Staphylococcus aureus manipula la inmunidad innata a través de proteasas propias y expresadas

por el huésped

 Unidad de Bioquímica, Departamento de Medicina Molecular, Universidad de Pavía, Pavía,

Italia

Los neutrófilos, el sistema del complemento y la piel en conjunto representan los principales
elementos del sistema inmune innato, la primera línea de defensa del huésped contra muchos
microorganismos comunes. Los patógenos bacterianos han desarrollado estrategias para
contrarrestar todas estas actividades de defensa. Específicamente, Staphylococcus aureus , un
importante patógeno humano, secreta una variedad de moléculas de evasión inmunitaria, incluidas
las proteasas, que segmentan componentes del sistema inmune innato o interrumpen la integridad
de la matriz extracelular y las conexiones intercelulares de los tejidos. Además, S. aureus secreta
proteínas que pueden activar zimógenos del huésped que, a su vez, se dirigen a componentes de
defensa específicos. Las proteínas secretadas también pueden inhibir la función antibacteriana de
los neutrófilos o las proteasas del sistema del complemento, potenciandoPosibilidades de
supervivencia de S. aureus . Aquí, revisamos la comprensión actual de estas proteasas y
moduladores de las proteasas del huésped en el funcionamiento de la inmunidad innata y
describimos la importancia de estos mecanismos en la patología de las enfermedades
estafilocócicas.

Introducción
Staphylococcus aureus es un patógeno humano conocido por su capacidad para causar
enfermedades tanto adquiridas en la comunidad como nosocomiales que van desde infecciones
leves de la piel, como impétigo hasta enfermedades graves, como endocarditis, neumonía, sepsis y
síndrome de shock tóxico ( David y Daum, 2010 ) El tratamiento de S. aureus infecciones con
antibióticos es a menudo ineficaz debido al desarrollo de cepas resistentes a antibióticos, tales
como m ethicillin- r esistant S . un ureus (MRSA). Por lo tanto, ahora se están explorando opciones
de tratamiento alternativas y vacunación ( Bagnoli et al., 2012 ; Pozzi et al., 2015 ). El éxito deS.
aureuscomo patógeno depende de la producción de varios factores de virulencia. S. aureus puede
expresar hasta 24 proteínas ancladas a la pared celular, que promueven la adhesión a matrices
extracelulares, la invasión de células no fagocíticas, la formación de biopelículas ( Foster et al.,
2014 ) y la interferencia con la neutralización del sistema inmune innato ( Sjodahl, 1977 , Cary et al.,
1999 ; Kang et al., 2013 ).
S. aureus también produce una amplia variedad de péptidos que inhiben los pasos específicos del
sistema inmune innato, que representa la primera línea de defensa del huésped ( Rooijakkers et al.,
2005a ; Itoh et al., 2010 ; Thammavongsa et al., 2015 ) (Para más detalles, ver más abajo).

La potenciación de la patogénesis de S. aureus está determinada por la secreción de proteasas que

segmentan componentes específicos del sistema inmune del huésped o interrumpen la integridad
de la matriz extracelular y las conexiones intercelulares, comprometiendo la estabilidad de los
tejidos del huésped y contribuyendo a la diseminación de la infección ( Koziel y Potempa, 2013 ). S.
aureustambién secreta proteínas que pueden unir y modular los precursores de la proteasa del
huésped que, a su vez, pueden dirigirse a componentes de defensa específicos, proporcionando a
la bacteria herramientas adicionales para establecer la colonización de los tejidos ( McAdow et al.,
2012 ). Por último, algunos S. aureuslas moléculas secretadas pueden unirse e inhibir las serina
proteasas de neutrófilos que son importantes para varias funciones, incluida la regulación de la
formación de trampa extracelular ( Hu, 2012 ; Kolaczkowska et al., 2015 ). En conjunto, estos
hallazgos resaltan la relevancia de estos compuestos como importantes agentes de virulencia
de las infecciones por S. aureus .

En esta revisión, nos centramos en los avances recientes en la caracterización de las proteasas de S.
aureus y los moduladores de las proteasas del huésped, y su capacidad para evitar la inmunidad
innata. También discutimos cómo la comprensión de los mecanismos de estos factores inmunes
evasivos puede tener un impacto en el desarrollo de terapias contra las enfermedades de S. aureus .

El sistema inmune innato

El sistema inmune innato es la colección de tejidos, células y moléculas que protegen al cuerpo de
una variedad de microbios y toxinas patógenas presentes en nuestro entorno. El sistema inmune
innato tiene numerosas funciones, que incluyen:

