1.

- ¿Cuáles son las 2 características más importantes para reconocer una

célula madre? Explíquelas.

Las células madre poseen características únicas:

Las células madres son células que no se han diferenciado ni especializado, se pueden convertir
en células susceptibles de desarrollar en cualquier tipo de tejido.
Las células madre tienen dos características importantes que las distinguen de otros tipos de
células.
La primera de ellas, es que estas células no especializadas, se renuevan ilimitadamente incluso
después de su extracción.
La segunda es bajo ciertas condiciones fisiológicas o experimentales, se las puede inducir a que
se conviertan en células con funciones especiales tales como células musculares cardíacas o
células de páncreas que produzcan insulina. Especialmente novedoso es la utilización de esta
célula para el tratamiento de lesiones óseas.
También son capaces de dividirse y de renovarse por períodos largos y pueden dar lugar a tipos
especializados de célula. Existen cuatro tipos de Células Madres: la totipotente que puede crecer
y formar un organismo completo, tanto los componentes embrionarios, como los
extraembrionarios, la pluripotente no puede formar un organismo completo, pero puede se
transforma en cualquier otro tipo de célula proveniente de los tres linajes embrionarios, así como
el germinal y el saco vitelino, por último las multipotentes que son aquellas que solamente pueden
generar células de su propia capa o linaje embrionario de origen.
Las células madres unipotentes pueden formar únicamente un tipo de célula particular.
En un individuo adulto se conocen hasta ahora alrededor de 20 tipos distintos de células madre,
que son las encargadas de regenerar tejidos en continuo desgaste (como la piel o la sangre) o
dañados (como el hígado). Su capacidad es más limitada para generar células especializadas.

2. ¿Cuáles son los tipos de células madre que existen (según clasificación:
totipotentes, pluripotentes, multipotentes, unipotentes)?.

Totipotentes : Pueden dar origen a todo tipo de células , e incluso a un embrión completo ( cigoto
, embrión en las primeras divisiones ) , cuentan con el potencial de convertirse en cualquier célula
del organismo también son capaces de replicarse sin limitaciones sin perder su potencial
Pluripotentes : Se puede diferenciar en cualquier tipo de células pero no en un embrión completo
( blastocito ) , son células adultas genéticamente reprogramas para que adquieran un estado similar
al de las células madre fetales ya que las obliga a expresar los genes o factores o factores
importantes para poder mantener las propiedades definitorias de las células madre embrionarias
.
Multipotentes : Dan origen a una limitada variedad de células típicas de un tejido especifico
como las hematopieticas , globulos rojos etc , comparten todas las características básicas del resto
de las células madre , son células no especializadas que cuentan con la capacidad de auto-
renovacion durante largos periodos de tiempo .
Unipotente : Generan un solo tipo de células diferenciadas , surgen a partir de las células
pluripotentes y son las que cuentan con el potencial de diferenciación mas bajo , también cuentan
con la capacidad para proliferar .

