DETERMINACION DE ANTOCIANINAS

MATERIALES

 Metanol grado HPLC

 Acetonitrilo grado HPLC
 Agua Ultrapura
 Ácido trifluoroacetico grado HPLC
 Ácido formico (> 99%)
 Ácido cítrico
 Cloruro de potasio
 Acetato de sodio

ESTANDARES

 cyandin-3-O-glucoside chloride (kuromanin chloride),

 cyandin3-O-rutinoside chloride (keracyanin chloride),
 pelargonidin-3-O-glucoside,
 cyanidin chloride,
 delphinidin chloride,
 malvidin chloride,
 malvidin-3-O-galactoside chloride,
 malvidin-3-O-glucoside chloride

EQUIPOS

 Licuadora
 Centrifugas
 Ependorf
 Tubos de 50 Ml.

METODO DE EXTRACCION

 Colocar 25 g de muestra (fruto) en 100 mL de solvente (metanol acidificado). Las muestras

son homogenizadas en una licuadora por 30 s.
 Trasladar la muestra homogenizada en tubos de centrifugación de 50 mL, para ser
centrifugados por 5 minutos a 7197 RCF para remover la materia particulado.
 Sonicar por 60 minutos A 25℃, 59 kHz
 Transferir 1 mL del sobrenadante de la muestra a un tubo de centrifugación de 1.5 mL
(Eppendorf) y centrifugar nuevamente a 20817 RCF para continuar eliminando las
partículas.
 El sobrenadante fue pipeteado en viales de HPLC para su análisis, las muestras deben ser
almacenadas a -20℃.

MEDICION EN HPLC
  Centrifugar el extracto de la muestra a 6000 rpm por 20 minutos,
 Diluir la muestra a razón de 1:5 (v/v) en ácido trifluoroacetico (TFA)al 0.5%

Condiciones cromatográficas

Velocidad de flujo : 1.5 mL/min.

Volumen de inyección : 5 µL

Temperatura de la columna : 35 ± 5℃

Detector : 520 nm DAD.

Gradiente : Solvente A: solución acuosa de metanol al 20% conteniendo 0.5%
de TFA. Solvente B: metanol. Las condiciones isocráticas durante 30
minutos con 100% de disolvente A, condiciones de gradiente lineal
de 100% A a 90% A en los siguientes 30 minutos y luego condiciones
isocráticas con 90% de A y 10% de B hasta el final del análisis.
Columna : C - 18 (250 x 4.6mm, 5µm).