1. Acción como barrera anatómica para agentes infecciosos,

2. Activación de la cascada del complemento para identificar bacterias, activar células y promover
la eliminación de complejos de anticuerpos o células muertas,
3. Reclutamiento de células inmunitarias innatas que atacan células extrañas a sitios de infección
corporal, a través de la producción de factores químicos especializados o mediadores llamados
citocinas.
La superficie epitelial como la primera línea de defensa contra la infección por S. aureus
Las superficies epiteliales intactas forman barreras físicas entre los microbios en el entorno externo
y el tejido del huésped. Las principales interfaces entre el entorno y el huésped son la piel y las
superficies mucosas del tracto gastrointestinal y respiratorio. Las uniones estrechas entre las células
vecinas impiden la entrada fácil por patógenos potenciales, como S. aureus. Las superficies
epiteliales interiores también están cubiertas con una capa de moco que protege estas superficies
contra los daños microbianos, mecánicos y químicos. El recubrimiento de moco viscoso, compuesto
principalmente por secreción de mucina y otras glicoproteínas, ayuda físicamente a evitar que los
patógenos se adhieran al epitelio. Epithelia también produce péptidos que matan o inhiben el
crecimiento de patógenos. Los que son más abundantes incluyen péptidos antimicrobianos
llamados defensinas. Generalmente son cortos y cargados positivamente, y tienen dominios
hidrofóbicos o anfipáticos en su estructura plegada. Las defensinas también son el tipo de proteína
más abundante en neutrófilos, que las usan para matar patógenos fagocitados ( Zhao y Lu,
2014 ). Además de las defensinas, las catelicidinas representan otra familia de péptidos
antibacterianos en mamíferos (Boman, 2003 ; Brogden et al., 2003 ). La catelicidina humana hCAP-
18, expresada constitutivamente por los neutrófilos y el epitelio escamoso en respuesta al desafío
inflamatorio, es procesada por la proteinasa 3 para generar el péptido activo LL-37 ( Sørensen et al.,
1997 ) que posee una considerable actividad antiestafilocócica ( Tkalcevic et al. al., 2000 ; Travis et
al., 2000 ). S. aureususa varios mecanismos para contrarrestar las acciones de defensa del
epitelio. La adhesión al epitelio es un proceso multifactorial que involucra tanto al huésped como a
los factores bacterianos. Un factor clave es el ácido teicoico de la pared celular glycopolymer de S.
aureus, que interactúa directamente con la superficie del epitelio nasal a través de un receptor
eliminador tipo F llamado SREC-I ( Baur et al., 2014 ). Otro factor de superficie importante con un
papel en la colonización del epitelio nasal y posiblemente de la piel es el factor B de aglutinación de
proteínas ancladas a la pared celular, que se une al fibrinógeno, citoqueratina, el componente
dominante del interior de células escamosas y loricrina, la proteína más abundante del envoltura
cornificada de escamas ( Lacey et al., 2016 ). La proteína A determinante de superficie regulada por
hierro también promueve la adhesión de S. aureusa escamas que cooperan en la unión a células
envueltas de loricrina, involucrina y citoqueratina. Otras proteínas ancladas a la pared celular tales
como las proteínas repetidas del dipeptido de serina-aspartato SdrC, SdrD y SasG promueven la
adhesión a escamas, pero sus ligandos son desconocidos ( Foster et al., 2014 ; Figura 1 ).
FIGURA 1
Figura 1. Modelos de adherencia de S. aureus e invasión de células epiteliales. (A) La adherencia
de S. aureus a la superficie de las células epiteliales está mediada por el agrupamiento del factor B
(ClfB) a través de interacciones de alta afinidad con la citoqueratina 10 y la loricrina. La proteína
determinante de la superficie A (IsdA) regulada por ron contribuye a la adherencia epitelial
uniéndose a la proteína de envoltura celular cornificada loricrina, involucrina y citoqueratina 10.
También se ha propuesto que el glicopolímero de ácido de la pared ácido teicoico (WTA) promueva
la adhesión estafilocócica a un tipo epitelial Receptor scavenger F llamado SREC-I. (B) Las proteínas
A y B de unión a fibronectina se unen a la fibronectina de la matriz extracelular que interactúa con
la integrina α 5 β1 en la superficie de las células epiteliales, lo que desencadena la invasión de las
células. Recientemente, se ha sugerido que el factor de agregación A (ClfA) se une a la anexina A2
asociada a la superficie, y esta interacción podría mediar la internalización de S. aureus en las células
epiteliales mamarias.
Aunque S. aureus no se considera un patógeno intracelular, puede controlar su captación en células
no fagocíticas. La internalización bacteriana es promovida por las proteínas de unión a fibronectina
A y B. La unión de fibronectina a proteínas de unión a fibronectina y su reconocimiento posterior
por integrina a 5 b 1 conduce a la internalización de la bacteria en células epiteliales y endoteliales
( Foster et al., 2014 ) . Recientemente, se ha demostrado que el aglutinante factor A se une a
anexina A2, una proteína de unión a membrana regulada por calcio, y se ha propuesto que esta
interacción también podría mediar en la invasión de S. aureus en células epiteliales mamarias
bovinas ( Bonora et al., 2015 ; Figura 1) En células epiteliales de pulmón, la internalización de S.
aureus también implica la bomba de eflujo Tet38 a través de la interacción con CD36 ( Truong-
Bolduc et al., 2015 , 2017 ).

Para alterar la función de barrera defensiva del epitelio de la vía aérea, la α-hemolisina de S.
aureusinterrumpe la adhesión de la matriz celular activando la señalización de Fak con la
consiguiente aceleración del recambio de contacto focal ( Hermann et al., 2015 ). Además, el
tratamiento de las células epiteliales de las vías respiratorias con α-hemolisina recombinante da
como resultado la despolarización de la membrana plasmática y el aumento de la fosforilación de
paxillin y p38 MAP quinasa, un módulo de transducción de señales involucrado en acciones
defensivas del huésped ( Eiffler et al., 2016 ). Por último, la proteína EsxA estafilocócica interfiere
con las vías apoptóticas de las células epiteliales y, junto con EsxB, media la liberación de
estafilococos intracelulares de las células hospedadoras ( Truong-Bolduc et al., 2015 ).

Sistema de complemento y su impacto con los factores de virulencia de S. aureus

Durante la colonización y en la etapa de infección, S. aureus se enfrenta a la defensa inmune innata
del huésped, y una de las primeras barreras que encuentra es el sistema del complemento. Varias
moléculas efectoras del complemento pueden detectar y opsonizar las células de S. aureus y
promover su destrucción fagocítica por los neutrófilos en la sangre y los macrófagos en los tejidos. El
sistema del complemento es una cascada proteolítica de proteínas plasmáticas, que es crucial para
la defensa del huésped contra las bacterias invasoras (Figura 2). Complement fixation by bacteria
can occur through three activation routes, the classic pathway (CP), the lectin pathway (LP), and the
alternative pathway (AP). Activation of the CP starts after C1q molecules are deposited on the
bacterial surface via direct binding, immunoglobulin recruitment, or pentraxins bridging and
interacting with C1r and C1s proteases to form the C1 proteolytic complex. Through the LP pathway,
collectins, such as mannose-binding lectin (MLB), mannan-binding lectin or ficolin, bind to microbial
surface polysaccharides, resulting in activation of mannan-binding lectin-associated serine protease
(MASP). Both CP and LP proteolytic complexes can split surface-bound C4 into C4a plus C4b, and C2
into C2b plus C2a protease. C4b and C2a directly combine and form the C3 convertase C4bC2a,
which cleaves native C3 into C3b and C3a. C3b molecules effectively opsonize the bacterium and
facilitate activation of C3bBb convertase, the AP convertase that promotes transformation of new
C3 molecules into C3b and C3a, thus amplifying the number of C3b molecules that opsonize bacteria
and promote phagocytic killing. Surface-tethered C3b also plays a central role in the formation of
the two C5 convertases (C4bC2aC3b and C3bBbC3b), which cleave C5 into C5a and C5b. C5b initiates
the assembly of the membrane attack complex (MAC), a pore made up of components C5b, C6, C7,
C8, and multiple units of C9 and ultimately leading to cell lysis. Important host regulators controlling
complement homeostasis are C3b-cleaving factor I, factor H, a cofactor of factor I and a displacer of
Bb from the AP C3bBb convertase, and C4b-binding protein, which interferes with the assembly of
the CP/LP C4bC2a convertase.
FIGURA 2
Figura 2. Descripción esquemática del sistema de complemento. La cascada del complemento se
activa mediante el reconocimiento de anticuerpos unidos a microbios o azúcares bacterianos por el
complejo C1 (CP, vía clásica) o el complejo MBL y ficolin MASP-2 (LP, vía de lectina),
respectivamente. Tanto C1 como MASP-2 rompen C4 y C2 para generar un complejo C4b2a en la
superficie bacteriana. Este complejo es una convertasa C3 que escinde C3 en C3a y C3b, que se une
covalentemente a la superficie bacteriana. La C3 convertasa de la vía alternativa (AP) C3bBb se
genera después de unir el factor B al C3b unido a la superficie y la escisión posterior por el factor D.
Las moléculas C3b también generan C5 convertasas C4bC2aC3b y C3bBbC3b uniéndose a
convertasas C3. Las convertasas C5 escinden C5 en C5a soluble, que atrae a los neutrófilos al sitio
de la infección, y C5b que forma un complejo con las proteínas C6-9 para generar el complejo de
unión a la membrana.
La molécula central del complemento C3 pero no el factor B desempeña un papel central en la
respuesta inmune innata y la protección contra la infección estafilocócica. De hecho, los ratones con
deficiencia de C3 muestran susceptibilidad a la artritis séptica por S. aureus y presentan una
deficiencia del huésped, presumiblemente debido a a opsonización reducida y fagocitosis de
bacterias ( Na et al., 2016 ).
A su vez, S. aureus secreta varios péptidos que interfieren con la deposición del complemento en la
superficie bacteriana. De hecho, el S taphylococcal b inder de i mmunoglobulin Sbi ayuda a
proteger a S. aureus de la defensa inmune innata del huésped y este efecto se basa en la capacidad
de unirse a la región Fc de IgG y al factor C3 del complemento en el suero, promoviendo su consumo
fútil ( Zhang et al., 1999 ; Burman et al., 2008 ). Además, una proteína inhibidora de la quimiotaxis
secretada de S. aureus (CHIPS) bloquea la función de C5a y los receptores peptídicos formilados
necesarios para la quimiotaxis de neutrófilos ( de Haas et al., 2004).; Postma et al., 2004 ).