3. ¿Cuáles son los tipos de células madre que existen (según clasificación
por etapa del desarrollo: embrionaria y adulta)?.
Las células madre son la base de todos los órganos y tejidos en nuestro cuerpo. Hay muchos tipos
diferentes de células madre que provienen de diferentes partes del cuerpo o se forman en
diferentes momentos de nuestra vida. Estas incluyen las células madre embrionarias que existen
sólo en las primeras etapas de desarrollo y varios tipos de células madre específicas de tejido (o
células madre adultas) que aparecen durante el desarrollo fetal y permanecen en nuestros cuerpos
a lo largo de toda la vida.
Células madre embrionarias
Las células madre embrionarias se obtienen a partir del macizo celular interno del blastocito, una
bola hueca formada principalmente por células que, en el ser humano, se forman entre el tercer y
quinto día después de que el óvulo es fecundado por un espermatozoide. Las células madre
embrionarias son pluripotentes, lo que significa que pueden dar lugar a cada tipo de célula del
cuerpo completamente formado, pero no a la placenta y al cordón umbilical. Estas células son
increíblemente valiosas porque proporcionan un recurso renovable para el estudio del desarrollo
normal y la enfermedad, y para realizar testar fármacos y otras terapias.
Células madre específicas de tejido
Las células madre específicas de tejido son más especializados que las células madre
embrionarias. Normalmente, estas células madre pueden generar diferentes tipos de células
específicas para el tejido o el órgano en el que se encuentran. Por ejemplo, las células madre de
la médula ósea (o hematopoyéticas) que forman la sangre pueden dar lugar a los glóbulos rojos,
los glóbulos blancos y plaquetas.
Algunos tejidos y órganos dentro de nuestro cuerpo contienen pequeños depósitos de células
madre específicas de tejido cuyo trabajo es reemplazar las células de ese tejido que se pierden en
el transcurso normal de la vida o en las lesiones, como las de la piel, la sangre y el revestimiento
del intestino. Las células madre específicas de tejido pueden ser difíciles de encontrar en el cuerpo
humano, y aparentemente no se auto-renuevan en cultivo tan fácilmente como lo hacen las células
madre embrionarias.
Células madre mesenquimales
Son células aisladas de estroma (el tejido conectivo que rodea otros tejidos y órganos). Las células
de este nombre son denominadas con más exactitud “células estromales”. Las primeras MSCs
fueron descubiertas en la médula ósea y se demostró que eran capaces de generar hueso, cartílago
y células adiposas. Desde entonces, han sido cultivadas a partir de otros tejidos, tales como grasa
y sangre del cordón umbilical. Se cree que varias MSC poseen propiedades inmuno-modulatorias
e incluso se está experimentando con ellas en tratamientos para una gran cantidad de trastornos,
pero hay poca evidencia de sus beneficios hasta la fecha. Los científicos no saben cabalmente si
estas células son en realidad células madre o qué tipos de células son capaces de generar. Ellos
están de acuerdo en que no todas las MSCs son iguales, y que sus características dependen del
lugar del cuerpo del que provienen y cómo han sido aisladas y cultivadas.
Células madre pluripotentes inducidas
Son células que han sido diseñadas en el laboratorio a partir de la conversión de células específicas
de tejido, tales como células epiteliales, en células que se comportan como células madre
embrionarias. Las células IPS son herramientas fundamentales para ayudar a los científicos a
aprender más acerca del desarrollo normal, y el inicio y progreso de las enfermedades. También
son útiles para desarrollar y probar nuevos medicamentos y terapias.
Si bien las células iPS comparten mucha características de las células madre embrionarias,
incluyendo la capacidad de dar lugar a todos los tipos de células del cuerpo, no son exactamente
lo mismo. Los científicos están explorando la naturaleza y el significado de estas diferencias. En
principio, las primeras células iPS fueron producidas utilizando virus para insertar copias
adicionales de genes en células específicas de tejido. Los investigadores están experimentando
con muchas formas alternativas de crear células iPS para que en última instancia, se puedan
utilizar como fuente de obtención de células o tejidos para tratamientos médicos.

4. En la médula ósea existen una gran variedad de células madre.

Describa las Hematopoyéticas, Mesenquimales y VSEL.

célula madre hematopoyética

Célula inmadura que se puede transformar en todos los tipos de células sanguíneas, como glóbulos
blancos, glóbulos rojos y plaquetas. Las células madre hematopoyéticas se encuentran en la sangre
periférica y en la médula ósea. También se llama célula madre sanguínea.

Las células madre hematopoyéticas (HSC) se encuentran en la médula ósea, la sangre periférica
y la sangre del cordón umbilical, y son importantes en los estudios de trastornos de la sangre y
enfermedades malignas relacionadas con la sangre. Ofrecemos un completo conjunto de
herramientas para el aislamiento, la expansión, la diferenciación y la caracterización de las HSC
y sus derivados.

Celulas mesenquimales
Las células madre mesenquimales actúan en la regeneración o reparación de los tejidos dañados
y sustituyen las células que mueren de forma rutinaria.
Así, cuando un individuo se ha desarrollado, una pequeña parte de células madre queda residiendo
en la mayoría de los distintos tejidos, para activarse cuando sea necesario reparándolos o
regenerándolos, manteniendo de ésta manera el organismo sano.
Sus características les confieren un gran potencial para la aplicación en medicina regenerativa:
Gran capacidad de expansión y diferenciación: se renuevan con facilidad y pueden dar lugar a
diversos tipos celulares, como células óseas, adiposas y cartilaginosas.
Gran capacidad para la regeneración de tejidos: ayudan a la cicatrización, evitan la muerte celular
y facilitan la formación de nuevos vasos sanguíneos.
Además se ha observado, que modulan reacciones adversas en distintas enfermedades, sobre todo
en las degenerativas y autoinmunes.

VSEL la tecnología que utiliza muy pequeño similares a las embrionarias células madre aisladas
de sangre periférica y ofrece la promesa de lograr los beneficios positivos asociados con las
células madre embrionarias sin los problemas éticos o morales o de algunos de los posibles efectos
negativos asociados con las células madre embrionarias. Se prevé que estos estudios seminales
de los mecanismos fundamentales por los que estas células madre juegan su papel fundamental
en la regeneración de tejidos contribuirá significativamente a la eficiencia y eficacia de las futuras
aplicaciones clínicas de las células madre muy pequeñas similares a las embrionarias.

