 0002    Negativo
18 pm
16/11/ 5:00 0003    negativo
18 pm
DISCUSION
Las pruebas de Coombs nos permite detectar anticuerpos y/o complemento
unidos al hematíe, como tal es el caso para la Prueba de Coombs Directo,
mientras que para la Prueba de Coombs Indirecto nos permite detectar la
presencia de anticuerpos irregulares presentes en el plasma o suero de la
muestra a estudiar. Es necesario saber en qué enfermedades suele darse un
resultado positivo para ambas pruebas. Sabiendo el fundamento de que cada
prueba, como grupo, hemos procedido a la realización de todo el procedimiento,
para que finalmente los resultados nos dieran negativos. Teniendo ya estos
resultados y sabiendo el fundamento de las pruebas empezamos a discutir los
resultados y del porque nos había salido negativo.
En primer lugar estos resultados nos salieron negativos, debido a que no existe
la presencia de anticuerpos y/o complemento, no presenta ninguna reacción de
Ag – Ac, lo cual se evidenciará mediante las aglutinaciones y en segundo lugar
podemos decir que las muestras eran de pacientes que no presentaban ninguna
enfermedad y al no existir alguna patología no provocará ninguna reacción.
Es de esta manera que como grupo de trabajo damos nuestras propias
discusiones en base a estas pruebas, teniendo en cuenta todos los
conocimientos necesarios para poder realizar un buen procedimiento y a su vez
dar buenos resultados.
CONCLUSIONES
 Determinamos la posible existencia de glóbulos rojos recubiertos con
inmunoglobulinas y/o complemento, en particular IgG y C3d – Prueba de
Coombs Directo.
 Determinamos la posible presencia de anticuerpos irregulares en el suero
del receptor – Prueba de Coombs Indirecto.
BIBLIOGRAFÍA
1 BUENAS TAREAS. [Online]. [cited 2018 noviembre 30. Available
. from: https://www.buenastareas.com/ensayos/Test-De-
Coombs/46392696.html.
2 clinicadam. [Online]. [cited 2018 diciembre 01. Available from:
. https://www.clinicadam.com/salud/5/003344.html.
3 [Online]. [cited 2018 noviembre 30. Available from:
. http://kelseyseyboldse3.adam.com/content.aspx?productId=118&
pid=5&gid=003344.
4 [Online]. [cited 2018 diciembre 1. Available from:
. https://es.scribd.com/document/155234118/PRUEBA-DE-
COOMBS-Directa-e-Indirecta-doc.