Las células de la inmunidad innata del huésped

Si los microorganismos cruzan una barrera epitelial y comienzan a replicarse en los tejidos del
huésped, son reconocidos rápidamente, ingeridos y asesinados por los fagocitos mononucleares o
macrófagos que residen en los tejidos. Otra importante familia de fagocitos, los neutrófilos, son las
células de vida corta que están abundantemente presentes en la sangre pero no en los tejidos. Tanto
los macrófagos como los neutrófilos desempeñan un papel clave en la inmunidad innata porque
pueden destruir eficazmente muchos patógenos sin la ayuda de la inmunidad adaptativa. En
particular, los neutrófilos son un actor central en la interacción entre el huésped y S.
aureus ( Newsom, 2008 ; Spaan et al., 2013).) Durante la infección, los neutrófilos abandonan la
sangre y migran al foco de la infección en un proceso de pasos múltiples mediado por interacciones
adhesivas que están reguladas por citoquinas y quimiocinas ( Spaan et al., 2013 ).

Las citocinas son pequeñas proteínas (~ 25 kDa) que se liberan por diversas células en el cuerpo, en
respuesta a un estímulo activador y que inducen respuestas a través de la unión a receptores
específicos. Pueden actuar de manera autocrina o paracrina. Las quimiocinas son una clase de
citocinas que tienen propiedades quimioatrayentes, induciendo a las células con los receptores
adecuados a migrar hacia la fuente de la quimioquina. Las quimiocinas principalmente reclutan
leucocitos, en particular monocitos y neutrófilos, y otras células efectoras de la sangre a los sitios
de infección. Todas las quimiocinas están relacionadas en la secuencia de aminoácidos y sus
receptores son proteínas integrales de membrana que contienen siete hélices que abarcan toda la
membrana ( Allen et al., 2007).) Los miembros de la familia de las quimioquinas incluyen el motivo
CXC, en el que dos restos de cisteína están separados por otro aminoácido. Las quimiocinas CXC se
unen a al menos siete receptores CXC diferentes (CXCR1-7) expresados en diferentes tipos de células
( Murdoch y Finn, 2000 ). El receptor de quimiocina CXC 2 (CXCR2), altamente expresado en
neutrófilos, reconoce las quimioquinas producidas en el sitio de la infección y desempeña un papel
importante en las defensas del huésped antimicrobiano, como la activación de neutrófilos y la
quimiotaxis ( Sekido et al., 1993 ; Chuntharapai et al. , 1994 , Eisele et al., 2011 ).

S. aureus expresa una variedad de proteasas que desempeñan un papel en la patogénesis

Staphylococcus aureus segrega varias proteasas, incluidas dos cisteína proteasas (staphopain A,
ScpA y staphopain B, SspB), una serina proteasa (V8 o SspA), proteínas de serina proteasas (Spls) y
una metaloproteinasa (aureolisina, Aur) . Los genes de proteasa están regulados positivamente
por agr (regulador genético accesorio) y regulados negativamente por sarA (regulador de los
accesorios estafilocócicos) ( Shaw et al., 2004).) y se organizan en cuatro operones distintos, que
codifican siete serina proteasas (SspA y SplA-F), dos cisteína proteasas (ScpA y SspB) y Aur. Las
proteasas Aur, V8, SspB y ScpA se producen como zimogen, mientras que las seis enzimas Spl están
activas tras la secreción. Los precursores Aur y ScpA se autoactivan fuera de la célula, y la activación
de SspA y SspB se basa en una cascada proteolítica en la que Aur procesa V8 ( Drapeau, 1978 ) y V8
escinde y activa SspB ( Massimi et al., 2002 ). Se pensó inicialmente que las proteasas de S.
aureus solo desempeñaban un papel en la adquisición de nutrientes, sin embargo, está surgiendo
evidencia de que están crucialmente implicadas en la evasión de la inmunidad del huésped
interactuando con los neutrófilos, Smagur et al. (2009) proteínas plasmáticas (Prokesová et al.,
1992 ) y péptidos antimicrobianos ( Sieprawska-Lupa et al., 2004 , Tabla 1 ).
TABLA 1

Tabla 1. Principales proteasas secretadas por S. aureus .

Staphopains A (ScpA) y B (SspB)
Staphopains, dos proteasas tipo papaína de S. aureus , son ambas proteínas de ~ 20 kDa que tienen
estructuras tridimensionales casi idénticas, a pesar de compartir una identidad de secuencia
primaria limitada. ScpA consta de dos dominios, arbitrados como dominio L y R. El dominio L se
construye a partir de la parte N-terminal de la secuencia y contiene la hélice del sitio activo que
porta una cisteína nucleofílica. El dominio R contribuye con la histidina catalítica y la asparagina y
está construido alrededor de un pseudobarrel antiparalelo de cadena de tamaño ( Filipek et al.,
2003 ).

Aunque hay datos limitados disponibles sobre el potencial de virulencia de

staphopains en modelos in vivo , los experimentos realizados in vitro han demostrado una amplia
actividad de estas enzimas, incluida la destrucción del tejido conectivo, la alteración de los sistemas
de coagulación y cinina y la interacción directa con las células inmunes del huésped ( Kantyka et al.
al., 2011 ).

