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RIALA6/1396
Carina de Souza GONDIM, Roberto Gonçalves JUNQUEIRA, Scheilla Vitorino Carvalho de SOUZA*
RESUMO
A crescente importância das análises qualitativas e a necessidade de confiabilidade dos resultados
analíticos para subsidiar as tomadas de decisões nos diversos setores da cadeia produtiva de alimentos
são inquestionáveis, acarretando impactos na saúde pública, na economia e nos direitos do consumidor.
Contudo, a validação desses métodos tem sido um ponto crítico na implantação de sistemas de gestão
da qualidade e nos processos de acreditação de laboratórios. Apesar da existência de protocolos bem
estabelecidos para validação de métodos quantitativos, ainda existe uma lacuna no desenvolvimento
de abordagens para a implementação da metrologia em análises qualitativas. Neste contexto, o presente
trabalho apresenta uma discussão sobre o tema validação de métodos qualitativos, abrangendo definições,
delineamento experimental e análise de dados para avaliação dos parâmetros de desempenho aplicáveis
como taxas de falsos resultados, taxa de confiabilidade, taxa de seletividade, taxa de sensibilidade, limite
de detecção, região de perda de confiabilidade, acordância, concordância e robustez.
Palavras-chave. validação intralaboratorial, método de ensaio qualitativo, parâmetros de desempenho.
ABSTRACT
The growing importance of qualitative analysis and the need for reliable analytical results in order to support
the decision making at various sectors of food chain are unquestionable, with impacts on the economy,
public health and consumer rights. However, the validation of these methods has been a critical point in
the quality management systems implementation, and also in the processes for laboratory accreditation. In
spite of the existence of well-established protocols for the validation of quantitative methods, there is a gap
in the development of approaches for the implementation of metrology in the qualitative analysis. In this
context, this paper deals with the validation of qualitative methods, including definitions, experimental
design, and analysis of results for evaluating the applicable performance parameters, such as false response
rates, reliability, selectivity, sensitivity, detection limit, region of unreliability, accordance, concordance
and robustness.
Keywords. in-house validation, qualitative methods, performance parameters.
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segurança alimentar, como técnicas acopladas, incluindo medidas de absorvância embora, em princípio, qualquer
cromatografia e espectrometria de massas ou outras instrumento possa ser utilizado. Em uma abordagem
técnicas espectroscópicas, essas poderosas ferramentas metrológica, os métodos binários instrumentais
envolvem investimentos consideráveis e requerem distinguem-se em instrumentais baseados em sinais
analistas altamente capacitados. Do ponto de vista univariados e instrumentais baseados na identificação de
prático, muitos usuários têm reconsiderado até que ponto características específicas14. Os métodos instrumentais
é realmente necessário obter resultados quantitativos6. baseados em sinais univariados são basicamente métodos
Na rotina dos laboratórios, muitas vezes torna-se inviável quantitativos utilizados como métodos qualitativos.
o processamento de milhares de amostras por métodos Desse modo, o resultado final é obtido pela comparação
convencionais15, sendo adotada uma primeira etapa entre as respostas de duas amostras, sendo que uma das
para determinação da presença de um ou mais analitos amostras contém o analito de interesse em um nível de
(métodos de vanguarda/triagens) e uma segunda etapa concentração determinado. Os métodos instrumentais
para estimativa do nível de concentração dos mesmos baseados na identificação de características específicas são
(métodos de retaguarda/confirmação e quantificação). multiparamétricos, ou seja, a reposta analítica depende de
Assim, os métodos qualitativos têm sido comumente vários parâmetros envolvidos na análise e a identificação
empregados para triagens antes da confirmação e dos compostos está baseada, por exemplo, no tipo ou na
quantificação, devido ao tempo e custo analítico reduzidos presença de compostos críticos da amostra.
desses métodos6.
