INFORME

FACULTAD DE CIENCIAS 2
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

INFORME 2: TINCIÓN GRAM EN BACTERIAS

PROFESOR:

Juscamaita Morales, Juan Gabriel

MESA: “2“
INTEGRANTES:

20161425 – Arancel Aguirre, Yadira

20161431 – Caceda Lara, Nicoll Kiara
20161343 – Crespo Caballero, Marelly Grey Gabriela
20161446 – Jimenez Arotinco, Maria Lourdes
AULA: LABORATORIO B-2
TURNO: Lunes de 11am-1pm (B*)
I.INTRODUCCIÓN
En el mundo que nos rodea, existen organismos que el ojo humano es incapaz de
ver. Estos son llamados microorganismos, seres con tamaños que varían desde los
0.3𝜇𝑚 de diámetro a más. Afortunadamente el hombre encontró la manera de
observarlos gracias a la microscopia, aunque esto solo sirvió en un principio para ver
microorganismos pigmentados, pues su color añadía contraste y mejoraba la
visualización de las células. Aquellas células que carecían de pigmentación solo
fueron posibles de ver gracias al uso de colorantes. Desde 1770 se vienen utilizando
coloraciones simples, a partir de 1807 coloraciones compuestas en investigaciones
biológicas. Pero ¿Cómo logran teñir los colorantes? los colorantes penetran las
células por osmosis, dando contraste a estructuras biológicas que de por sí solas no
las tienen. De acuerdo a la reacción que ocurre, existen diferentes tipos de tinción:
Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del
mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción
diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un
colorante (Gram o Ziehl-Neelsen); tinción específica, cuando se utilizan anticuerpos
marcados con una molécula fluorescente para identificar una estructura celular en
particular (inmunocitoquímico). En esta práctica nos enfocamos en el uso de la
tinción diferencial, en particular la tinción de Gram, denominada así por el
bacteriólogo danés Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la base de su
reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram-
positivas y Gram-negativas. Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a
que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.

II.OBJETIVOS
 Demostrar a través de la técnica de tinción diferencial de Gram la existencia de
dos grupos principales de bacterias.
 Conocer los fundamentos químicos de la tinción de Gram.

III. RESULTADOS
I. TINCION DIFERENCIAL

Escherichia coli

Se observó estreptococos estas son

bacterias Gran negativa debido al
color básico que mantuvieron que fue
el cristal violeta.
Proteus
Se observó bacterias gram positivas y
gram negativas como los protozoos y
cadenas de bacilos esporulados.

YOGURT
Se observó estreptococos
termófilos, bacilos y diplococos. No
presentan movimiento

Salmonella
Se observó bacilos gram negativos sin
movimiento. No se pudo observar
movimiento debido al tratamiento
sometido.
IV.DISCUSIONES
Según el autor López Jácome (2014: 12) “Los principios de la tinción de Gram están
basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere
propiedades determinantes a cada microorganismo.” Las paredes celulares de los
microorganismos gram negativos y gram positivos presentan distinta composición,
llegando a coincidir en la presencia de peptidoglucano, el cual determina las
características tintoriales.

Santambrosio (2009: 3) “La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en

varias capas interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. La
pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más
delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior
compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas” La mezcla alcohol-
acetona destruye la membrana externa de las bacterias gram negativas haciendo que
pierdan el color cristal violeta. En cambio, la gruesa pared de peptidoglucano de las
gram positiva impide el paso de esta mezcla lo cual permite que se retenga el primer
colorante.

La muestra trabajada estaba rotulada como Escherichia coli la cual es reconocida

como un bacilo gram negativa, sin embargo la observación en el microscopio mostró
tanto microrganismos gram positivos como gram negativos. Esto nos indicó que el
nombre de la muestra era incorrecto.

En el yogur se observaron bacterias coloreadas de cristal violeta como el Streptococcus

thermophilus además de algunos diplococos, las cuales son microorganismos gram
positivos.

V. CONCLUSIONES
La tinción Gram es una prueba rápida que nos permite diferenciar dos clases de
bacterias: las Gram positivas y Gram negativas.

*Las bacterias Gram positivas se tiñen de violeta ya que el colorante se queda

atrapado en la capa gruesa de peptidoglucano que rodea a la célula.

*Las Gram negativas tienen una capa más delgada por esta razón no retienen el
colorante básico que es el violeta y se tiñen con safrina y observamos un color fucsia o
rojo.

VI. CUESTIONARIO
1.- ¿Bajo qué circunstancias la tinción diferencial de Gram podría resultar errática?

Pureza del colorante.- a mayor grado de impurezas mayor error y menor calidad de
tinción.

Concentración del colorante.- a mayor concentración mayor error en la tinción; igual

que a menor concentración.
El pH del colorante.- este es un factor fundamental ya que depende de las estructuras
que se desee observar para elegir el pH adecuado.

Conservación del colorante.- se debe conservarse en lugares frescos, secos, y

obscuros; envasados y etiquetados.

Técnica Empleada.- se deberá seguir rigurosamente paso a paso cada técnica de

tinción.

Temperatura.- en la mayoría de los casos se utiliza la temperatura ambiental pero si

existen algunas técnicas que requieran de temperatura adecuada.

