Universidad Nacional Autónoma

De México

Facultad De Química

Departamento de Ingeniería Metalúrgica

Laboratorio De Biolixiviación

Reporte de Prácticas No. 1

“Conteo de Microorganismos”

Alumno: Maldonado Cabrera Luis Alberto

Profesor: Rosa Elva Rivera Santillán

Grupo: 01

Semestre: 2019-2
Objetivos
 Identificar los microorganismos Acidithiobacillus Ferrooxidans a través del
microscopio.
 Realizar el conteo de microorganismos correspondiente a cada muestra
Introducción
Existen diversos métodos para enumerar microorganismos en muestras de muy diferente
origen. Cada método tiene sus peculiaridades a la hora de transformar los datos obtenidos en
una densidad microbiana de la muestra estudiada, bien sea Unidades Formadoras de
Colonias, Microorganismos Totales, etc.
Es un método muy utilizado cuando se necesita determinar el tamaño de la población
bacteriana de una muestra. El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada
uno desarrollará una colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente
homogénea con respecto a su composición microbiológica, es posible que una colonia se
origine de un microorganismo o de cientos de ellos, dando en este último caso un recuento
menor del real.
También es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan crecer en
las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.). En este caso el
recuento también será inferior al real. Lo que si se sabe es que cada colonia observada se
formó a partir de por lo menos un microorganismo. Esta es una condición necesaria y
suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad formadora de colonia (ufc) a los
efectos de los cálculos.
Se admite, por lo tanto, que, en los métodos de recuento de microorganismos vivos, son
inevitables los errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeñas, es posible
cometer grandes errores.
Se tienen principalmente estos dos métodos:
 Método del número más probable (NMP)
Es una técnica de estimación estadística basada en el hecho que, a mayor número de bacterias
en una muestra, mayor será la dilución necesitada para reducir la densidad hasta el punto en
que ninguna bacteria se le permita crecer en la serie de tubos de dilución. Muestras
microbianas son añadidas a tubos con caldos de lactosa y la presencia o ausencia de gas
formado en la fermentación y da un estimado de número de células. Este método es más útil
cuando las bacterias que están siendo contados no crecerán en medios sólidos, como en el
caso de las bacterias nitrificantes quimioautótrofas. También es útil cuando el crecimiento de
la bacteria es en un medio líquido diferencial, usado para identificar microbios, como en
bacterias coliformes. El NMP es la única afirmación en la cual existe 95% de probabilidad
que la población bacteriana sea de rango correcto, siendo el número estadístico más probable.
  Determinación directa por microscopio
Es muy parecido al caso del Método de Breed, el cual colocando en la preparación un
volumen conocido de la suspensión de células sobre un área conocida del portaobjetos.
Como no es práctico recorrer toda el área, se cuenta el número de células en unos cuantos
campos microscópicos seleccionados al azar. Si el diámetro del campo microscópico se mide
con micrómetro objetivo, se puede calcular fácilmente el área, entonces el número de campos
en 1 cm2 se multiplicará por el promedio del número de células por campo y después por
100 (si se vierte 0.01 mL) el resultado será igual al número de células por mililitro.

Desarrollo Experimental
Se utilizaron dos soluciones contenedoras de Acidithiobacillus Ferrooxidans, las cuales se
podía observar que se encontraban a distintas concentraciones. Al encontrarse frías las
soluciones, estas fueron calentadas durante un corto periodo de tiempo para ser llevadas a
temperatura ambiente.
Se utilizó una cámara de recuento para el conteo de este tipo de microorganismos, en la cual
se colocó una gota de la solución y se procedió a llevarla al microscopio.

Figura 1. Cámara de recuento

Ya en el microscopio, se procedió a realizar los conteos de microorganismos
correspondientes a cada muestra, identificando en los 16 cuadros pequeños de cada cuadro
grande el número de bacterias que se pudieran contar en ese momento.
Se lavó de forma cuidadosa la cámara y se procedió a repetir el procedimiento anterior una
vez más.
Resultados

Figura 2. Vista a microscopio de microorganismos de la muestra

Tabla 1. Resultados del conteo de Microorganismos en placa

Muestra Conteo 1 Conteo 2
Diluida 7 10
Concentrada 8 52

Análisis de Resultados
Se puede observar a partir de la tabla 1 que el conteo de microorganismos para ambos conteos
realizados para ambas muestras es diferente, esto debido a que los microorganismos siempre
se encuentran en movimiento por lo que es de esperarse no contar la misma cantidad en
cualquier momento, siempre estará cambiando el número de microorganismos que se estarán
contando.
Como se menciona en la introducción, los factores como el pH, temperatura, medios de
cultivo, son aspectos que afectarán en la cantidad de bacterias que podrán ser observadas en
el microscopio.
Cabe señalar que todos los conteos deben ser realizados únicamente por una persona, ya que,
como se mencionó anteriormente, las bacterias se encuentran en movimiento por lo que cada
persona siempre obtendrá un número distinto de bacterias contadas.
Además, las bacterias observadas “Acidithiobacillus Ferrooxidans” se encuentran en
depósitos de pirita, las cuales se encargan de metabolizar el hierro y el azufre, produciendo
ácido sulfúrico.

Conclusiones
 El conteo de MO a partir de cámaras de recuento es un método económico y sencillo
el cual es utilizado cotidianamente para la identificación de bacterias.
 La Acidithiobacillus Ferrooxidans es la principal bacteria utilizada para la extracción
del cobre de la pirita.

Bibliografía
 Medrano Roldán, H. y Galán Wong, L. J. (editores), Biotecnología de minerales. Consejo de
Ciencia y Tecnología del Estado de Durango COCYTED, ISBN-968-5184-08-9. México, 2000.
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U4b_MedicionCrecimiento_19837.pdf
Consultado 20/03/19
 https://es.wikipedia.org/wiki/Conteo_bacteriano Consultado 20/03/19