VALIDAÇÃO DE MÉTODOS QUALITATIVOS
CLASSIFICAÇÃO DE MÉTODOS QUALITATIVOS
A Norma ISO/IEC 17025:2005 é a norma
Os métodos qualitativos podem ser: identificação internacional que trata dos requisitos para a
de analitos ou classificação de amostras. A identificação implementação de sistemas de gestão da qualidade em
de analitos, por meio de técnicas analíticas modernas, laboratórios de ensaio e calibração. A norma estabelece que
tem sido muito utilizada. Por outro lado, as análises métodos normalizados utilizados fora dos escopos para
qualitativas de classificação têm como objetivo fornecer os quais foram concebidos, ampliados ou modificados;
uma classificação de amostras rápida e confiável, em métodos não normalizados e métodos criados ou
níveis de critérios previamente estabelecidos. As análises desenvolvidos pelos laboratórios devem ser validados.
qualitativas podem ser implementadas pelo uso de Apesar de não tratar da necessidade de validação para
ferramentas analíticas, podendo utilizar sistemas como métodos normalizados, a referida norma define que os
os kits de testes, que produzem resultados binários sem laboratórios devem confirmar se têm condições para
nenhum tratamento de dados, ou sistemas baseados operar adequadamente os métodos normalizados antes
em técnicas analíticas, que fornecem dados brutos e da implantação dos ensaios2.
requerem um tratamento posterior para sua conversão Vários são os documentos que podem ser utilizados
em resposta binária. O primeiro grupo é mais usado para como referência na elaboração de procedimentos de
a classificação de amostras, enquanto o segundo é mais validação intralaboratorial de métodos analíticos, embora
apropriado para a identificação de analitos18. não exista uma uniformidade sobre quais características
Outras classificações são propostas para os devam ser determinadas no processo de validação.
métodos qualitativos. Com base na técnica classificam- O documento orientativo DOQ-CGCRE-008 do
se em químicos, físico-químicos, bioquímicos ou INMETRO10 é a principal referência nacional, podendo
biológicos19, diferenciam-se de acordo com o estado físico ainda ser citada a Instrução Normativa 24 de 2009 do
da amostra em sólido, líquido ou gasoso20 ou ainda com Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento21
o sistema de detecção em sensorial ou instrumental6,20. para validação de métodos no âmbito do Programa
A principal característica dos métodos qualitativos Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em
baseados em detecção sensorial é que o sentido humano Produtos de Origem Animal (PNCRC). Documentos
é utilizado para registro e interpretação da resposta. Os como o guia publicado pelo EURACHEM11, a diretiva
métodos baseados na detecção instrumental fornecem da União Europeia Comission Decision 2002/657/EC que
respostas instrumentais que, em muitos casos, são estabelece Regulamentos sobre Desempenho de Métodos
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Tabela 1. Parâmetros de desempenho estudados na validação de abarca conotações negativas dos erros nas medições
métodos qualitativos e respectivos parâmetros correspondentes na qualitativas. A confiabilidade é uma propriedade
validação quantitativa
principal dos testes qualitativos, podendo ser relacionada
Método Qualitativo Método Quantitativo à exatidão dos métodos quantitativos14,16.
Taxas de falso-positivos, As taxas de sensibilidade e seletividade são
de falso-negativos, de parâmetros de desempenho de métodos qualitativos,
Exatidão
confiabilidade, rastreabilidade intimamente relacionados com as taxas de falsos
metrológica resultados. A sensibilidade, também chamada poder
Taxa de sensibilidade Sensibilidade do teste, consiste na habilidade do método em detectar
Taxa de seletividade/ amostras verdadeiramente positivas como positivas,
Seletividade
Confirmação de identidade
enquanto a taxa de sensibilidade correspondente à
Região de perda de
confiabilidade
Incerteza probabilidade de um método classificar como positiva
Limite de detecção/Limite de uma amostra sabidamente positiva6,8,17. No contexto de
Limite de detecção/
quantificação/Limite de decisão/ testes de hipóteses estatísticos, poder do teste é também
Limite de corte
Capacidade de detecção definido como 1-β, em que β representa a probabilidade
Robustez Robustez de se obter resultados falso-negativos5.
