JAK-STAT signaling in asthma

El asma es una enfermedad crónica caracterizada por una obstrucción variable de las
vías respiratorias, hiperreactividad de las vías respiratorias (AHR, por sus siglas en inglés)
e inflamación y remodelación de las vías respiratorias. Las vías respiratorias de los
pacientes asmáticos contienen un infiltrado inflamatorio crónico compuesto por linfocitos,
eosinófilos y mastocitos.
El proceso inflamatorio asmático es resultado de respuestas inmunes inapropiadas a
antígenos ambientales comunes en un individuo genéticamente susceptible (2). Estas
respuestas inmunitarias inapropiadas están orquestadas por un subconjunto de
células auxiliares T CD4 + denominadas células T helper 2 (Th2).
Las citocinas regulan la expansión de las células Th2 y median muchas de las funciones
efectoras de Th2 que subyacen en los eventos patógenos de una respuesta asmática.
Las señales mediadas por citoquinas son transducidas principalmente por la
cascada de señalización Jak-Stat (3).
Señalización Jak-Stat en diferenciación Th1 y Th2.
Los dos subgrupos principales de células Th CD4 +, denominadas Th1 y Th2,
secretan perfiles mutuamente distintos de citocinas y, por lo tanto, coordinan
diferentes clases de respuesta inmune (4).

 Las células Th1 secretan IL-2, IFN-γ y TNF-β

 Las células Th2 secretan IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 e IL-13
 Las células Th1 están involucradas en generación de respuestas de
hipersensibilidad de tipo retardado
 Las células Th2 dirigen a las células B a montar respuestas humorales fuertes
La polarización de una respuesta inmunitaria hacia un fenotipo Th2 puede ser perjudicial
si va dirigida contra un antígeno ambiental inocuo, como ocurre en el asma.
Las citocinas Th2, principalmente IL-4, IL-5 e IL-13, controlan los componentes
principales que caracterizan una respuesta asmática inflamatoria, incluido el
cambio de isotipo IgE, la producción de moco y el reclutamiento y activación de los
eosinófilos.
La población de células Th2 está notablemente expandida en las vías respiratorias
de los sujetos asmáticos, y la presencia de estas células se correlaciona con AHR y
la eosinofilia de las vías respiratorias (2). Las citoquinas IL-12 e IL-4 dirigen la
diferenciación de las células Th1 y Th2, respectivamente, de las células T ingenuas T.
Los ratones deficientes en IL-12 o el receptor de IL-12 (IL-12R) son incapaces de montar
respuestas Th1, mientras que los ratones que carecen de IL-4 o el receptor de IL-4 α
(IL-4Rα) presentan defectos de la cadena en la generación de respuestas Th2 (8, 9).
IL-12 e IL-4 no solo controlan la expansión de su correspondiente Th, sino que
también bloquean simultáneamente la generación del subconjunto opuesto.
Como la mayoría de las otras citoquinas, la IL-4 y la IL-12 activan la cascada de
señalización de Jak-Stat. En esta vía de señalización, la unión de una citoquina a su
receptor conduce a la activación de los miembros de la familia JAK de quinasas
asociadas al receptor. Estas quinasas posteriormente activan, a través de la
fosforilación de la tirosina, factores citoplasmáticos preexistentes denominados
Stat (transductor de señal y activador de la transcripción). La fosforilación de la tirosina
permite Las proteínas stat para dimerizar y translocar al núcleo, donde median los
cambios en la expresión génica mediante la unión de elementos específicos de ADN.
Aunque tanto IL-4 como IL-12 siguen este marco de señalización básico, las dos citocinas
difieren en los componentes específicos de Jak y Stat que activan (10).

 IL-4 estimula Jak1 y Jak3 para activar Stat6.

 IL-12 con su receptor conduce a la activación de Jak2 y Tyk2 y la
subsiguiente fosforilación de Stat4.
La activación de Stat6 y Stat4 son, por
lo tanto, eventos críticos en las
cascadas de señalización de IL-4 e IL-
12, respectivamente. Dados los roles
centrales de estas dos citoquinas en
sesgar las células Th hacia un fenotipo
Th2 o Th1, no es sorprendente que
Stat6 y Stat4 controlen múltiples
aspectos de los programas de
diferenciación Th, como se muestra en
la Figura 1.
Stat6 en la diferenciación th
El desarrollo y la supervivencia de las células de la memoria Th2 dependen de Stat6 (14,
15), mientras que las vías de producción de IL-4 independientes de Stat6 parecen
contribuir solo a las respuestas iniciales montadas por las células T ingenuas, en
lugar de a la regulación posterior de la población Th2 . Stat6 parece ser no solo
necesario sino también suficiente para impulsar la diferenciación de Th2, ya que la
introducción de formas constitutivamente activas de Stat6 da como resultado la
expresión de citoquinas de tipo Th2 incluso cuando esta forma de Stat6 se expresa en
células que ya se están diferenciando hacia un fenotipo Th1 (16 , 17).
