TINCIÓN VERDE DE MALAQUITA

FUNDAMENTO

La formación de endosporas es una estrategia de

supervivencia de ciertas bacterias. Las endosporas
son formas de resistencia que se generan ante
condiciones ambientales desfavorables (temperaturas
extremas, falta de nutrientes, compuestos tóxicos,
etc.). La espora puede perdurar durante años hasta que
el ambiente es favorable, germinando y generando una nueva forma vegetativa.

La tinción mediante Verde de Malaquita permite detectar la presencia de microorganismos

con esporas. La localización de las esporas, así como la proporción entre esporas y células
vegetativas proporciona información acerca del microorganismo en estudio.

La gruesa pared externa de queratina de la espora es resistente al calor y a la tinción con

diversos colorantes. Para forzar la tinción con el Verde de Malaquita se utiliza calor. Una vez
el colorante ha penetrado en el interior de la espora, se retira la preparación de la fuente de
calor y se elimina el colorante de las células vegetativas por un simple lavado con agua. La
espora retiene el colorante y queda teñida de color verde. Como colorante de contraste, para
la tinción de las células vegetativas, se utiliza Safranina.

UTILIDAD

El verde de malaquita se utiliza como tinción de

esporas bacterianas. Es activo frente a una gran
variedad de parásitos externos y agentes
patógenos como hongos, bacterias, etc. Su
principal aplicación es para el tratamiento contra
parásitos protozoos de agua dulce.
El colorante Verde de Malaquita se usa especialmente para la tinción de endosporas en
microorganismos, entre las que destacan Clostridium y Bacillus, son patógenas para el
hombre, por lo que su estudio y observación son de gran interés. La posición y la morfología
de la endospora en el interior de la bacteria constituyen un carácter taxonómico útil para
diferenciar especies dentro de un mismo género.

MUESTRA

Extensiones procedentes de cultivos bacterianos,

preferentemente de 18-24 horas. Muestras procedentes
de diversos fluidos corporales: exudados, fluidos
pulmonares, sedimentos de orina etc.

Extender la muestra con un asa en un portaobjetos

directamente o mezclando con solución salina para
conseguir un frotis uniforme y delgado. Secar al aire y
fijar con calor pasando el portaobjetos por una pequeña
llama entre 2 y 3 veces. Dejar enfriar el portaobjeto antes de realizar la tinción. Manipular
las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infecciosa.

PROCEDIMIENTO

1. Cubrir la extensión con el Reactivo A, Verde de Malaquita. Con unas pinzas de madera
colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma que el colorante humee durante
5-7 minutos. Evitar que la muestra hierva. Añadir más colorante si éste se evapora. Es
importante que la muestra no se seque.

2. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.

3. Teñir la extensión con el Reactivo B, Safranina, que es el colorante de contraste, durante

1 minuto.
4. Lavar con agua corriente y secar al aire.

5. Examinar al microscopio con objetivo de inmersión.

RESULTADOS

Endosporas: Verde

Células vegetativas: rosa-rojo

 TINCIÓN DE MAY-GRÜNWALD-GIEMSA

FUNDAMENTO

Las tinciones hematológicas constituyen una serie

de métodos utilizados para la coloración de las
estructuras que componen las células de la sangre
y la médula ósea. Tienen por objetivo aumentar el
contraste entre las estructuras celulares y el medio
que las rodea, y permiten que las distintas células
sean identificadas al microscopio con mayor
facilidad. Es una técnica de tinción que se utiliza principalmente para el coloreo de muestras
de frotis sanguíneos o extendidos de médula ósea. La técnica MGG permite diferenciar
cualitativa y cuantitativamente los principales elementos formes de la sangre.

UTILIDAD

En los laboratorios clínicos de hematología resulta especialmente útil para la demostración

de alteraciones en el número, proporción y morfología de las células sanguíneas. También
puede ser adaptada para su utilización como una técnica de tinción clásica para cortes
histológicos.

Como su nombre lo indica, la técnica combina las técnicas de coloración desarrolladas por
May-Grünwald y Giemsa. Estas técnicas a su vez se basan en el empleo de dos soluciones
colorantes:

 La solución de May-Grünwald, que contiene el colorante ániónico eosina y el

colorante catiónico azul de metileno ambos disueltos en metanol
 La solución de Giemsa, que contiene eosina, azul de metileno y una serie de productos
de la oxidación de este último tales como el azur A, el azur B, el violeta de metilo y
el azul de metilo.
Todos estos colorantes se encuentran en estado no ionizado mientras se mantienen en
solución de alcohol metílico, pero al añadir agua se ionizan y se unen selectivamente a los
constituyentes celulares precipitando como sales insolubles.

MUESTRA

Sangre capilar por punción de un dedo, o venosa procedente de punción venosa y anti
coagulada.

PROCEDIMINETO

1. Comprobar que el extendido se encuentre seco.

2. Colocar varias gotas de la solución de May Grünwald cubriendo todo el preparado y dejar
actuar durante 2 ó 3 minutos. Si se te ha terminado la solución de May Grünwald la puedes
reemplazar por alcohol medicinal obteniendo un resultado similar.

3. Lavar con abundante agua estabilizada (agua destilada con pH de 7) eliminando toda la
solución anterior, y dejar el preparado bien cubierto de agua durante 1 minuto.

4. Colocar aproximadamente 12 gotas de Giemsa sobre el extendido cubierto de agua se

puede soplar sobre el extendido para homogeneizar. Dejar actuar la solución durante 10 ó 15
minutos.

5. Lavar con abundante agua removiendo el colorante remanente y luego dejar secar.

6. Si se observan muchas sales precipitadas en el preparado, se puede realizar un lavado

rápido con alcohol (con el preparado en posición casi vertical, dejar caer alcohol sobre el
mismo y luego inmediatamente lavar bien con agua)

RESULTADO