Acordância e Concordância Precisão De maneira análoga, a seletividade corresponde
à habilidade em detectar amostras verdadeiramente
Fonte: Adaptado de Trullols et al.6; Ellison e Fearn8 e Ríos et al.14 negativas como negativas, sendo a taxa de seletividade a
probabilidade de classificar como negativa uma amostra
Os parâmetros de desempenho dos métodos sabidamente negativa6,8,17. Em testes de hipóteses
podem ser classificados em: principais, básicos estatísticos (1-seletividade) é relacionada ao nível de
e de produtividade17. Os principais (exatidão e significância α, o qual representa a probabilidade de se
representatividade) constituem os atributos do resultado obter resultados falso-positivos5.
analítico, relacionados às duas propriedades metrológicas Quando amostras que podem ou não conter
clássicas – rastreabilidade e incerteza. Parâmetros determinado analito são analisadas, as taxas de falsos
analíticos básicos (precisão, robustez, sensibilidade e resultados, de sensibilidade e de seletividade são
seletividade) são os atributos relacionados ao processo parâmetros que caracterizam a eficiência do método
de medição analítico e que servem de suporte para as de ensaio em questão. Para amostras que contêm o
propriedades principais. Por fim, os de produtividade analito, outros parâmetros podem ser estimados como
correspondem aos atributos do processo analítico que o valor preditivo positivo e o valor preditivo negativo.
possuem relevância prática, como velocidade, custo/ No entanto, como em ensaios com amostras reais, é
efetividade e fatores pessoais. impossível distinguir as respostas falsas das verdadeiras,
Na definição das propriedades analíticas dos ou seja, os resultados verdadeiramente positivos dos
métodos qualitativos, dois parâmetros são de suma falso-positivos e os verdadeiramente negativos dos falso-
importância: a taxa de falso-positivos e a taxa de falso- negativos, os valores preditivos podem ser estimados
negativos. A taxa de falso-positivos é a probabilidade somente se a prevalência de amostras contendo o analito
de obter um resultado positivo, uma vez que o analito for conhecida27.
não está presente na amostra (ou do método avaliado Nas análises qualitativas, a incerteza não pode ser
responder positivamente a um método de referência). expressa do mesmo modo que nas análises quantitativas,
A taxa de falso-negativos é a probabilidade de obtenção ou seja, como um parâmetro que caracteriza a dispersão
de um resultado negativo quando a substância está dos resultados. No caso dos métodos qualitativos, a
presente na amostra (ou do método avaliado responder incerteza tem uma natureza probabilística, podendo ser
negativamente a um método de referência)6,8,26. definida como a probabilidade de se tomar uma decisão
A confiabilidade de um método qualitativo errada. Os métodos com respostas binárias não possuem
é definida como a proporção de resultados corretos um número associado ao resultado e, assim, a incerteza
(positivos ou negativos) de uma bateria de testes não é expressa como um valor numérico, mas como uma
independentes. Trata-se de um parâmetro positivo, que região onde há probabilidade de ocorrência de erros. Nos
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métodos qualitativos, o conceito clássico de incerteza das variáveis críticas na garantia da confiabilidade das
pode ser substituído pelo conceito de região de perda de respostas. A robustez depende da concentração dos
confiabilidade, termo preferencialmente utilizado. Esta analitos, sendo que, na faixa de perda de confiabilidade,
região é definida pelos limites superiores e inferiores de haverá maior influência de fatores experimentais4,17.
concentração, entre os quais o método produz resultados A rastreabilidade metrológica, do ponto de vista
falsos5,6,14,28. prático, assume que existe uma cadeia ininterrupta de
O limite de detecção, conforme definido para calibrações de um sistema de medição ou comparações.