El papel de Stat6 en la diferenciación de Th2 no se limita a activar y silenciar la expresión
de citoquinas específicas, sino que se extiende a otros aspectos del patrón distintivo de
expresión génica encontrado en las células Th2, incluida la expresión aumentada en
estas células de los receptores de quimiocinas CCR4 y CCR8 (18). ).
Las células T deficientes en Stat6 tienen un deterioro significativo en su capacidad
para expandirse con la estimulación de IL-4, lo que implica este factor de
transcripción en la proliferación impulsada por IL-4, así como en la diferenciación
(17, 19). Este defecto se debe a un bloqueo en la progresión de G1 a la fase S del
ciclo celular y se correlaciona con una capacidad alterada de las células T deficientes
en Stat6 para regular negativamente el inhibidor de la quinasa dependiente del ciclo
celular p27kip en respuesta a la estimulación con IL-4. . Paralelamente a su inducción
de los programas de expresión génica específicos de Th2, Stat6 parece suprimir las
vías específicas de Th1. De hecho, la generación de ratones deficientes tanto en
Stat4 como en Stat6 ha revelado que, en ausencia de Stat6, las células T CD4 +
deficientes en Stat4 pueden diferenciarse en células Th1 (20). Este efecto es no se
detectó en ratones con deficiencia de Stat4 solo, lo que sugiere que la presencia de Stat6
bloquea la capacidad de las células Th para adquirir el fenotipo Th1.
Los mecanismos por los cuales Stat6 controla la diferenciación de Th2 son complejos e
implican la inducción específica de subtipos de factores de transcripción específicos, así
como los cambios en la estructura de la cromatina y el patrón de metilación de la citosina
en el locus IL4. Los factores específicos de Th2 como GATA3 y c-maf se sinergizan
con NFAT y AP-1, que se expresan más ampliamente (6, 7), para activar el patrón
característico de Th2 de la expresión génica. Si bien tanto la transcripción como los
cambios epigenéticos dependen de Stat6, no queda claro si alguno de estos efectos es
directo. Algunos informes también sugieren que Stat6 puede unirse a sitios específicos
dentro del promotor de IL4 y a un sitio en el 3 ' región no traducida de IL4 que puede
funcionar como un silenciador específico de Th1 (21–23).
Stat4 en la diferenciación th
Mientras que la activación de Stat6 en respuesta a IL-4 es crítica para la generación
de respuestas Th2, la activación de un Stat diferente, Stat4, desvía las células Th
hacia el fenotipo Th1 después de la estimulación con IL-12. El análisis fenotípico de
ratones deficientes en Stat4 muestra que la activación de Stat4 es crítica para este
proceso. Las células T deficientes en Stat4 son incapaces de producir altos niveles
de la citoquina Th1 IFN-γ después de la exposición a IL-12 (20, 24). Stat4-
independiente de las vías de diferenciación Th1 también existen, pero, como se mencionó
anteriormente, sus efectos se ven más claramente en ausencia de Stat6 (20, 24).
Estudios recientes sugieren que la activación de Stat4 es crítica para la producción
sostenida, en lugar de la producción inicial de citoquinas de tipo Th1 (15). Stat4
también media la regulación a la baja del inhibidor del ciclo celular p27kip en
células Th1 tratadas con IL-12 (19, 25), lo que le permite (como Stat6) controlar la
proliferación de Th, así como la diferenciación.
Al igual que con las citocinas Th2, la inducción de la expresión del gen de citocinas
específicas de Th1 requiere remodelación epigenética, así como la inducción de factores
de transcripción específicos de Th1 como el recientemente descrito T-bet (26).
En particular, no está claro si la activación de Stat4 participa en la inducción del factor T-
bet específico de Th1, cuya deficiencia en ratones ha demostrado recientemente que
conduce al desarrollo espontáneo de cambios en las vías respiratorias característicos del
asma humano (15, 25, 27). , 28). Se informa que Stat4 transactiva el IFN-γ directamente
(29), aunque es probable que se requieran factores adicionales para la expresión
completa de esta citocina (7). Stat4 activado también bloquea la diferenciación a lo
largo de la ruta Th2 al reprimir la expresión del factor Gata3 (30) específico de Th2,
estableciendo otro paralelo más entre el papel de Stat4 en el desarrollo de Th1 y el
de Stat6 en el desarrollo de Th2. El progreso adicional hacia la comprensión de las
bases fisiológicas de las acciones de estas dos proteínas Stat requerirá la identificación
de los objetivos clave de estos dos factores de transcripción.
