Contenido

ANÁLISIS INSTRUMENTAL
 Parámetros descriptivos de la cromatografía en columna
 Constante de distribución, Kc

TEMA 3  Factor de retención, k

 Factor de selectividad,  ij
SEPARACIONES  Resolución, Rs ij

CROMATOGRÁFICAS  Eficacia de la columna

 Variables cinéticas que influyen en el ensanchamiento de

Cromatografía de Gases- banda

 Ejercicios
Clase 2
Prof. Luis Peña 1
2

Parámetros descriptivos de la cromatografía Parámetros descriptivos de la cromatografía

en columna en columna
Para los varios componentes de la mezcla
Componente
No Retenido X Y
Señal
Z

Tiempo de Retención (tR): tiempo que tarda un soluto en desplazarse desde el

inyector hasta el detector tM tR X tR Y tR Z Tiempo
Tiempo de Muerto (tM): tiempo necesario para que los solutos no retenidos se
desplacen desde el inyector al detector
tR X
Tiempo de Retención Ajustado (tR ): tiempo medio que las moléculas de un
analito se mantienen retenidas por la FE
Anchura de Base (W): anchura de la banda cromatografica de un soluto medida 3 Para el componente i sería tR i = tRi - tM 4
sobre la línea base
 Parámetros descriptivos de la cromatografía Parámetros descriptivos de la cromatografía
en columna en columna
Se sabe que el Tiempo de Retención depende de:
Un Componente No Retenido es una
sustancia totalmente afín a la FM, es decir Afinidad con la Caudal de
no tiene nada de afinidad a la FE Fase Estacionaria Alimentación del
Gas de Arrastre
A mayor afinidad con A mayor caudal
la FE mayor será el tR menor será el tR
La velocidad de migración de la especie no
retenida coincide con la velocidad promedio
del movimiento de las moléculas de la FM Baja
resolución Picos suaves

Tiempo
Muerto 5 Alto caudal tR bajos Bajo caudal tR altos 6

Constante de distribución, Kc Constante de distribución, Kc

La columna cromatográfica: serie de etapas independientes donde ocurre el La constante de distribución Ki actúa como una constante de equilibrio y por lo
tanto depende de la temperatura, la cual a su vez tiene influencia sobre el
equilibrio entre el analito disuelto por la fase estacionaria y en el gas de cromatograma:
arrastre:
Se desea una temperatura
T1
que ofrezca picos agudos y
con buena resolución

Ocurre un “cuasi-equilibrio” entre el analito adsorbido en

la FE y disuelto en el gas de arrastre.

AM AE T2 >>T1 Bajan los tR y la resolución

de los picos

AE 
Ki = Constante de Distribución del componente i

Ki  [AE] = concentración del analito en la FE

AM  [AM] = concentración del analito en la FM
T3 <<T1 Aumentan los tR y se
obtienen picos suaves
7
8
 Factor de retención, k Factor de retención, k
El Factor de Retención o Factor de Capacidad es un parámetro importante
También, el Factor de Retención o Factor de Capacidad de un soluto
que con frecuencia se utiliza para describir las velocidades de migración de
puede determinarse en el cromatograma midiendo el tiempo muerto de
los solutos en las columnas.
la columna y el tiempo de retención del soluto, así:
tR i  tM t
Para una especie i, el factor de retención k´i se define como: ki   Ri
tM tM
Ki = Constante de Distribución del componente i
K  VE
Se sabe que:
ki  i VE = volumen de la FE
Cuando k´i <<1, entonces la elución tiene lugar tan rápidamente que
VM VM = volumen de la FM
es difícil determinar con exactitud los tR.