análises quantitativas, pode ser calculado quando a Entre outras possibilidades, a rastreabilidade metrológica
resposta é um valor numérico, sendo consideradas duas pode ser obtida comparando os resultados obtidos pelo
probabilidades de erro α e β29, onde α é a probabilidade método em validação com aqueles obtidos por um
de se cometer um erro do tipo I, de rejeitar H0 (hipótese método de referência ou pelo uso de um material de
de nulidade) quando H0 é verdadeira, que mede a taxa referência certificado (MRC)6,14,30. É importante ressaltar
dos falso-positivos e β é a probabilidade de se cometer que os padrões de referência são a chave para a garantia
um erro do tipo II, de não rejeitar H0 quando H0 é falsa, da rastreabilidade metrológica das informações e
que mede a taxa de falso-negativos. Quando a resposta é resultados fornecidos pelos métodos qualitativos, já que
binária, entretanto, o desvio padrão de amostras brancas as características analíticas desses padrões são utilizadas
não pode ser calculado e as probabilidades de erro não como base de comparação para compostos desconhecidos
podem ser consideradas ao mesmo tempo. Portanto, da amostra14.
o limite de detecção pode ser definido como a menor Dois outros parâmetros são ainda acrescentados
concentração de um analito que pode ser detectada, às validações de métodos qualitativos, quando
confiavelmente como positiva, em uma dada matriz. estruturadas em processos interlaboratoriais: a acordância
Isto implica em considerar somente o erro tipo II, ou e concordância, que correspondem respectivamente, aos
taxa de resultados falso-negativos, usualmente de 5 %. conceitos de precisão sob condições de repetitividade
Esta definição é apresentada no contexto de verificação e de reprodutibilidade, aplicados a testes qualitativos.
de um nível máximo de concentração permitido, mas se A acordância é a probabilidade de obter, para duas
for extrapolado a determinação de uma concentração amostras idênticas, analisadas no mesmo laboratório e,
mínima permitida, a probabilidade de erro tipo I, ou sob condições de repetitividade, o mesmo resultado. Para
taxa de falso-positivos, deve ser considerada também a 5 o cálculo da acordância, calcula-se a acordância para
%. Como as duas probabilidades de erro não podem ser cada laboratório, que é a probabilidade de duas amostras
consideradas simultaneamente, no primeiro caso o limite fornecerem o mesmo resultado e, em seguida a média
de detecção coincidirá com o limite superior da região de das probabilidades de cada laboratório31. Concordância
perda de confiabilidade, na qual a taxa de sensibilidade é é a probabilidade de obtenção do mesmo resultado
de 95 % e, no segundo caso, ele coincidirá com o menor para duas amostras idênticas, testadas em laboratórios
limite da região de perda de confiabilidade6. diferentes e, sob condições de reprodutibilidade. Esse
Além do limite de detecção do método, que é parâmetro é estimado pelas proporções correspondentes
uma característica intrínseca do método de ensaio, o de pares de resultados de dados concordantes8,31. Da
limite imposto pela legislação ou pelo cliente e o limite mesma forma que, em estudos de métodos quantitativos,
de corte do laboratório para métodos que possuem experimentos de concordância podem ser conduzidos
respostas instrumentais (cut-off) estão entre as referências sob condições de precisão intermediária, representando o
quantitativas envolvidas nos resultados dos métodos que normalmente acontece no laboratório sob condições
qualitativos17. de rotina, incluindo variações em lotes de reagentes,
A robustez é a estimativa da capacidade de um analistas e equipamentos que sejam representativos13.
