PRÁCTICA LABORATORIO

Tema: Actividad enzimática.

Objetivos

• Identificar como actúa la enzima catalasa manipulando la cantidad de sustrato.

• Medir la expulsión de gas total después de que la reacción finalice.

Variables

• Cantidad de sustrato manipulado para los tres intentos

• Tiempo

• Reacción de la catalasa

Fundamento teórico

Enzimas

Las enzimas son proteínas globulares que actúan como biocatalizadores, cuya función es

acelerar la velocidad de las reacciones químicas que se producen en el organismo y que son

necesarias para mantener su actividad biológica, lo cual realizan al disminuir la energía de

activación. Un catalizador es una sustancia que disminuye la energía de activación de una

reacción química. Al disminuir la energía de activación, se incrementa la velocidad de la

reacción. Las reacciones catalizadas por enzimas ocurren en velocidades 1010 a 1014 veces

más rápidas que las no catalizadas. (Scribd.2017)

Catalasa

La catalasa es una enzima antioxidante común que es producida naturalmente en casi todos

los organismos vivos. Las reacciones en la catálisis son importantes para la vida; ayudan a

descomponer el peróxido de hidrogeno-un agente oxidante poderoso y dañino-en oxígeno y

agua, previniendo la acumulación de burbujas de dióxido de carbono en la sangre.

La catalasa es una enzima muy potente: una molécula de catalasa puede descomponer

millones de moléculas de peróxido de hidrogeno en oxígeno y agua. También usa el

peróxido de hidrogeno para oxidar las toxinas potencialmente dañinas del cuerpo, como el

formaldehido, el ácido fórmico, alcohol y fenol. (Scribd.2017)

Metodología

En este trabajo se intenta reflejar como la cantidad de sustrato es un factor que acelera la

actividad enzimática de la catalasa y tener en cuenta que a mayor cantidad de sustrato

mayor cantidad de oxigeno es liberado. Teniendo en cuenta que la catalasa se encuentra en

la célula de los tejidos animales donde la función de esta es necesaria en el metabolismo

celular ya que durante dicho proceso se forma una molécula toxica que es el peróxido de

hidrogeno(H2O2), la catalasa se encarga de descomponerlo en agua y en oxígeno, y esta es

la forma en que soluciona el problema.

En esta practica se intenta recrear ese medio en el que, durante el metabolismo celular de

algunos alimentos (hígado de pollo) debido a que este tiene una gran cantidad de

antioxidantes los cuales se forman por el peróxido de hidrogeno (H2O2).

Se harán 3 intentos por cada medida (5ml-10ml-15ml).

Materiales

• Soporte universal

• Pinza nuez

• 1 Erlenmeyer con desprendimiento lateral

• 2 probetas

• Vidrio reloj

• Balanza electrónica

• Pipeta graduada

• Pipeteador

• Tapón

• Manguera

• Peróxido de hidrogeno

• Hígado de pollo

• Recipiente hondo

¿Cómo hacer el montaje? (Figura 1.) (figura 1.1)

Introducir la manguera al desprendimiento lateral del Erlenmeyer.

Sujetar la pinza nuez al soporte universal.

Aparte llenar el recipiente un poco mas de la mitad y la probeta completamente con agua.

Girar la probeta 180° sin derramar agua de lo contrario aparecerán burbujas y afectara la

medición del gas, haciendo que la abertura quede dentro del recipiente sumergida unos

pocos centímetros, y fijarla con la pinza nuez.

El extremo libre de la manguera introducirlo en la probeta. Así queda por terminado el

montaje y listo para ser utilizado.

Figura1. Figura 1.1

Procedimiento

1. En el Erlenmeyer de desprendimiento lateral se debe introducir un trozo de hígado

de pollo (0.6 g).

2. Verter el peróxido de hidrogeno (5 ml-10ml-15ml) en el Erlenmeyer y

posteriormente ponerle el tapón e inmediatamente activar el cronometro con

secuencias de 1 minuto por cada intento.