La cascada de señalización de Jak-Stat en la regulación de IgE.
Los niveles de IgE se correlacionan con la incidencia de asma atópica en los seres
humanos. El reciente éxito de la terapia anti-IgE en el tratamiento de los asmáticos
atópicos también destaca la importancia de esta clase de anticuerpos en el asma humana
(31) (Figura 2). El trabajo en los últimos diez años ha detalla cómo las citoquinas (IL-4 e
IL-13, en particular) inducen la producción de IgE y cómo otras citoquinas, como el
IFN-γ, bloquean esta inducción.
IL-4 inicia la señalización oligomerizando el receptor heterodimérico de IL-4, que, en
las células hematopoyéticas, está compuesto por la cadena de IL-4Rα específica de
ligando y la cadena γ común (γC) (32). Esta oligomerización inicia la señalización
activando Jak1 y Jak3, que se asocian constitutivamente con la cola citoplásmica
de las subunidades del receptor de citocinas (Jak1 con IL-4Rα y Jak3 con γC). IL-13
también se une a IL-4Rα y puede activar la señalización a través de Jak1, pero esta
citoquina también se une a una subunidad de receptor más específica, la cadena IL-
13Rα1, que se asocia con la quinasa de la familia Jak Tyk2.
Después de la unión de IL-4 o IL-13, la Jaks activada fosforila las tirosinas dentro
del dominio citoplásmico del IL-4Rα, que actúan como sitios de acoplamiento para
Stat6. Stat6 fosforilado homodimeriza, se transloca al núcleo y activa la
transcripción de genes implicados en la diferenciación de células B, incluidos los
genes Iε e Iγ1 de la línea germinal en ratones y los genes Iε e Iγ4 de la línea germinal
en humanos (33). Se ha demostrado en ratones que la inducción de estos promotores de
la línea germinal y la expresión de las correspondientes transcripciones "estériles" de la
línea germinal son esenciales para el cambio de clase de Ig, eventos de recombinación
que se requieren para la producción de las diversas clases de anticuerpos secretados
(33). Stat6 contribuye al cambio de clase para producir IgE e IgG1 (11–13). En ratones, el
IFN-γ, que actúa a través de Stat1 para activar la transcripción de muchos genes de
respuesta temprana, inhibe la transcripción de la línea germinal Iε e Iγ1 y, por lo
tanto, bloquea la producción de células B de IgE e IgG1 (34). Esta regulación parece
estar mediada por el supresor de la señalización-1 de la citoquina (Socs-1), una de
la nueva familia de moléculas de Socs inhibitorias definidas por la presencia de
dominios SH2 conservados y un nuevo motivo denominado "caja de Socs" (35) .
Estas proteínas son inducidas por citoquinas y parecen funcionar en un circuito de
retroalimentación negativa. Socs-1 puede unirse a todos los Jaks e inhibir la
activación de Stat. La capacidad de IFN-γ para inhibir la señalización de IL-4 parece
deberse a la inducción de Socs-1 y la supresión resultante de la actividad de Stat6
(36, 37).
Un segundo inhibidor de la señalización de Jak-Stat implicado en las respuestas inmunes
atópicas es Bcl-6, el producto de un protooncogen putativo que se reordena o muta
en los linfomas no Hodgkin. Normalmente, Bcl-6 funciona como un represor
transcripcional, y se ha demostrado que se une a los sitios de unión a Stat6, como el
que se encuentra en el promotor Iε. Los ratones que carecen de Bcl-6 desarrollan una
enfermedad inflamatoria caracterizada por niveles aumentados de IgE, células Th2 e
infiltrados de mastocitos. Sus células B producen altos niveles de IgE (38, 39), un
fenotipo que requiere la expresión de Stat6 por parte de estas células (40, 41).
Stat6 en la fisiopatología del asma
La mayoría de los estudios se han centrado en Stat6, dada su participación en la dirección
de las respuestas Th2 y la producción de IgE (42–46). Tras la provocación del
alérgeno, los ratones deficientes en Stat6 no desarrollan una respuesta Th2
pulmonar o AHR, y no muestran un aumento detectable en la producción de IgE o
en el número de células que contienen moco. Debido a que la administración
intravenosa de IL-5 a ratones deficientes en Stat6 restaura el desarrollo de eosinofilia y
AHR después de la sensibilización al antígeno (46), parece que una función esencial de
Stat6 en el desarrollo de AHR es dirigir las respuestas Th2 y la producción de IL-5.