Cantidad de la muestra.- deberá ser representativa y homogénea pero no muy

grande.

Realizar correctamente el frotis.- se debe fijarse bien para que cuando se les añada los
colorantes mordientes y decolorantes no arrastren a los microorganismos que se desee
observar.

Soluciones mordientes.- en ciertos casos son necesarios ya que actúan como fijadores
y ayudan a la fijación del colorante a las correspondientes estructuras.

Tiempos de Tinción.- es necesario que todas las sustancias se mantengan en la

preparación un tiempo preciso y variable según la tinción.

2.- Qué efecto traería reemplazar el lugol con otro agente oxidante.

El lugol actúa como un mordiente, que es una sustancia que incrementa la afinidad
entre la célula y el colorante, es decir, ayuda a la fijación del colorante en la
estructura de interés. Bajo la acción de un mordiente una célula de tiñe más
intensamente y es más difícil decolorarla. Ejemplos de mordientes son ácidos, bases,
sales metálicas y iodo. Si se reemplaza en lugol con otro agente oxidante, no existiría
ningún efecto ya que cumpliría la misma función de incrementar la afinidad del
colorante primario con la célula, formando complejos insolubles con este.

3.- ¿Podría Ud. Variar el colorante primario y el contraste obteniendo los mismos
resultados?

No, ya que el colorante primario es el cristal-violeta que cumple con la función de teñir
a todas las bacterias sin excepción de morado. La safranina que actúa de contraste
los tiñe de rojo luego del alcohol-acetona. Si estas varían, la tinción de Gram variaría
totalmente, ya que se vería todas las bacterias de color morado y no se podría
diferenciarlas.

4.- ¿Cuál es la influencia del pH en la reacción de Gram?

Varias son las teorías emitidas para explicar el mecanismo de la tinción de Gram.
Stearn (1923) basó la suya en una combinación química entre el colorante y las
proteínas de las bacterias, las proteínas y aminoácidos son cuerpos anfóteros, esto es,
tienen la facultad de reaccionar con ácidos y con bases, gracias a sus grupos amino y
carboxilo; en soluciones ácidas, reaccionan con los ácidos, y en soluciones alcalinas lo
hacen con las bases. De igual manera, comprobaron que la reacción de tinción de
las bacterias obedece en gran parte a su contenido proteínico; estos microorganismos
se conducen como cuerpos anfóteros, al combinarse con colorantes ácidos en
soluciones ácidas y con los básicos en medio alcalino. La combinación con ambos
tipos de colorante no se produce en el «punto isoeléctrico». Como los microorganismos
contienen más de una proteína, ese punto no tiene un valor preciso y definido, sino
que constituye más bien una gama o escala que comprende dos o tres unidades de
pH. Según Stern y Stearn, los microorganismos gram positivos tienen una escala
isoeléctrica de pH inferior a la de los microorganismos gram negativos; y, a base de sus
datos experimentales, deducen las siguientes conclusiones:

 Los microorganismos gram positivos pueden hacerse gram negativos al aumentar

la acidez.
 Los microorganismos gram negativos pueden hacerse gram positivos al aumentar
la alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes ácidos pueden hacerse
gram negativos por aumentar la alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes básicos pueden hacerse
gram negativos por aumentar la acidez.
 En la zona isoeléctrica característica de cada especie es muy escasa la tendencia
a retener cualquier colorante.

5.-Liste cinco ejemplos de bacterias Gram positivas y cinco de Gram negativas,

señalando su importancia.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

 Streptococcus sanguis. Causante de endocarditis, cuando ingresa al torrente

sanguíneo a través de lesiones en su hábitat, la boca y la mucosa dental.
 Clostridium tetani. Bacterias responsables de los tétanos, entran al cuerpo desde
el suelo por traumatismos en las extremidades.
 Bacillus antracis. Se trata de la conocida bacteria del ántrax, tanto en su
versión cutánea como en la pulmonar.
 Clostridium botullinum. Causante del botulismo clásico y el infantil, habita en el
suelo y en los alimentos mal conservados.
 Clostridium perfringes. Esta bacteria segrega toxinas que destruyen la pared
celular, y es responsable de las gangrenas gaseosas, la enteritis necrosante y la
endometritis.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

 Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y

meningocococemias, coloniza las vías respiratorias humanas y asciende a las
meninges por vía sanguínea.
 Neisseria gonorrhoeae. Conocidísima por ser la causante de la gonorrea,
común enfermedad de transmisión sexual.
 Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, está involucrada en las
llamadas “diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal, sepsis e
infecciones urinarias.
 Salmonella typhi. Bacteria responsable de la enfermedad conocida como
fiebre tifoidea, suele transmitirse por vía fecal-oral: contaminación de aguas,
mala disposición de excretas o higiene defectuosa.
 Salmonella enteritidis. Suele ocasionar enterocoitis y septicemia con abscesos si
llega a pasar del intestino a la sangre.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 López Jácome, LE. 2014. Las tinciones básicas en el laboratorio de

microbiología. Investigación en discapacidad 3(1): 12-13.
 Santambrosio. E. 2009. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología.
Tinción y observación de microorganismos. Universidad tecnológica nacional.