Los neutrófilos tratados con ScpA no responden a la activación por las quimiocinas CXCR2 después
de la escisión específica del dominio N-terminal y este efecto puede ser neutralizado por inhibidores
de proteasa específicos. Además, ScpA inhibe la migración de neutrófilos hacia las quimiocinas
CXCR2 y el reclutamiento de tejidos ( Laarman et al., 2012 ; Figura 3 ). A pesar de la importancia de
estas observaciones, se debe tener en cuenta que, debido a la malla compleja y redundante de las
funciones de las citocinas, es difícil extrapolar estos hallazgos in vitro a la situación en los tejidos
infectados.
FIGURA 3

Figura 3. Proteasas de S. aureus y sus dianas enzimáticas en el huésped. (1) Staphopain A (ScpA)
escinde el dominio N-terminal del receptor CXC 2 (CXCR2) y deteriora la unión de las quimioquinas
CXC y la consecuente activación y quimiotaxis de neutrófilos, mientras que (2) Staphopain B (SspB)
escinde CD31, un miembro del superfamilia de inmunoglobulinas, y amortigua la funcionalidad de
los neutrófilos. (3) La escisión de las clases de inmunoglobulina por la proteasa V8 conduce a evitar
una respuesta inmunológica y desacopla la capacidad de los anticuerpos para unir el antígeno de
superficie celular a las células efectoras inmunes. (4a) La aureolisina (Aur) escinde e inactiva el
inhibidor de la proteasa α-1, dando como resultado la desregulación de la elastasa del huésped. Aur
también (4b) activa la protrombina a trombina e induce estafilocoagulación y (4c) neutraliza el
péptido antibacteriano LL-37. Por último, Aur (4d) puede dividir C3,Colonización por S. aureus del
tejido subepitelial. (6) Degradación por EpiP de colágenos, componentes esenciales del tejido
conectivo, y (7) disrupción por toxina exfoliativa A (ETA) y B (ETB) de desmoglein-1, una molécula
de adhesión desmosomal que media la adhesión intercelular en el estrato granuloso de la piel, lo
que también contribuye a la propagación de la infección por S. aureus en los tejidos del huésped.
La exposición de los fagocitos (neutrófilos y monocitos) a SspB deteriora sus funciones
antibacterianas mediante la represión de su actividad quimiotáctica y determina la eliminación
extensa de las células tratadas con SspB por los macrófagos. SspB también se escinde en la superficie
de los neutrófilos CD31, un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas involucrado en la vía
de señalización repulsiva que desalienta la actividad depredadora de los macrófagos. En
consecuencia, la actividad proteolítica de SspB amortigua la funcionalidad de neutrófilos y explica
la fagocitosis observada de neutrófilos tratados con SspB por macrófagos derivados de monocitos y
la consecuente colonización y diseminación estafilocócica ( Smagur et al., 2009 ; Figura 3 ).

V8 Protease
La proteasa V8 está relacionada con las serina proteasas pancreáticas ( Prasad et al., 2004 ). La
enzima escinde los enlaces peptídicos exclusivamente en el lado carboxilo de los residuos de
glutamato (y aspartato, en menor medida). A diferencia de las serina proteasas pancreáticas, la
proteasa V8 no posee ningún puente disulfuro. Esta es una gran diferencia evolutiva, ya que todas
las proteasas pancreáticas tienen al menos dos puentes disulfuro. La proteasa V8 muestra similitud
estructural con varias otras serina proteasas, específicamente las toxinas epidermolíticas A y B de S.
aureus y tripsina, en las que la conformación del sitio activo es casi idéntica ( Prasad et al., 2004).) La
proteasa V8 también es única porque el extremo N terminal con carga positiva participa en la
determinación de la especificidad del sustrato de la enzima. La proteasa V8 degrada todas las clases
de inmunoglobulinas humanas. La escisión de IgG con V8 está asociada con la pérdida parcial de
determinantes antigénicos y la alteración de la función efectora debido a la degradación de la región
Fc, sugiriendo que la proteasa V8 podría desacoplar la capacidad de los anticuerpos para unir
antígeno de superficie celular a células efectoras inmunes y puede proteger a las bacterias contra
los mecanismos de defensa del huésped ( Prokesová et al., 1992 Figura 3 ).

Aureolisina (Aur)
Aur es una metaloproteasa dependiente de zinc que pertenece a la familia de las termolisinas. La
estructura de Aur ha sido determinada, revelando una cadena polipeptídica de 301 aminoácidos
que se pliega en un dominio N-plisado β-plisado y un dominio C-terminal α-helicoidal, un pliegue
típico para la familia de metaloproteinasas termolisina ( Banbula et al. al., 1998 ).

In vitro , Aur ha demostrado que segmenta e inactiva el inhibidor de la proteasa α1, que es un
inhibidor de la proteasa endógeno esencial para controlar la serina proteasa elastasa de los
neutrófilos. La inactivación del inhibidor de α1-proteinasa da como resultado la desregulación de la
elastasa y, por lo tanto, puede ser importante en el consumo de algunas proteínas plasmáticas por
esta enzima durante la septicemia ( Potempa et al., 1986 ). En particular, Aur activa la protrombina
en el plasma humano e induce la estafilocoagulación lo que sugiere un posible papel de esta
proteasa en las infecciones sépticas ( Wegrzynowicz et al., 1980 ). Aur también puede afectar la
estimulación de los linfocitos T y B por activadores policlonales y exhibir actividad inhibitoria contra
la producción de inmunoglobulinas por linfocitos (Prokesová et al., 1991 ). Es importante destacar
que Aur contribuye a la evasión inmune estafilocócica mediante la escisión del péptido
antimicrobiano LL-37 ( Sieprawska-Lupa et al., 2004 ). Burlak et al. Han demostrado recientemente
que Aur y otras proteasas estafilocócicas se pueden expresar dentro de la vacuola fagocítica después
de la fagocitosis bacteriana por neutrófilos humanos ( Burlak et al., 2007 ). Este hallazgo, junto con
la información de que el mutante aurógeno isogénico parece matado más eficientemente por los
macrófagos tras la fagocitosis, indica que Aur puede proteger a los estafilococos dentro de los
fagocitos probablemente a través de la resistencia a la destrucción de péptidos antimicrobianos
( Kubica et al., 2008) La acción de Aur en el componente de complemento C3 también se ha
analizado en detalle, mostrando que Aur escinde C3 a C3b, y el C3b generado se degrada
rápidamente por la combinación del factor H y el factor I presente en el suero. Como resultado, las
bacterias están mal opsonizadas con C3b, y esto atenúa la fagocitosis y la muerte por neutrófilos
( Laarman et al., 2011 ). En conclusión, Aur parece facilitar no solo la activación de la proteasa V8
( Drapeau, 1978 ) sino también actuar en sinergia con los reguladores del sistema del complemento
( Laarman et al., 2011 ; Figura 3 ).