método frente às pequenas e deliberadas mudanças nas Na validação de métodos qualitativos, a
variáveis estudadas, sendo determinada em diferentes representatividade torna-se um componente essencial da
níveis de concentração do analito18. A robustez em qualidade das repostas qualitativas. Uma resposta 100 %
análise qualitativa é um parâmetro analítico, assim como confiável, mas não representativa das amostras teste, indica
nas análises quantitativas, cujo ultimato é definir as um resultado inadequado do ponto de vista da qualidade
fragilidades experimentais de um método pela indicação do método. Estratégias adequadas de amostragem e a
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Tabela 2. Delineamentos experimentais e respectivas ferramentas para análise de dados propostos na literatura para validação de métodos
qualitativos
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qualitativo, como positivo (maior ou igual a um pode ser definida como a razão entre TN e a soma desse
valor especificado) ou negativo (menor que o valor com FP, multiplicada por 100 (Equação 4) 6,8,17:
especificado), e duas possíveis situações reais, uma
TP
tabela de contingência 2 x 2 pode ser construída, como TSB = x 100 (Eq. 3)
TP + FN
apresentado na Tabela 3. Embora as amostras sejam
consideradas em dois grupos, são necessários estudos
TN
com amostras em vários níveis de concentração5. Estas TST = x 100 (Eq. 4)
TN + FP
tabelas podem ser utilizadas na determinação das
taxas de falsos resultados, taxa de seletividade, taxa de
sensibilidade e taxa de confiabilidade para cada nível de A taxa de confiabilidade (TCF) é definida como a
concentração estudado6. diferença entre o total de resultados (100 %) e a soma de
TFP e TFN, como apresentado na Equação 5:
Tabela 3. Exemplo de Tabela de Contingência 2 x 2
Resultado Analito Analito TCF = 100 - TFP - TFN (Eq. 5)
Total
do teste Presente Ausente
Positivo TP FP TP + FP
Negativo FN TN FN + TN As tabelas de contingência são freqüentemente
usadas na avaliação da confiabilidade dos testes de
Total FN + TP FP + TN N
triagem e na comparação entre diferentes ensaios, que
FP = quantidade de resultados falso-positivos; FN = quantidade de se baseia na sensibilidade e na seletividade de diferentes
resultados falso-negativos; TP = quantidade de resultados positivos testes de triagem, quando aplicados às mesmas
corretos; TN = quantidade de resultados negativos corretos; N =
TP+FP+FN+TN amostras. Nesse caso, deve ser observado que diferenças
na sensibilidade e na seletividade dos testes podem ser
resultado do acaso, já que situações reais e resultados
A partir das fórmulas de cada uma das taxas, os estão sujeitos a erros aleatórios, especialmente quando
valores de cada uma delas podem ser calculados com o número de amostras é pequeno. Dependendo do
os dados da tabela de contingência. A taxa de falso- objetivo da análise, é preferível que o método seja
positivos (TFP) é definida como a razão entre o número mais sensível que seletivo, ou vice-versa. Em geral, um
de resultados falso-positivos (FP) e a soma desse com aumento na sensibilidade acarreta um decréscimo na
o número de resultados negativos corretos ou número seletividade. Desse modo, quanto maior o número de
total de negativos conhecidos (TN), multiplicada por 100 amostras, mais informação a tabela de contingência
(Equação 1)6,8,26: e, como consequência irá apresentar, maior será a
confiabilidade desses parâmetros5.
FP
TFP = x 100 (Eq. 1) Uma das vantagens mais importantes das tabelas
FP + TN
de contingência é que essas podem ser facilmente
aplicáveis a vários tipos de bioensaios, como imunológicos,
De maneira análoga, a taxa de falso-negativos microbiológicos, clínicos e bioquímicos. Embora pela
(TFN) é a razão entre o número de resultados falso- avaliação das tabelas de contingência seja possível obter
negativos (FN) e a soma desse com o número de resultados uma visão geral sobre o desempenho do método, tais
positivos corretos ou número total de positivos conhecidos tabelas, por si só, não fornecem informações individuais,
(TP), multiplicada por 100 (Equação 2)6,8,26: como a probabilidade de erro para cada amostra6. Outra
desvantagem é que o desempenho da tabela de contingência
FN
TFN = x 100 (Eq. 2) depende muito do tamanho da amostra e do delineamento
FN + TP
experimental utilizado para construí-la5.