3. Observar la reacción y al completarse el minuto retirar la manguera de la probeta.

Posteriormente medir el desplazamiento del agua que se encontraba en la probeta y

este valor será la cantidad de O2 producto de la reacción.

4. Repetir el proceso tres veces por cada volumen de H2O2, en cada repetición lavar el

Erlenmeyer para eliminar residuos de peróxido de hidrogeno ya que este puede

reaccionar con la nueva muestra de hígado y afectar los resultados.

 Ejemplo de la reacción: figura 1.3

Figura 1.2

Tabulación de resultados

Cantidad de Desplazamiento
Grafica 1
sustrato (ml) de oxigeno (ml)
Primer intento
5 55

segundo intento 5 27

5 19

Tercer intento 5 15

10 26

10 24

10 25

15 7

15 32

15 32

15 33

*NOTA: Recordar el peso del hígado (0.6 g)

Cada intento dura 1 minuto.

Análisis y limitaciones

• Numero de intentos: para cualquier practica que arroje resultados se recomienda

un mínimo de 3 intentos, ya que por medio de estos podemos observar la diferencia

y sacar promedio de los datos.

Al observar la tabla (grafica 1) identificamos que en el primer y tercer intento hay

un ensayo de más, hicimos esto debido a que sus resultados arrojaron valores fuera

del rango esperado.

• Promedio de datos:

Cantidad Promedio (incluyendo

de sustrato todos los datos)
5 ml 29 ml

10 ml 25 ml

15 ml 26 ml

Grafica 2

cantidad de promedio (datos

sustrato cercanos)

5 ml 20,33 ml

10 ml 25 ml

15 ml 32,33 ml

Grafica 2.1
• ¿Por qué se da la reacción de la catalasa?

El peróxido de hidrógeno es uno de los productos del metabolismo celular en

diversos organismos, pero tiene gran potencial de toxicidad.

La Catalasa es una enzima presente en muchos tipos de células. Su función es

proteger a las células del efecto tóxico del peróxido de hidrógeno (agua oxigenada).

• ¿Por qué usamos un lapso de 1 minuto?

Para que el sustrato reaccione en su totalidad con la enzima, siendo el reactivo

limitante el número de enzimas, debemos esperar mucho tiempo debido a que se

llega a un punto donde la cantidad de sustrato y de enzimas es igual haciendo que la

reacción sea constante y que a pesar de que agreguemos mas sustrato la actividad

enzimática no se alterara.

Preguntas

• ¿Qué puede inhibir la actividad enzimática de la catalasa?

La actividad de la CAT puede ser inhibida por el cianuro, el plomo, el sulfuro, la

hidroxilamina, el paracetamol, la bleomicina, la adriamicina, la benzidina y el

paraquat (Céspedes et al., 1996).

• En Colombia por consecuencia de la guerra, minería ilegal y atentados contra los

recursos naturales muchas personas se ven obligadas a tomar agua con altos niveles

de contaminación por plomo y cianuro. Sabiendo que estos elementos inhiben la

actividad enzimática de la catalasa, nos preguntamos ¿Qué riesgo corren estas

personas?

La catalasa tiene uno de los índices de balance más grandes comparados con las de

las otras enzimas. En otras palabras, una enzima catalasa puede transformar 40

millones de moléculas de peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno en tan solo un

segundo. De hecho, la enzima catalasa sirve para ayudar nuestras células,

contrarrestando y equilibrando la fabricación continua de peróxido de hidrógeno.

Debido a sus innegables, poderosas y demostradas propiedades antioxidantes, la

catalasa favorece los procesos de los órganos y el organismo. Asimismo, de fungir

como súper antioxidantes, la catalasa también tiene la habilidad de utilizar el

peróxido de hidrógeno para oxidar toxinas incluyendo el metanol, etanol, ácido

fórmico, formaldehido, y nitrito. Esta actividad dual la convierte en una enzima

celular crucial. (Dr. Edward F. G., 2011)

• La enzima catalasa al ser antioxidante puede catalizar la conversión de peróxido de

hidróxido en agua y oxígeno, pero ¿Qué otras funciones pueden tener dicha

enzima?

