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Las bacterias ocupan diferentes vías metabólicas para obtener sus nutrientes y la
energía, casi todas las bacterias consumen algún tipo de carbohidrato generalmente
el mas utilizado por las bacterias es la glucosa, usan la vía oxídativa, fermentativa
o ambas.
Fundamento: Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos por la vía fermentativa
o por la vía oxidativa. Las bacterias anaerobias los fermentan; las facultativas
pueden fermentarlos o degradarlos oxidativamente; las aerobias estrictas sólo
pueden oxidarlos.
Para detectar si las bacterias utilizan los carbohidratos por la vía oxidativa o
fermentativa se utiliza el agar OF, que contiene agar, peptona y azul de bromotimol
como indicador de pH. Inicialmente el medio es de color verde (pH 7,1) y vira a
amarillo cuando el medio se acidifica (pH de 6 a 7,6) producto de la fermentación u
oxidación del carbohidrato.
Un tubo se cerrara su tapa de tal forma que quede floja con la intención de que entre algo
de oxigeno, al segundo tubo se le agregara 1.5-2ml de aceite mineral estéril y la tapa se
cerrara completamente, se incubarán durante 24h.
Procedimiento: para esta prueba se inoculan 2 tubos, ejemplo: si se quiere hacer la
prueba de OF glucosa, se inoculan dos tubos de OF glucosa; después de inocular los
tubos, a uno se le coloca un tapón de parafina con 1.5-2ml de aceite mineral esteril y se
rotula con la letra F y al otro no se le añade parafina y se le coloca la letra O. El tubo que
tiene la letra F mide la fermentación (en anaerobiosis porque tiene parafina) y el tubo con
la letra O mide la oxidación, no se coloca parafina, hay contacto con el oxígeno.
Interpretación de resultados:
Si el tubo de oxidación "O" se torna amarillo, pero el de fermentación "F" queda verde la
bacteria es una oxidadora, no fermenta ese carbohidrato
Si el tubo "O" permanece verde y el tubo "F" se torna amarillo: la bacteria fermenta pero
no oxida, es una fermentadora, una anaerobia estricta, no oxida.
Si ambos tubos quedan amarillos: bacteria anaerobia facultativa, oxida y fermenta el
carbohidrato
Si ambos tubos quedan verdes: bacteria inerte, no utiliza el carbohidrato por ninguna vía
metabólica
Cuando el tubo abierto es amarillo y el tubo con aceite es verde se interpreta como
reacción oxidativa y se reporta como: O
Procedimiento
Incubar un caldo con 12%de gelatina. Enfriar para comprobar la formación del gel.
Si se hidroliza la gelatina, el tubo permanece líquido cuando se refrigera.
La produccion de gelatinasa se usa como una ayuda taxonomica para la identificación y la clasificacion de
bacterias fermentadoras (ej. Enterobacterias) y no fermentadoras principalmente para identificar cultivos
puros.