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por sua versatilidade e aplicação em diversos campos da partir da proporção de resultados corretos para os itens
ciência, para expressar e atualizar probabilidades quando de ensaio que não contém o analito (Equação 10)6,8,17:
estruturas dicotômicas33 estão envolvidas, incluindo as
Resultados positivos verdadeiros TP
análises qualitativas5,33. P(T|A) = x 100 =
TP+FN
= TSB (Eq. 9)
Total de resultados positivos
O teorema de Bayes é representado pela Equação 6:
P(T|A) . P(A) P(T|A) . P(A) Resultados negativos verdadeiros TN
P(A|T) = = (Eq. 6) P( | ) = x 100 = = TSB (Eq. 10)
P(T|A) . P(A) + P(T| ) . P( ) P(T) Total de resultados negativos TN+FP
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positivos e N(x) a taxa de resultados negativos, para uma A principal desvantagem das curvas de
determinada concentração de referência C (x = C), os desempenho é a necessidade de realização de análises em
possíveis resultados obtidos em um método binário são: replicatas, acarretando consequências negativas, como
não (resultados negativos), quando x < C, com P(x) = 0% o aumento do tempo e custo do processo6. Contudo,
e N(x) = 100%; e sim (resultados positivos), quando x > Ellison e Fearn8 observaram que o estudo de um grande
C, com P(x) = 100% e N(x) = 0%28,36. número de níveis com poucas repetições por nível, em
No entanto, em situações reais, em concentrações vez de poucos níveis com muitas repetições, fornece
próximas a C (C0 < C < C1), P(x) e N(x) apresentam estimativas de probabilidades relativamente confiáveis, o
valores entre 0% e 100%. A faixa de concentração que pode ser considerada uma vantagem sob o ponto de
que inclui esses valores intermediários é justamente a vista prático.
região de perda de confiabilidade. Assim, nesta região, Este procedimento é bastante usado quando não
são obtidas as taxas de falso-positivos (C0 < x < C) e há muito conhecimento sobre a precisão do método de
as taxas de falso-negativos (C < x < C1). Para amostras triagem utilizado, por exemplo, no caso de um método
contendo x < C0 e x > C1, são obtidos resultados analítico recém-implantado em um laboratório5.
negativos e positivos, respectivamente, com 100% de
confiabilidade28. Testes de Hipóteses
Na Figura 1, estão ilustradas as curvas de Quando o objetivo da análise está na determinação
desempenho para a situação ideal e para uma situação da presença de determinado analito na amostra, duas
real genérica, em que α = β = 0,0514,28,36. Na curva hipóteses são geradas: H0 (hipótese de nulidade) - a
de desempenho real, o limite de detecção pode ser amostra contém o analito; e H1 (hipótese alternativa) - a
estabelecido em função de α ou de β no intervalo da amostra não contém o analito.
região de perda de confiabilidade que, por sua vez, é Como resultado, pode-se obter dois tipos de erros
determinada pela região de maior inclinação da curva, diferentes: erroneamente detectar a presença do analito
ou seja, pelo intervalo entre os níveis nos quais a (admitir um resultado falso-positivo - erro tipo I) ou sua
probabilidade de resultados positivos deixa de ser de 0% e ausência (admitir um resultado falso-negativo - erro tipo
100%5,6,11,28. Assim, os limites C0 e C1, que definem a região II). Em geral, a preferência de uma escolha ou outra é
de perda de confiabilidade, podem ser determinados pelo uma questão de convenção27.
cálculo das concentrações do analito que produzem 5% Os testes de hipóteses comparam a resposta
de probabilidade de obtenção de falso-positivos e 95% de da amostra com a de uma referência pré-definida, que
resultados positivos corretos (o que corresponde a 5% de contém o analito em um nível de concentração específico6.
probabilidade de obtenção de falso-negativos). Alguns estudos têm utilizado testes de hipóteses para
avaliar a incerteza dos métodos qualitativos5 e, embora
a aplicação destes testes não resulte em novas técnicas
instrumentais de análise química qualitativa, esses
tornam possível a melhoria do desempenho das atuais
técnicas de estimativa de incerteza, refletindo o grau de
confiabilidade do procedimento escolhido.