Proteínas similares a la serina proteasa (Spls)

Staphylococcus aureus Spls son miembros extracelulares de un grupo de 6 proteasas (SplA-SplF) de
función desconocida expresadas in vivo y codificadas en un operón en el genoma de S.
aureus . Hasta la fecha, SplA, SplB, SplC y SplD son las proteasas Spl mejor caracterizadas en
términos de propiedades bioquímicas y estructurales y muestran una homología estructural
significativa con la proteasa V8 y las toxinas epidermolíticas ( Popowicz et al., 2006 ; Dubin et al.,
2008). ; Stec-Niemczyk et al., 2009 ; Zdzalik et al, 2013.) A modo de ejemplo, SplA muestra un
pliegue similar a la quimotripsina y consta de dos dominios, cada uno de los cuales está formado
por seis cadenas β antiparalelas dobladas en un barril β. El sitio activo de la enzima se encuentra en
la interfaz de los dos barriles y consta de los residuos His, Asp y Ser conservados en todas las
proteasas de tipo quimotripsina enzimáticamente activas ( Stec-Niemczyk et al., 2009 ). Los spls
provocan respuestas de anticuerpos IgE en la mayoría de los pacientes
asmáticos. En portadores sanos de S aureus y no portadores, las células T de sangre periférica
elaboraron citoquinas TH2 después de la estimulación con Spls, como es típico para los
alergenos. Por lo tanto, los spls se pueden considerar como desencadenantes de alergenos
liberados por S. aureus que abren perspectivas para el diagnóstico y la terapia causal del asma
(Stentzel et al., 2016 ). Además, se requieren Spls para que S. aureus cause daño pulmonar
diseminado en un modelo de neumonía en conejos. En particular, SplA es capaz de escindir mucina
16, una proteína de superficie celular glucosilada de la línea celular de pulmón humano CalU-3, lo
que sugiere que la eliminación de esta proteína podría promover la invasión de S. aureus y la
propagación de los tejidos del huésped. Finalmente, el análisis de las proteínas secretadas y de
superficie expresadas por S. aureus USA 300 y las cepas mutantes slp revelaron muchas proteínas
bacterianas alteradas en abundancia, sugiriendo un papel de estas proteasas en la modulación de
la producción del factor de virulencia ( Paharik et al., 2016).) Queda por determinar si los Spls, con
su potencial proteolítico, tienen un impacto en las actividades de los mecanismos de defensa
inmunitaria del huésped (Figura 3 ).

EpiP
Se identificó y caracterizó un homólogo de una proteína de S. epidermidis anotada como una
proteasa serina de procesamiento de péptido líder de epidermina (EpiP) ( Geissler et al., 1996 ) en S.
aureus ( Kuhn et al., 2014 ). El S. aureus EpiP se libera en el medio extracelular y se expresa como
zimógeno que puede escindirse a través de un mecanismo intramolecular autocatalítico. La proteína
actúa como una serina proteasa y es capaz de escindir tanto el colágeno como la caseína ( Kuhn et
al., 2014 ; Figura 3 ). El gen epiP contiene un dominio peptidasa-S8 que está presente en las serina
proteasas tipo subtilisina y en el Streptococcus pyogeneshomólogo de la proteasa SpyCEP. Está bien
establecido que SpyCEP inactiva la IL-8 catalizando su escisión C-terminal ( Edwards et al.,
2005 ). Como consecuencia, SpyCEP dificulta el reclutamiento de neutrófilos en el sitio de la
infección y el aclaramiento bacteriano ( Zinkernagel et al., 2008 ). Dado el papel esencial de los
neutrófilos en la lucha contra la infección bacteriana ( Andrews y Sullivan, 2003 ; Döhrmann et al.,
2016 ), se puede suponer que EpiP podría mostrar una actividad patogénica similar a la de SpyCEP.

Toxinas Exfoliativas A (ETA) y B (ETB)

La piel es una barrera protectora crítica contra varios agentes externos, como bacterias, alérgenos,
radiación ultravioleta e insultos mecánicos. S. aureus posee herramientas bioquímicas para
penetrar y dañar la piel. Una rotura directa de la piel implica las toxinas exfoliativas estafilocócicas
secretadas A y B (ETA / ETB) que causan la formación de ampollas en el síndrome de la piel escaldada
estafilocócica (SSSS) y el impétigo ampolloso. ETA y ETB son serina proteasas con una estructura
general similar que incluye las posiciones de residuos clave dentro del sitio activo ( Vath et al.,
1999). ETA / ETB se escinde específicamente por mecanismos idénticos a la desmogleína 1, una
molécula de adhesión desmosomal que media la adhesión intercelular en el estrato granuloso de la
piel, sin afectar desmogleína 3 o E-cadherina (Amagai et al., 2000 , 2002 ; Figura 3 ). En SSSS, S.
aureus está presente en focos distantes, como la nariz, la faringe o la conjuntiva, y la toxina
producida por S. aureus puede diseminarse a través del torrente sanguíneo y causar exfoliación en
sitios remotos, mientras que en el impétigo bulloso, una forma localizada de SSSS , está presente
solo en las lesiones. Los extraterrestres comparten tanto el sitio de escisión en la desmogleína 1
como la similitud de secuencia de alto grado con la proteasa V8 ( Dubin, 2002 ). Por lo tanto, se ha
especulado que los ET y V8 podrían actuar juntos para interrumpir la desmogleína 1 y comprometer
la estabilidad y la función de barrera de la piel ( Katayama et al., 2013 ).

En una variante de la estrategia anterior, las células de S. aureus capturan las proteasas del huésped
activadas que escinden directamente los componentes esenciales de los mecanismos de defensa
del huésped. Por ejemplo, el factor A de agrupación de proteínas ancladas a la pared celular se une
al factor regulador I del complemento y aumenta la división del componente C3b inducido por factor
I ( Hair et al., 2008 ).

Del mismo modo, la proteína superficial SdrE mejora el reclutamiento del factor regulador del
complemento H (FH). La FH unida a SdrE retiene la actividad del cofactor para la escisión mediada
por factor I de C3b y esto da como resultado la disminución de los efectores del complemento y una
mayor protección contra la muerte de neutrófilos ( Sharp et al., 2012 ).

S. aureus expresa proteínas secretadas que modulan la actividad proteasa del huésped
Staphylococcus aureus está especializado en el manejo de proteínas del huésped que están
involucradas en el sistema del complemento, la cascada de coagulación y la cascada de fibrinólisis
( Chavakis et al., 2005 ; Imamura et al., 2005 ; Nizet, 2007 ). Las proteínas que desempeñan un papel
en estas vías circulan en fluidos biológicos o están en la matriz extracelular como zimógeno inactivo
que se puede activar tras la interacción con proteínas estafilocócicas segregadas
específicas. Alternativamente, S. aureus secreta inhibidores proteináceos específicos de las serina
proteasas del huésped que desempeñan un papel clave en la defensa inmune. En ambos casos, estas
proteínas afectan positivamente a la patogenicidad bacteriana in vivo ( Stapels et al., 2014 ;2 ).
TABLA 2

Tabla 2. Principales moduladores de S. aureus de las proteasas del huésped .