*Posibles Efectos Anti-Envejecimiento y Anti-Degenerativos

La catalasa hoy por hoy se estudia por sus aplicaciones al extender la vida y la

vitalidad. Científicos de la Universidad de Washington en Seattle realizaron unas

pruebas de laboratorio con ratas y el aumento natural de catalasa en sus cuerpos. Al

suplementar con más catalasa, la vida de estas ratas de laboratorio aumentó

aproximadamente en un 20%. Esto equivale a cerca de 25 años en los humanos. (Dr.

Edward F. G., 2011)

*La Catalasa Puede Prolongar la Vida

El Dr. David Sinclair de la Escuela de Medicina de Harvard declaró en The

Scientist Magazine que hay un vínculo directo entre la enzima catalasa, el daño de

radicales libres y aumentar nuestra vida. Esto además sugiere que la enzima catalasa

puede servir para evadir las enfermedades degenerativas. De manera similar,

estudios realizados en Rusia y España de igual forma muestran una similitud entre

estos tipos de enzimas y la prolongación de la vida. En 2005, científicos españoles

descubrieron que dosis muy elevadas de polifenoles de manzana impulsaron la

expresión de genes de la catalasa natural que hay en el cuerpo. Estudios de China

sobre el polifenol de las manzanas confirmaron que significativamente aumenta la

catalasa. (Dr. Edward F. G., 2011)

*Ayuda a Evitar Daños al ADN

Un estudio del 2006 del Instituto de Citología y Genética determinó que el estrés

oxidante, la recolección de proteína y el daño al ADN podrían reducirse en

presencia de enzimas antioxidantes, incluyendo la catalasa y el glutatión que se

encuentran en los extractos de citosol y de la mitocondria de las células del hígado

de las ratas. Este estudio asimismo descubrió que los suplementos dietéticos

incrementan la actividad de la catalasa en la mitocondria del hígado de las ratas

 produciendo una menor disfunción mitocondrial y disminuyendo el proceso de

degeneración en dichos animales. (Dr. Edward F. G., 2011)

Discusión y conclusión

• A pesar de que hay dos resultados (grafica 1) que tienen un porcentaje de

diferencia muy marcado respecto a los otros, podemos observar que se cumple

que a mayor cantidad de sustrato mayor liberación de oxigeno se presenta.

• La actividad enzimática se presentó como esperaba, excepto en dos datos

(grafica 1) (55 ml y 7 ml), creemos que estos resultados se dieron por:

*55 ml: al ser el primer dato tomado, deducimos que se dio por que los

productos que usamos (peróxido de hidrogeno e hígado de pollo) estaban

nuevos o era primera vez que se usaban y eran expuestos al ambiente.

*7 ml: podemos decir que este resultado se debe a un error casual ya que pudo

ser por alguna variación en las condiciones del experimento o por un descuido.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Nathaniel Altman. (1995). terapias de oxígeno. Mexico: lasser press Mexican S.A de C.V...

PAGINAS WEB UTILIZADAS

▪ https://es.scribd.com/document/360649527/Trabajo-practico-de-Biologia-NM-3-

Experimentos-enzimaticos

▪ https://www.academia.edu/17011508/Catalasa

▪ https://www.globalhealingcenter.net/salud-natural/catalasa.html

▪ https://www.researchgate.net/publication/322337338_OBTENCION_DE_EXTRAC

TOS_DE_LAS_ENZIMAS_GLUCOSA_OXIDASA_Y_CATALASA_A_PARTIR_DEL

_CULTIVO_DEL_Aspergillus_niger_Y_SU_POTENCIAL_COMO_ADITIVO_PAR

A_LA_CONSERVACION_DE_ALIMENTOS