Cuando k´i ≈ 20 o 30, entonces los tiempos de elución son

El Factor de Retención o Factor de Capacidad es una medida de la excesivamente largos.

fortaleza con que la fase estacionaria retiene un soluto dado Idealmente, las separaciones se realizan en unas condiciones en
9 las que los k´i oscilan entre 2 y 10. 10

Factor de selectividad,  ij Resolución, Rsij

El Factor de Selectividad de una columna para dos especies i y j con La resolución del cromatograma es una medida cuantitativa del grado de
picos adyacentes en el cromatograma se define como: separación entre dos picos cromatográficos, es decir, una medida de la
k j t R j t R j  t M tR j  tRi “HABILIDAD” del método elegido para separar dos componentes
 ij   
ki t R i tR i  tM  
completamente
tR j  tRi 2 tR j  tRi
Rsij  
0,5W j  Wi 
Donde:
k´j = factor de retención para la especie más fuertemente retenida, la
W j  Wi
especie j
Rs = 0,75 Rs = 1,25 Rs = 1,50
k´i = factor de retención para la especie menos retenida o que eluye Rs = 1,50
con más rapidez, la especie i MÍNIMO
ACEPTABLE
Superposición de
Según esta definición  ij  1 , así que si se presenta que: las áreas de los
picos es menor a
0,13 %
tRi  tR j  ij  1
No hay separación, la FE selecciona
11 12
igualmente a los dos componentes
 Eficacia de la columna Eficacia de la columna
La eficacia de la columna
proporciona una medida Se observa un ensanchamiento
Al comenzar una cuantitativa de la magnitud del de ambas zonas, lo que
separación, el soluto ensanchamiento de banda disminuye la eficacia de la
ocupa una estrecha columna como sistema de
banda de anchura A medida que el soluto separación
finita. atraviesa la columna
se produce el
ENSANCHAMIENTO
DE BANDA

Figura 2. Perfiles de concentración de las bandas de los analitos A y B a dos

Figura 1. (a) Diagrama que muestra la separación de una mezcla de A y B por 13
cromatografía de elución en columna. (b) Señal de salida del detector en las distintas tiempos distintos en su migración a lo largo de la columna de la figura 1. Los
fases de la elución mostradas en (a). tiempos t1 y t2 se indican en la figura 1. 14

Eficacia de la columna Eficacia de la columna

Martin y Synge propusieron la “Teoría de los Platos de Separación” aplicando Se supone que la columna cromatográfica está formada por una serie de
una analogía con las “Torres de Destilación”: etapas separadas donde ocurre el equilibrio del analito entre la FE y la FM:

Cada “etapa” de equilibrio es llamada de

PLATO TEÓRICO

En la columna se delimita una ALTURA DE LA ETAPA (H) y se denomina

“PLATO TEÓRICO”
L
L  H  N  platos
L
H  
N platos
H
15 16
 Eficacia de la columna Eficacia de la columna
Ellos llamaron a cada sección “Plato Teórico” y definieron la eficacia de la
Admitiendo un perfil gaussiano, el
columna en función del número de platos teóricos (N) o de la altura de un
número de platos teóricos de una
plato teórico (H), así:
columna (N) puede ser calculado
L L
L  H N H  N  por:
N H t 
2

Donde:
N i  16   R i 

 Wi 
L: longitud de la columna
H: Altura Equivalente de Plato Teórico (AEPT) o (EHTP), por sus siglas
tRi
en inglés N Columna más
wi eficiente
N: número de platos teóricos

La eficacia de la columna mejora con el aumento del número de platos

teóricos (N) o con la disminución de la altura del plato teórico (H) 17 18

Eficacia de la columna Variables cinéticas que influyen en el

ensanchamiento de banda
ATENCIÓN: Tabla 1.Variables que influyen en la eficacia de la columna