Activadores estafilocócicos de las proteasas del huésped

Coagulasa (Coa) y proteína de unión al factor von Willebrand (vWbp)

La coagulasa (Coa) es una proteína de S. aureus compuesta por el dominio D1D2 en la parte N-
terminal implicada en la unión de protrombina, un dominio de engarce y un dominio de repetición
compuesto por repeticiones en tándem de un segmento largo de 27 residuos en el C- parte terminal
que se une al fibrinógeno. La Coa promueve la coagulación sanguínea activando la protrombina
mediante la inserción del extremo Ile1-Val2N del dominio Coa D1D2 en el bolsillo Ile16 de la
protrombina, induciendo un sitio activo funcional en el zimógeno a través del cambio
conformacional ( Friedrich et al., 2003 ). El complejo Coa / protrombina reconoce específicamente
el fibrinógeno y lo convierte en fibrina ( Panizzi et al., 2006 ). Proteína de unión a factores de Von
Willebrand) (vWbp) es otro S. aureus secretadocoagulasa que, además de unirse al vWF, se asocia
con la protrombina para convertir el fibrinógeno en fibrina ( Friedrich et al., 2003 ; Bjerketorp et al.,
2004 ; Kroh et al., 2009 ). vWbp muestra homología de secuencia con el dominio Coa D1D2,
mientras que su región C-terminal carece del segmento enlazador y el dominio repetido de Coa, que
son reemplazados por vWF únicos y sitios de unión a fibrinógeno ( Bjerketorp et al., 2002 ; Cheng et
al., 2010) Cuando se suspenden en plasma humano o animal, los estafilococos pueden formar
grandes agregados. Para la aglutinación bacteriana se requieren Coa, vWbp y el factor A de
aglutinación bacteriana: Coa y vWbp activan la protrombina para escindir el fibrinógeno, mientras
que el Agrupamiento del factor A permite que los estafilococos se asocien para formar cables de
fibrina ( McAdow et al., 2011 ; Walker et al., 2013 ; 4 ). La formación de redes de fibrina protege a
la bacteria de la eliminación de neutrófilos y fagocitosis, y facilita la patogénesis de la infección letal
en sangre en ratones ( Walker et al., 2013 ).
FIGURA 4

Figura 4. Moduladores de S. aureus de las proteasas del huésped. (A) Activadores. (1) Coa y vWbp
activan la protrombina para romper el fibrinógeno, mientras que el factor de agrupamiento A
permite que los estafilococos se asocien para formar cables de fibrina. (2) La estafiloquinasa de
proteína de unión al plasminógeno (PLG) activa el zimógeno a la proteasa plasmina activa, que
puede degradar el complemento opsonina C3b y el dominio Fc de la inmunoglobulina. (3) la toxina
α se une al receptor ADAM10 para interrumpir las funciones de barrera fisiológica de los tejidos en
dicha piel. (B) Inhibidores. (1a) La proteína de adherencia extracelular ( Eap ) interrumpe la
formación de la proconvertasa CP / LP C3 (C4bC2) evitando que C4b se una a C2, inhibiendo la
formación y la deposición de C3b sobre la superficie de S. aureusCélulas. (1b) Eap inhibe
específicamente las serina proteasas de neutrófilos elastasa, proteinasa 3 y catepsina G,
bloqueando el procesamiento y la activación de los receptores celulares y las quimiocinas y la
escisión de factores de virulencia bacteriana. (2) La proteína 1 similar al superantígeno (SSL1) y 5
(SSL5) previenen la división de IL-8 inducida por la metaloproteasa de matriz (MMP), una
quimioquina producida por macrófagos y otros tipos celulares que induce la quimiotaxis de
neutrófilos e inhibe la remodelación de células extracelulares matriz y la consiguiente migración de
neutrófilos a través del colágeno. (3) C ollagen a dhesin (Cna) bloquea la asociación de C1q unido a
inmunoglobulina con el componente C1r del complemento e inhibe la formación de la vía clásica. (4)
El péptido secretado S tafilococal Complement I nhibitor (SCIN) estabiliza C3bBb convertasa de la
vía alternativa en una forma inactiva, la prevención de la producción de C3a, C3b, y C5a. (5)
El extracellular f ibrinogen b proteína ncontrar (EFB) induce un cambio conformacional en C3b de
una manera que afecta su interacción con factor de complemento B y la formación de la convertasa
C3 activa de la vía alternativa.
La activación de protrombina por coagulasas también induce la escisión directa del componente del
complemento C3, así como sus fragmentos de activación. Además, la trombina puede escindir C5
en C5a, que se produce independientemente de C3 y, por lo tanto, representa un puente de las tres
vías tradicionales de activación del complemento ( Rittirsch et al., 2008 ).

Staphylokinase (SAK)

La estafiloquinasa (SAK) es una proteína codificada por el bacteriófago de longitud 136 aa expresada
por cepas lisogénicas de S. aureus ( Peetermans et al., 2016 ). SAK está presente en el entorno del
cultivo celular y está asociado a la superficie celular de los estafilococos. La comprensión actual del
papel de SAK durante la infección bacteriana se basa en su interacción con las proteínas del
huésped. La unión de SAK a péptidos antibacterianos humanos α defensinas y LL-37 anula sus
propiedades bactericidas, lo que convierte a SAK en una herramienta útil para la resistencia
estafilocócica a la inmunidad innata del huésped ( Jin et al., 2004 ; Braff et al., 2007 ). La actividad
principal de SAK está relacionada con su capacidad para unir y convertir plasminógeno (PLG) en
plasmina activa, enzima proteolítica de amplio espectro (Bokarewa et al., 2006 ). A diferencia de los
activadores de PLG humanos directos, tales como el activador del plasminógeno tisular (t-PA)
( Lijnen y Collen, 1988 ) y la uroquinasa (RU) ( Vassalli y col., 1985 ; Blasi et al., 1986 ), SAK no tiene
ningún proteolítico actividad propia, pero actúa formando un complejo estequiométrico 1: 1 con
plasmina y cambiando su especificidad de sustrato para activar PLG ( Peetermans et al., 2016 ). La
activación de PLG por SAK se ve facilitada por la capacidad de los estafilococos para capturar PLG en
la superficie bacteriana a través de proteínas expresadas en superficie, tales como FnBPA y FnBPB
( Pietrocola et al., 2016).) Al activar PLG humano en plasmina en la superficie bacteriana, SAK crea
actividad de serina proteasa unida a bacteria que induce trombolisis fibrina específica en plasma
humano ( Collen y Lijnen, 2005 ) y conduce a la degradación de dos opsoninas principales,
inmunoglobulina G (IgG) humana y humano C3b ( Rooijakkers et al., 2005b , Figura 4 ). El hallazgo
de que la activación de PLG inducida por SAK previene la formación de biofilm de S. aureus y / o el
desprendimiento de la biopelícula existente mediante la escisión del componente principal de
biofilm fibrina sugiere fuertemente un papel crucial de esta proteína en el control de la formación
de biopelícula ( Kwiecinski et al., 2016) También se ha demostrado que la plasmina unida a
estafilococos escinde la metaloproteasa 1 pro-matriz de 55 kDa en la metaloproteasa 1 de matriz
activa madura de 42 kDa, una de las principales colagenasas intersticiales ( Santala et al., 1999 ). Este
efecto posiblemente proporciona una señal directa para la migración y activación de leucocitos.

Los hallazgos de que los aislados clínicos de origen mucoso y de la piel que expresan altos niveles
de SAK muestran una invasión más eficiente de los órganos internos que las cepas que expresan un
nivel bajo de SAK y el hallazgo de que en la sepsis animal las cepas silvestres muestran un aumento
de la carga bacteriana en comparación con Los mutantes isogénicos sak ( Bokarewa et al., 2006 )
respaldan la evidencia de que SAK es un importante factor de virulencia estafilocócica. Aunque SAK
está presente en la gran mayoría de las cepas de S. aureus que causan infecciones en humanos, la
frecuencia de expresión de estafilococos varía entre 4 y 100% en diferentes colecciones
de aislados de S. aureus ( Declerck et al., 1994 ; Jin et al., 2003) Además, un estudio sobre el curso
de la sepsis por estafilococos hemogénica inducida por la cepa productora de SAK no reveló
diferencias en la mortalidad o pérdida de peso en comparación con la cepa isogénica incapaz de
producir SAK ( Kwieciński et al., 2010 ). Estas observaciones hacen cuestionable el papel de SAK
como un factor de virulencia "crítico" en las enfermedades de S. aureus .