Curiosamente, diferentes grupos han reportado distintos efectos de la deficiencia de Stat6
en el infiltrado inflamatorio. Los ratones del fondo BALB / c muestran solo una disminución
del 50% en el infiltrado eosinofílico, mientras que la eosinofilia inducida por antígeno está
completamente bloqueada en ratones C57BL / 6 deficientes en Stat6 (42, 43). Queda por
establecer si las distinciones en los protocolos de sensibilización y / o los antecedentes de
la cepa contribuyen a las diferencias informadas.
Informes recientes sugieren que el desarrollo de la inflamación pulmonar alérgica
requiere la activación de Stat6 no solo en las células T, sino también en las células
parenquimatosas del pulmón (47). De hecho, las células Th2 específicas de antígeno
transferidas de forma adoptiva de los ratones Stat6 + / + no logran mediar en la
inflamación alérgica en ratones deficientes en Stat6. Se cree que estos defectos se deben
a alteraciones en el tránsito de estas células Th2 al pulmón, posiblemente debido a
defectos en la producción de quimiocinas como la eotaxina, que controlan el reclutamiento
de células Th2. Otra característica del asma que parece requerir Stat6 es la
producción de moco: los ratones Stat6 - / - no muestran hiperplasia de células de
copa y tienen una disminución de la secreción de moco en el modelo de asma con
desafío de la ovalbúmina-asma (42, 43, 48). Nuevamente, la transferencia de células
Stat6 + / + T específicas de antígeno no
logra complementar este defecto, lo que
implica a Stat6 dentro del pulmón como un
mediador clave de la producción de moco
(47). En conjunto, todos estos estudios
apoyan firmemente la idea de que Stat6
juega un papel central en la patogénesis
del asma.
Los linfocitos de la sangre periférica de
pacientes asmáticos y alérgicos no
muestran diferencias significativas en el
nivel de actividad de STAT6 en relación con los controles sanos (50), pero estos
tienen una mayor densidad de células que expresan STAT6 en sus vías respiratorias
(51).
Curiosamente, la densidad de estas células que expresan STAT6 es significativamente
mayor en los asmáticos atópicos que en los no atópicos.
Un estudio reciente de sujetos con asma grave confirma que tales pacientes muestran
niveles significativamente elevados de STAT6 en las vías respiratorias y también
identifican el tipo de célula principal que expresa STAT6 en este tejido como la célula
epitelial bronquial (52). Por lo tanto, el microentorno de las vías respiratorias asmáticas
puede contribuir a desregular la expresión de STAT6.
Figura 1
Señalización de JAK-STAT y generación de células Th1 y Th2.
Después de la presentación del antígeno, una célula CD4 + T ingenua se diferenciará a lo
largo de la vía Th1 o Th2, dependiendo de la naturaleza de las citoquinas que contacte.
La señalización a través del receptor de IL-12 (vía roja) y sus proteínas Jak y Stat
asociadas culmina en la expresión de los productos génicos específicos de Th1,
particularmente la citocina interferón-γ (IFN-γ) Por el contrario, IL-4 activa un complejo de
receptor distinto , que contiene diferentes Jaks y Stats, y favorece la expresión de
citoquinas Th2 y otros productos genéticos (vía negra).
Estas vías se pueden regular entre sí en el nivel transcripcional. En particular, el factor de
transcripción GATA3, cuya expresión es inducida por la señalización de IL4, es
esencial para la transactivación de otros genes asociados a Th2, como los de las
citoquinas Th2 y los receptores de quimioquinas. Otro factor de transcripción, T-BET, es
inducido por IFN-γ (y por lo tanto indirectamente por la estimulación con IL-12) y también
favorece la expresión de esta citoquina, estableciendo así un circuito de retroalimentación
positiva que apoya la polarización Th1. Además, T-BET silencia la expresión de los genes
asociados a Th2. La polarización hacia la respuesta Th2 conduce a la expresión de varias
citoquinas (IL-4, IL-5, IL 6, IL-10 e IL-13) que contribuyen a las patologías observadas en
el asma.
Figura 2
IgE en la patogenia de las respuestas asmáticas. La producción de citoquinas de tipo Th2
(IL-4 e IL-13) por las células T en respuesta a antígenos como los alérgenos en el aire
impulsará la síntesis de IgE por las células B. La IgE puede unirse a los receptores de IgE
de alta afinidad en los mastocitos. La reticulación de las moléculas de IgE unidas después
de la reexposición al antígeno provoca la desgranulación de los mastocitos con la
liberación posterior de una variedad de mediadores, que desencadenan respuestas
asmáticas inflamatorias tempranas y tardías.