5. ¿Qué es un marcador celular? Explicar brevemente la Proteína verde

fluorescente (GFP).
Los marcadores celulares son antígenos de superficie de todas las células por ejemplo la CD16 y
sirven para hacer un seguimiento a este tipo de células .
Proteína Verde Fluorescente
La proteína verde fluorescente ha existido durante más de 160 millones de años en los fotoórganos
de una especie de medusa, Aequorea victoria, y es en parte responsable de su bioluminiscencia.
Los organismos bioluminiscentes son capaces de emitir luz transformando energía química en
lumínica, como las luciérnagas, o bien mediante fluorescencia, absorbiendo luz de un determinado
color (longitud de onda) y liberando la energía absorbida en forma de luz de una longitud de onda
mayor. La primera descripción de un organismo bioluminiscente data de muy antiguo y se debe
a Cayo Plinio Segundo el Viejo (23-79 DC), quien describió en su Historia Natural la existencia
de unas medusas en la bahía de Nápoles que resplandecían con una tonalidad verdosa al ser
expuestas a la luz solar. Plinio desarrolló una técnica para decorar cerámica empleando triturados
de estos animales.
Shimomura caracterizó posteriormente la porción de la proteína (fluoróforo) que le confiere la
capacidad de absorber y emitir luz y demostró que, a diferencia de otras proteínas
bioluminiscentes, la GFP no requiere ningún aditivo para fluorescer. Esta singular propiedad es
uno de los factores que ha hecho que la GFP pasara de ser una curiosidad científica a convertirse
en una poderosa herramienta extensamente utilizada en Biología.
Martin Chalfie (EE UU), el segundo galardonado con el Nobel, demostró que el gen de la GFP,
el fragmento de ADN del genoma de la medusa que contiene el código para su biosíntesis, podía
ser introducido en otros organismos vivos, unicelulares como la bacteria intestinal Escherichia
coli o multicelulares como el gusano Caenorhabditis elegans, conduciendo a la expresión de una
proteína que conservaba la fluorescencia. Este descubrimiento abrió las puertas a la utilización de
la GFP como marcador tanto de células individuales como de organismos enteros.

6. Describa brevemente la técnica de FISH.

FISH o Hibridación in situ Fluorescente es una técnica que detecta secuencias de ácidos nucleicos
en células o tejidos preservados mediante el empleo de una sonda marcada con un fluorocromo,
la cual va dirigida hacia un lugar específico del cromosoma y que emite fluorescencia que puede
ser observada por medio de un microscopio. La técnica de hibridación in situ se fundamenta en
la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridarse entre sí, es decir, la existencia de
determinada secuencia de ADN o ARN, que resulta complementaria con otra secuencia a través
de puentes de hidrógeno formados entre las bases adenina- timina (DNA) o uracilo (RNA) y
citosinaguanina (DNA y RNA).
Un protocolo de la técnica de FISH incluye 4 pasos: fijación y permeabilización de la muestra,
hibridación, lavado y la detección de las células marcadas a través del microscopio de
epifluorescencia o confocal. Antes de la hibridación, el cultivo, la muestra o tejido que contiene
microorganismos deben ser fijados y permeabilizados para facilitar la penetración de la sonda
fluorescente dentro de la célula y para proteger al ARN de la degradación por ribonucleasas
endógenas. La hibridación es el proceso en el que a la muestra desnaturalizada se le añade la
sonda de interés que se unirá a la secuencia escogida del ARNr. Pasado el tiempo de hibridación,
las láminas son lavadas con agua destilada para remover la sonda que no se unió. Finalmente, se
realiza la visualización de la muestra, la cual requiere de un microscopio de epifluorescencia
equipado con diversos filtros para los diversos espectros de color.

7. Describa y grafique brevemente el estudio: “Cell differentiation:

Hepatocytes from non-hepatic adult stem cells” Malcolm R. Alison,
Richard Poulsom, Rosemary Jeffery, Amar P. Dhillon, Alberto Quaglia,
Joe Jacob, Marco Novelli, Grant Prentice, Jill Williamson and Nicholas
A. Wright Nature 406, 257 (20 July 2000) doi:10.1038/35018642.

Las células madre son células indiferenciadas de larga vida que son capaces de
muchas rondas de división. Aquí mostramos que las células de hígado humano
adulto se pueden derivar de células madre de origen en la médula ósea o de
circulación fuera del hígado, aumentando la posibilidad de que las células madre-
sistema de la sangre podrían ser utilizadas clínicamente para generar hepatocitos
para la sustitución de tejido dañado.
8. Describa y grafique brevemente el estudio “Chimerism of the
transplanted heart”. De Quaini F, Urbanek K, Beltrami AP, Finato N,
Beltrami CA, Nadal-Ginard B, Kajstura J, Leri A, Anversa P. N Engl J
Med 2002 Jan 3;346(1):5-15.