α-toxina

La exposición a la toxina α formadora de poros de S. aureus , también conocida como α-hemolisina,

puede causar muerte celular por necrosis, apoptosis o piroptosis, a través de la activación de
diferentes vías celulares ( Essmann et al., 2003 ; Craven et al. 2009 ). La α-toxina también se une al
receptor ADAM10 en células epiteliales alveolares. La unión de α-toxina a ADAM10 da como
resultado una regulación positiva de la actividad de la metaloproteasa ADAM10, con la consecuente
escisión de E-cadherina, una proteína que participa en interacciones intercelulares homotípicas en
uniones adherentes. La escisión se asocia con la alteración de la función de barrera epitelial,
aumento de la invasión estafilocócica y una lesión pulmonar aguda letal en ratones ( Inoshima et
al., 2011 ); ( Wilke y Bubeck Wardenburg, 2010; Figura 4 ). Estos estudios demuestran que la toxina
α rompe las barreras no solo al lisar las células, sino también por el mecanismo más sutil de activar
una proteasa del huésped.

Factores estafilocócicos que interfieren con las actividades de proteasa del huésped
Entre las funciones antibacterianas, los neutrófilos producen serina proteasas que incluyen
proteinasa 3, catepsina G y elastasa. Los neutrófilos también secretan metaloproteasas de matriz
que regulan la degradación de los componentes de la matriz extracelular ( Nagase et al., 2006 ) y la
renovación de sustratos no matriciales, incluidas citoquinas, quimiocinas, factores de crecimiento y
receptores ( Parks et al., 2004 ; Rodríguez et al. 2010 ). Además, es bien sabido que el sistema del
complemento es una cascada proteolítica en la que las serina proteasas se activan unas a otras a
través de una proteólisis limitada de una manera estrictamente ordenada. Por lo tanto, los
mecanismos bacterianos que interfieren con tales actividades de proteasa pueden ser
potencialmente importantes para salvaguardar la colonización eficiente del tejido del huésped.

Proteína de Adherencia Extracelular (Eap)

Staphylococcus aureus segrega una proteína multifuncional

llamado e xtracellular un dherence protein (EAP). La molécula de Eap madura es ~50-70 kDa y
comprende de cuatro a seis repeticiones en tándem del dominio de ~ 97 residuos unidas por una
región enlazadora corta de 9-12 residuos ( Jönsson et al., 1995 ; Geisbrecht et al., 2005 ). Eap
muestra una capacidad única para formar interacciones proteína-proteína con una serie de ligandos,
incluida una fosfatasa retenida en la superficie de las células bacterianas ( Flock y Flock, 2001 ),
moléculas de la matriz extracelular del huésped, como colágeno, fibronectina y laminina ( Bodén y
Flock , 1992 ; McGavin et al., 1993 ; Palma et al., 1999), y la adhesina de superficie proinflamatoria
de mamíferos ICAM-1 ( Chavakis et al., 2002 ). En particular, Eap interrumpe la formación de la
proconvertasa CP / LP C3 (C4bC2) al evitar que C2 se una a C4b (Figura 4 ). Por lo tanto, Eap inhibe
la deposición de C3b en la superficie de células de S. aureus y disminuye significativamente el grado
de opsonofagocitosis de S. aureus y la muerte por neutrófilos ( Woehl et al., 2014 ). Eap también
inhibe la actividad de elastasa, proteinasa 3 y catepsina G, una clase de neutrófilos serina proteasas
(NSP) almacenadas dentro de los gránulos azurófilos ( Pham, 2006) Estudios cristalográficos por
Stapels et al. demostraron que Eap se comporta como un inhibidor de la proteasa que ocluye la
hendidura catalítica de las serina proteasas de neutrófilos e inhibe su actividad ( Stapels et al.,
2014 ).

Notablemente, tras la activación de neutrófilos, las serina proteasas de neutrófilos entran al núcleo
para regular la formación de trampa extracelular ( Papayannopoulos et al., 2010 ) o se liberan en el
medio extracelular para separar factores de virulencia bacteriana ( Weinrauch et al., 2002 ) y / o
quimiocinas y receptores ( Korkmaz et al., 2010 ). Por lo tanto, Eap puede contrarrestar eficazmente
la actividad antibacteriana crucial asociada a las proteasas de neutrófilos.

Proteínas similares a Superantigen 1 (SSL1) y 5 (SSL5)

Las metaloproteasas de matriz constituyen una gran familia de proteasas dependientes de zinc
estructuralmente relacionadas. Facilitan la migración de las células inmunitarias como consecuencia
de la descomposición de los componentes de la matriz extracelular y potencian la actividad de las
quimioquinas, mejorando la inflamación y ayudando al aclaramiento bacteriano. La metaloproteasa
8 de la matriz (colagenasa de los neutrófilos) y la 9 (gelatinasa B de los neutrófilos) están altamente
expresadas y producidas por neutrófilos, se almacenan en gránulos secundarios y terciarios y se
secretan tras la activación celular ( Parks et al., 2004 ).

Para contrarrestar la actividad de estas proteasas, S. aureus secreta proteínas similares a los
superantígenos 1 (SSL1) y 5 (SSL5), que son miembros de la familia SSL. El número de miembros de
SSL expresados en las células estafilocócicas varía de 7 a 11, dependiendo de la cepa de S.
aureus ( Fitzgerald et al., 2003 ). Las proteínas SSL se caracterizan por la presencia de un dominio
globular de barril N-terminal unido al dominio de agarre C-terminal, que es una característica
estructural común a TSST-1 (síndrome de choque tóxico paravin-1) y enterotoxinas ( Williams et al.
., 2000 ).

SSL1 y SSL5 evitan la escisión inducida por metaloproteasas matriciales y la potenciación de IL-8,
una quimioquina producida por macrófagos y otros tipos celulares que induce la quimiotaxis de
neutrófilos e inhibe la remodelación de la matriz extracelular y la migración de neutrófilos a través
del colágeno ( Bestebroer et al., 2007 ; Chung et al., 2007 ; Figura 4 ). Por lo tanto, a través de la
inhibición de la metaloproteasa de la matriz, SSL1 y SSL5 limitan la activación, quimiotaxis y
migración de neutrófilos, todas funciones críticas de neutrófilos en el aclaramiento bacteriano
( Koymans et al., 2016 ).
Staphylococcus aureus colágeno Adhesión (CNA) y S taphylococcal C omplement Inhibitor (SCIN)

El evento temprano de la activación CP implica la unión de C1q a dos moléculas de cada uno de los
proenzimas C1r y C1s, formando el complejo C1 C1q: C1r 2 C1s 2 . Una vez activada, la serina
proteasa C1s escinde C4 y luego C2 para generar dos grandes fragmentos que se combinan entre sí
para formar la convertasa C3 del CP. El S. aureus c ollagen a dhesin (Cna) interactúa también con
C1q resultando en la inhibición de su interacción con C1r. En consecuencia, C1r 2 C1s 2 se desplaza
de C1q y no se permite la activación de la CP ( Kang et al, 2013. ; Figura 4 ). En esta línea, el péptido
secretado S tafilococcicoC omplemento I nhibidor) (SCIN) se asocia con y estabiliza C3bBb
convertasa de la vía alternativa en una forma inactiva, lo que impide la producción de C3a, C3b y
C5a ( Rooijakkers et al., 2005a ; Figura 4 ). Cna y SCIN pueden ser componentes importantes de una
estrategia de evasión más general de este notable patógeno.