Es importante recordar que un plato teórico es una construcción Variable Símbolo Unidades
habituales
artificial y que en una columna cromatográfica no existen realmente
Velocidad lineal de la fase móvil u cm *s-1
tales platos.
Coeficiente de difusión en la fase móvil* DM cm 2*s-1
Coeficiente de difusión en la fase DS cm 2*s-1
estacionaria*
De hecho, el número de platos teóricos depende tanto de las
Factor de retención k´ sin unidades
propiedades de la columna como de las del soluto. Por tanto, el
Diámetro de la partícula del relleno dp cm
número de platos teóricos de una columna no es fijo y puede variar
Espesor del recubrimiento líquido en la df cm
de unos solutos a otros. fase estacionaria

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20
 Variables cinéticas que influyen en el Variables cinéticas que influyen en el
ensanchamiento de banda ensanchamiento de banda
INFLUENCIA DEL CAUDAL DE LA FASE MÓVIL
INFLUENCIA DEL CAUDAL DE LA FASE MÓVIL
Una de las más utilizadas es la Ecuación de Van Deemter:
La magnitud de los efectos cinéticos sobre la eficacia de la columna
B
depende claramente del tiempo de contacto entre la fase móvil y la fase H  A C
estacionaria, el cual a su vez depende del caudal de la fase móvil. 
Donde:

H: altura de plato, cm
Por esta razón, los estudios de eficacia generalmente se han realizado
determinando H en función de la velocidad de la fase móvil. μ: velocidad lineal de la fase móvil, cm/s

A, B, C: coeficientes que se relacionan respectivamente con los

fenómenos de los caminos múltiples de flujo, la difusión longitudinal
21 22
y la transferencia de masa entre las fases

Variables cinéticas que influyen en el Ejercicios

ensanchamiento de banda Ejercicio 1:
INFLUENCIA DEL CAUDAL DE LA FASE MÓVIL Con un cromatógrafo GL y con una columna de relleno de 40 cm se
Una de las más utilizadas es la Ecuación de Van Deemter: obtuvieron los datos siguientes:
Compuesto tr (min.) w (min.)
Aire 1,9 --------
B
H  A C Metilciclohexano 10,0 0,76
 Metilciclohexeno 10,9 0,82
Tolueno 13,4 1,02
Se debe buscar Calcular:
μóptimo que ofrezca (a) Los tiempos de retención ajustados y los factores de retención para
cada componente
Hmínima y Nmáxima (b) El número de platos teóricos promedio y su desviación estándar
(c) La altura promedio para los platos de la columna
(d) Coeficiente de selectividad y la resolución entre cada par de picos
adyacentes
Figura 3. Gráfica de Van Deemter para una columna cromatográfica 23
rellena cuya FE es líquida 24
 Ejercicios Ejercicios
Ejercicio 1: Ejercicio 2:
Solución: Durante la realización del método para la determinación de trihalometanos
Compuesto tr (min.) w
(min.)
tR
(min)
k N
platos
 ij Rsij en el agua potable se utilizo un patrón único proporcionando los resultados

Aire 1,9 --------

siguientes:
Metilciclohexano 10,0 0,76 8,1 4,26 2770
Trihalometano Concentración Área del pico
(ppb)
1,11 1,14
CHCl3 1,30 1,35*104
Metilciclohexeno 10,9 0,82 9,0 4,74 2827
1,29 2,72 CHCl2Br 0,90 6,12*104
Tolueno 13,4 1,02 11,5 6,05 2761 CHClBr2 4,00 1,71*104
CHBr3 1,20 1,52*104
El análisis del agua potable de un manantial proporcionó áreas de
b) Número de platos teóricos promedio = 2786 y desviación estándar =
1,56*104, 5,13*104, 1,49*104 y 1,76*104 para CHCl3, CHCl2Br, CHClBr2 y
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CHBr3, respectivamente. Indique la concentración de cada uno de los
c) Hpromedio = 0,14 mm
25 trihalometanos en la muestra de agua. 26

Ejercicios
Ejercicio 2:

Solución:

Trihalometano Concentración en la
muestra (ppb)
CHCl3 1,50
CHCl2Br 0,75
CHClBr2 3,49
CHBr3 1,39

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