ANTECEDENTES
Los casos en los que un paciente masculino recibe un corazón de un donante femenino brindan
una oportunidad inusual para probar si las células primitivas se trasladan del receptor al injerto y
si las células con las características fenotípicas de las del receptor residen finalmente en el corazón
del donante. El cromosoma Y se puede usar para detectar células no diferenciadas migradas que
expresan antígenos de células madre y para discriminar entre células primitivas derivadas del
receptor y aquellas derivadas del donante.
METODOS
Examinamos muestras de las aurículas del receptor y las aurículas y ventrículos del injerto
mediante hibridación de fluorescencia in situ para determinar si los cromosomas Y estaban
presentes en ocho corazones de donantes femeninos implantados en pacientes masculinos.
También se investigaron células primitivas con cromosomas Y que expresaban c-kit, MDR1 y
Sca-1.
RESULTADOS
Los miocitos, las arteriolas coronarias y los capilares que tenían un cromosoma Y constituían
entre el 7 y el 10 por ciento de los de los corazones donantes y eran altamente proliferativos. En
comparación con los ventrículos de los corazones de control, los ventrículos de los corazones
trasplantados tuvieron un número notablemente mayor de células que dieron positivo para c-kit,
MDR1 o Sca-1. El número de células primitivas fue mayor en las aurículas de los hospedadores
y en las aurículas de los corazones donantes que en los ventrículos de los corazones donantes, y
del 12 al 16 por ciento de estas células contenían un cromosoma Y. Las células no diferenciadas
fueron negativas para los marcadores de origen de la médula ósea. Se identificaron células
progenitoras que expresan MEF2, GATA-4 y nestina (que identifican a las células como miocitos)
y Flk1 (que identifica a las células como células endoteliales).

9. Describa y grafique brevemente el estudio: “Allogeneic mesenchymal

stem cells restore cardiac function in chronic ischemic cardiomyopathy
via trilineage differentiating capacity” PNAS 2009 106 (33) 14022-
14027; doi:10.1073/pnas.0903201106, vol. 106 no. 33, p. 14022–27.
El mecanismo o mecanismos subyacentes a los efectos reparadores cardíacos de las células madre
mesenquimales (CMM) derivadas de la médula ósea siguen siendo muy controvertidos. Aquí
probamos la hipótesis de que las CMM regeneran el miocardio infartado crónicamente a través
de mecanismos que comprenden el injerto a largo plazo y la diferenciación del trilineaje. Doce
semanas después del infarto de miocardio, las cerdas recibieron inyecciones transendocárdicas
basadas en catéteres, ya sea de placebo (n = 4) o de CMM alogénicas masculinas (200 millones;
n = 6). Los animales se sometieron a resonancia magnética cardiaca en serie, y el destino celular
in vivo se determinó mediante la co-localización de células del cromosoma Y (Ypos) con
marcadores de linaje cardiaco, músculo vascular y endotelial. Las CMM se implantaron en zonas
infartadas y fronterizas y se diferenciaron en cardiomiocitos, según se determinó mediante la co-
localización con GATA-4, Nkx2.5, y α-sarcomeric actin.
Además, los Ypos MSC exhibieron diferenciación del músculo liso vascular y de las células
endoteliales, lo que contribuyó a la formación de vasos grandes y pequeños. El tamaño del infarto
se redujo de 19,3 ± 1,7% a 13,9 ± 2,0% (P < 0,001), y la fracción de eyección (FE) aumentó de
35,0 ± 1,7% a 41,3 ± 2,7% (P < 0,05) en las CMM, pero no en los cerdos placebo durante 12
semanas. Esto se acompañó de un aumento de la contractilidad regional y del flujo sanguíneo
miocárdico (CSM), en particular en la zona fronteriza del infarto. Es importante destacar que el
injerto de MSC se correlacionó con la recuperación funcional en contractilidad (R = 0,85; P <
0,05) y CSM (R = 0,76; P < 0,01). Juntos, estos hallazgos demuestran la supervivencia a largo
plazo de la CMM, el injerto y la diferenciación del trilineo después del trasplante al miocardio
con cicatrices crónicas. Las CMM son células madre adultas con capacidad de cardiomiogénesis
y vasculogénesis que contribuyen, al menos en parte, a su capacidad de reparar el miocardio con
cicatrices crónicas.

10. ¿Cuáles son las diferencias entre:

a. Terapia Regenerativa: Regeneración órganos y tejidos
b. Ingeniería de Tejidos: Reemplazo de órganos y tejidos sólidos
c. Terapia Génica: Implante células manipuladas genéticamente?
Explique brevemente cada una.
CONCLUSIONES