Proteína de unión a fibrinógeno extracelular (Efb)

La proteína de unión al fibrinógeno extracelular Efb es otra molécula innata de evasión inmune
secretada por S. aureus , que bloquea la agregación plaquetaria ( Shannon y Flock, 2004 ; Shannon
et al., 2005 ), retrasa la cicatrización de heridas en un modelo de infección de herida de rata ( Palma
et al., 1996 ) e inhiben la adherencia de los neutrófilos al fibrinógeno inmovilizado ( Ko et al.,
2011 ). La proteína Efb tiene una región desordenada de unión al fibrinógeno N-terminal y un
dominio de unión C3 plegado en la región C-terminal ( Hammel et al., 2007) Efb actúa como un
inhibidor alostérico induciendo cambios conformacionales en el factor C3b que se propagan a través
de varios dominios e influyen en regiones funcionales muy alejadas del sitio de unión de Efb. En
consecuencia, perjudica la interacción de C3b con el factor B del complemento y la formación de C
convertasa activa ( Chen et al., 2010 ; Figura 4 ).

Serina aspartato glicosiltransferasas A (SdgA) y B (SdgB)

Crucial para la adherencia estafilocócica y la colonización de los tejidos del huésped es una familia
de proteínas estafilocócicas ancladas a la pared celular que contienen varias repeticiones de
residuos de serina aspartato (SD) ubicados entre el dominio A de unión al ligando N-terminal y un
motivo LPXTG C-terminal ( Foster et al., 2014 ). Los miembros prototipo de esta familia son los
factores A y B de agrupamiento, que son importantes factores de virulencia que median la unión
de S. aureus a varios componentes de la matriz extracelular ( Foster et al., 2014 ). Dos S.
aureus recientemente identificadoslas glicosilasas, SdgA y SdgB, son responsables de la
glucosilación concertada directa de los restos SD de estas proteínas. Aunque aún no se ha definido
el papel exacto de la glicosilación SD repetida, se ha sugerido que este evento podría hacer que las
proteínas bacterianas sean invulnerables a la proteolisis por catepsina G derivada de neutrófilos
humanos, prevenir su degradación y preservar la integridad estructural y funcional de estas
importantes virulencia factores ( Hazenbos et al., 2013 ).

Discusión y perspectivas
El hecho de que las proteasas del huésped secretan proteasas y reguladores abundantemente en
casi todas las cepas de S. aureus , y la observación de que los mutantes que carecen de proteasas
muestran una disminución en la formación y deterioro de los mismos durante la invasión de
órganos, indican que juegan un papel crucial como virulencia factores ( Kolar et al., 2013 ). Se han
realizado avances importantes en las últimas décadas en la identificación y comprensión del papel
funcional de las proteasas de S. aureus y factores secretados que regulan las actividades
proteolíticas del hospedador. Los avances específicos incluyen la evaluación de las múltiples
funciones de estos factores en la modulación del sistema del complemento y la prevención de la
fagocitosis. Se ha demostrado que S. aureuslas proteasas escinden las moléculas de adhesión tisular
permitiendo la transición del fenotipo invasivo al adhesivo y la consiguiente diseminación y
propagación de la infección bacteriana. Además, la incubación de suero humano con una
combinación de Aur, proteasa V8 y cisteína proteasas staphopain A y B causa la inhibición completa
de todas las vías del complemento. Esto da como resultado una disminución drástica en la actividad
hemolítica del suero y sugiere que la acción concertada de las cuatro proteasas es importante para
la evasión mediada por patógenos del sistema del complemento humano ( Jusko et al., 2014 ).

A pesar de la adquisición de estas ideas importantes, muchos aspectos estructurales y funcionales

de estos factores siguen siendo desconocidos. Por ejemplo, todavía faltan la expresión y el análisis
estructural por cristalografía de rayos X de muchos de estos factores, solos o en combinación con
objetivos específicos. Del mismo modo, acabamos de comenzar a explorar el papel de estas
proteínas en estudios con animales de alta calidad y cómo cada factor se relaciona con la compleja
secuencia de eventos en el inicio y la progresión de la infección. Finalmente, los nuevos avances en
las propiedades antigénicas de estos factores representan una base importante para el desarrollo
de enfoques prometedores para el manejo de la enfermedad estafilocócica. La adquisición de esta
gran cantidad de información a corto plazo proporcionaría oportunidades para desarrollar fármacos
sintéticos específicos dirigidos a una o más proteasas o inhibir la actividad de moduladores de
estafilococos de las proteasas del huésped. Sobre este tema, se ha sugerido que Eap "podría servir
como una plantilla para desarrollar una nueva clase de inhibidores sintéticos de serina proteasas de
neutrófilos" para tratar trastornos inflamatorios como la fibrosis quística y el enfisema, donde las
serina proteasas de neutrófilos desempeñan un papel importante (Stapels et al., 2014 ). Aunque en
un concurso diferente, este ejemplo ilustra cómo la comprensión de los factores de virulencia
estafilocócica podría contribuir al desarrollo de terapias en medicina.

Además, la coherencia entre la regulación positiva de las proteasas de S. aureus por el gen
regulador auxiliar agr ( Shaw et al., 2004 ; Novick y Geisinger, 2008 ) y la observación de que la
inhibición química selectiva de la detección del quórum agr promueve y fortalece la defensa del
huésped El sistema inmunológico ( Sully et al., 2014 ; Tsuchikama et al., 2017 ) allana el camino para
el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas contra las enfermedades de S. aureus .

Prospectivamente, los anticuerpos contra tales factores de S. aureus que apuntan a los elementos
del sistema inmune podrían restaurar los mecanismos de defensa del huésped y tener utilidad
clínica como agentes adyuvantes que mejoran la eficacia antibiótica en enfermedades invasivas
graves. Los enfoques para el desarrollo de la vacuna contra S. aureus hasta ahora no han tenido
éxito ( Pozzi et al., 2015 ). Esta falla puede explicarse en parte por el amplio espectro de atributos
inmunevasivos de la bacteria que neutralizan la muerte fagocítica de las bacterias. Por lo tanto, el
desarrollo de una vacuna eficaz contra S. aureus debería considerar el importante papel de los
factores de virulencia producidos por este patógeno.