As abordagens utilizadas para exprimir a
incerteza são possíveis pela aplicação de analogia
de testes estatísiticos de hipóteses com a aplicação
das fórmulas de Bayes37. Desse modo, as principais
vantagens dos testes de hipóteses decorrem da utilização
da probabilidade conhecida de erro tipo I e tipo II.
Esse método torna mais fácil a avaliação da incerteza
quando se utiliza métodos qualitativos que fornecem
uma resposta instrumental. A rastreabilidade também
Figura 1. Curva de desempenho para determinação da região de pode ser verificada e o limite de detecção calculado.
perda de confiabilidade e limites relacionados No entanto, se o kit de teste não fornecer uma resposta
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instrumental ou se a resposta for baseada em uma significância da influência dos fatores sobre as respostas
observação visual, que não pode ser quantificada, o (Equação 14):
teste de hipótese não poderá ser aplicado6. Quando
se utilizam intervalos estatísticos, os experimentos |DF| × - nj
t= (Eq. 14)
constituem uma série de análises de amostras s× 2
independentes, contendo o analito em um limite
específico, sob condições de precisão intermediária, Sendo s o desvio padrão encontrado em condições
aumentando as fontes de incerteza5. de precisão intermediária e DF o efeito de cada fator,
definido entre 0 e 1. O valor calculado deve ser comparado
Robustez ao valor tabelado de distribuição t, considerando o
O tipo de resposta binária do método qualitativo nível de significância e o número de graus de liberdade
define o estudo da robustez, que por sua vez, envolve o associados à estimação de s4.
desenvolvimento de um delineamento experimental para
avaliação de fatores ou variáveis previamente escolhidos Acordância e concordância
que acarretam alterações na confiabilidade e nas taxas Como definido, a acordância é o parâmetro de
de falsos resultados. Esses fatores são as condições repetitividade aplicado à análise qualitativa. A acordância
experimentais intrínsecas do método4. Desse modo, é a probabilidade (em porcentagem) de dois materiais
a robustez deve ser determinada em diferentes níveis de teste idênticos, analisados pelo mesmo laboratório,
de concentração do analito para cada um dos analitos em condições de repetitividade, fornecerem o mesmo
considerados18. resultado, ou seja, ambos fornecerem dois resultados
Assim, em termos gerais, o estudo da robustez positivos ou dois negativos31.
inclui os seguintes pontos: seleção das variáveis ou Para o cálculo da acordância, calcula-se a
fatores, seleção do número de níveis para cada variável probabilidade de cada laboratório ou de cada bateria
(em geral 2 níveis) e do delineamento experimental analítica (em estudos interlaboratoriais sob condições
ótimo, estabelecimento do valor de reposta que provoca de precisão intermediária) fornecer o mesmo resultado
alterações nos fatores e nos experimentos e do cálculo e, em seguida, a média das probabilidades de todos os
dos efeitos de cada fator e entre os fatores; e elaboração laboratórios ou baterias analíticas. A soma da quantidade
das conclusões4. de combinações de pares obtida pelo número de
Uma boa opção de delineamento experimental resultados positivos com a quantidade de combinações
para o estudo da robustez, quando não se tem muitas de pares obtida pelo número de resultados negativos
variáveis e níveis envolvidos, é um experimento fatorial divida pela quantidade de combinações de pares, que
completo4. O delineamento experimental inclui a podem ser formados pelo total de análises realizadas,
realização de testes em nível para o qual se obtém 100% fornece a probabilidade de cada laboratório ou de cada
de confiabilidade, ou seja, 0% de taxa de falso-positivos e bateria analítica, ou seja, a acordância. De uma maneira
de 0% de taxa de falso-negativos, com variação nos níveis mais simples, a acordância pode ser calculada pela
dos fatores estudados. O efeito de cada fator (DF) pode Equação 15.
ser calculado pela Equação 13:
{k(k-1) + (n-k) (n-k-1)}
ACO = (Eq. 15)
∑TCF (+) - ∑TCF (-) n(n-1)
DF = (Eq. 13)
nj
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