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Laboratorio de Fisiología.
Grupo 10/ 24 de octubre de 2014
Objetivos.
Material y Método.
1. Obtención del frotis vaginal. El frotis vaginal se llevó a cabo mediante un hisopo de algodón,
previamente humedecido con solución salina fisiológica. La muestra se extendió sobre un
portaobjetos y posteriormente se procedió a teñirla, para ello fue necesario sumergir el
portaobjetos con el frotis en solución de hematoxilina durante 8 minutos. Posteriormente se
lavó y se le adicionó eosina por un tiempo de 5 minutos, se enjuagó la muestra con etanol y
se procedió a analizarla.
2. Características del útero y ovarios dependientes de la etapa del ciclo estral. Se realiza un
corte transversal a la altura del abdomen, tratando de localizar el sistema reproductor de la
rata. Una vez ubicado, realizar un nudo entre el útero y la vagina, para separar uno de otro.
Asimismo se hace un amarre entre el ovario y el útero, para que de esta manera, al momento
de separar ovarios y útero, el fluido intrauterino no se perdiera.
Limpiar de la mejor manera el útero, despejando todo tejido no uterino y pesar en la balanza.
Resultados.
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Análisis de resultados.
1. Obtención del frotis vaginal. De la imagen 1 obtenida mediante el frotis vaginal con
solución salina y la tinción aniónica de dicha muestra; se puede apreciar que se
obtuvieron solamente células epiteliales amorfas, cornificadas y sin nucleó; esto
nos lleva a inferir que la rata utilizada en esta práctica se encontraba dentro de la
fase estro perteneciente al ciclo estral.
2. Características del útero y ovarios dependientes de la etapa del ciclo estral. Las
características que pudimos observar en el útero y en los ovarios y con la observación del
frotis vaginal, podemos confirmar que el útero de nuestra rata se encontraba en la fase
estro del ciclo estral de la rata.
Discusión de resultados.
Estro, significa “molestia”; cuando una rata hembra está en estro, su condición hormonal
la incita a actuar en forma diferente de cómo lo hace en otros momentos. La característica
que distingue los ciclos menstruales de los del estro es el crecimiento y pérdida mensual
del recubrimiento del útero – excepto que el ciclo del estro de las ratas dura cuatro días –.
Los ciclos menstruales y estro consisten en una secuencia de eventos controlados por
secreciones hormonales de la glándula hipófisis anterior. La conducta sexual de roedores
hembras depende de las hormonas gonádicas presentes durante el estro: estradiol y
progesterona. (Carlson, 1996).
Una vez obtenida la muestra del frotis vaginal, y haciendo la asimilación con los
resultados obtenidas de ella se confirma la fase estral en la que se encontraba nuestra rata.
El útero que tienen las ratas poseen dos cuellos uterinos, comunicadas entre sí por una
vagina, al hacer esta descripción y relacionarlo con las imágenes mostradas en los
Resultados (Imagen 2 y 3) se confirma lo mencionado, puesto que para hacer la
separación entre útero y ovario, fue necesario conocer la anatomía del sistema reproductor
de la rata.
𝑔
8 𝑚𝑔 × = . 𝑚𝑔 𝑟 𝑎 𝑎 𝑔.
𝑔
Esto nos indica el peso uterino por cada 100 g de peso corporal de la rata.
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El ciclo estral de la rata dura de 4 a 5 días, por lo que es bastante corto si se compara con el ciclo menstrual de la mujer, aproximadamente de 28
días. La ovulación se produce espontáneamente. Las fases del ciclo son: proestro, estro (al final de la cual ocurre la ovulación), metaestro y diestro
(Gorbman et al, 1983; Hebel & Stromber, 1986). Los principales cambios que ocurren en las distintas fases del ciclo estral a nivel de ovario, útero,
vagina y conducta se mencionan en la siguiente tabla.
Tabla 1. Resumen de los cambios hormonales a nivel ovario, útero, epitelio, vaginal y conducta de las distintas fases del ciclo estral de la rata.
Los folículos ováricos tienen un tamaño medio de 300 a 500 μm y se encuentran presentes en cualquier fase del ciclo estral. En general, un
grupo de folículos comienza la fase de maduración, pero sólo una parte de este grupo termina ovulando, el resto, por el contrario sufre atrofia. El
cuerpo lúteo de los folículos rotos crece durante dos o tres días y luego decrece lentamente. Hay que descartar que el ciclo estral se caracteriza por
una fase lútea reducida (secreción escasa de progesterona y cambios en el epitelio uterino menos evidentes), en contraste con la prominencia de
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ésta fase en el ciclo mensual de los primates. Si la fecundación no ocurre, el cuerpo lúteo se degenera y un
nuevo grupo de folículos ováricos maduran.
Los cambios en el ovario vienen acompañados por cambios en el útero (hiperemia, aumento del
contenido hídrico, hiperplasia e hipertrofia del endometrio) y aumento espontáneo de la contracción de la
musculatura uterina y vaginal. Durante el estro, la rata está sexualmente receptiva y realiza una conducta
llamada lordosis, que es el conjunto de cambios posturales que indican su receptividad y facilitan la
copulación (Gorbman et al, 1983).
Proestro. Día antes de la ovulación. Puede durar entre 12 y 18 horas. Abundan las células
epiteliales de gran tamaño y con núcleo. No hay leucocitos. Dentro de esta fase se pueden distinguir varias
subfases según el número de células y tamaño de los núcleos. En proestro tardío las células epiteliales
superficiales empiezan a transformarse en células cornificadas, con aspectos escamosos, anucleadas y
transparentes, y forma irregular, que aparecerán en el frotis claramente distinguibles de las células
nucleadas del epitelio vaginal.
Estro. Al final del estro ocurre la ovulación. Suele durar unas 12 horas. Hay gran abundancia de
células anucleadas escamosas, que pueden aparecer formando masas blancas e irregulares. Proceden de la
descamación del epitelio superficial de la vagina. La fase ovulatoria y la conducta sexual de la rata tienden
a estar sincronizadas por ritmos biológicos circadianos de manera que estos eventos ocurren en
determinadas horas (medianoche y primeras horas de la mañana, respectivamente).
Diestro. Los leucocitos invaden el epitelio vaginal y son las células predominantes en los frotis
vaginales. Es la fase más larga y variable del ciclo (2-3 días). Empiezan a aparecer células nucleadas
epiteliales, tanto más abundantes cuanto más avanzado sea el diestro. Al final del diestro los folículos
ováricos empiezan a crecer bajo la influencia de pequeñas cantidades de FSH y LH en preparación para el
próximo ciclo.
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Conclusiones.
La rata se encontraba en el estro del ciclo estral esto se determinó de una forma
clara por medio de la observación de la muestra del frotis vaginal al microscopio
óptico, la tinción aniónica es una buena forma para observar este tipo de células ya
que tiñen solo su entorno.
Las fases del ciclo estral pueden identificarse a través de las células descamadas
obtenidas de la vagina.
Debido a la cantidad de hormonas que son generadas por el periodo “estro”, es
afectado el comportamiento de la rata, la observación de los signos clínicos
conductuales y cambios en la imagen citológica vaginal, fueron de suma
importancia para la práctica.
La comprensión de la fisiología reproductiva de la rata así como la función de las
hormonas que participan en el ciclo reproductivo, fueron necesarias para
determinar el periodo del ciclo en el que se encontraba el animal.
Bibliografía.