“AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL”

UNIVERSIDAD PRIVADA” SAN JUAN BAUTISTA”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

CURSO:
BIOLOGIA
CICLO:
I
DOCENTE:
ECOS ESPINO JULIO CESAR

ALUMN@S:
ANDIA ATCO ISRAEL
CHOQUE ALLAUCCA VANIA
GAMBOA LOAYSA ESTEBAN
HUAMAN ECHEVARRIA MAURO
MANCHEGO PINTO KATIANA ISABEL
PARDO INJANTE CAMILA
VALENCIA ORDOÑEZ ISMAEL

TEMA:
BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN

FECHA DE ENTREGA:
19 DE NOVIEMBRE
ICA-PERÚ
2018
 INTRODUCCIÓN

Los biólogos de la década de 1940 aceptaban con dificultad el papel del ADN
como material genético, debido a su aparente sencillez químico. Se pensó que
el ADN era un simple polímero largo formado por sólo cuatro tipos de
subunidades parecidas químicamente entre sí.

En los años de la década de 1950, se estudió el ADN mediante la técnica de

difracción de rayos X, un método que permite determinar la estructura
tridimensional de una molécula a una resolución atómica. Los primeros
resultados de ésta técnica aportaron una de las primeras pistas que condujeron
a la estructura de Watson y Crick del ADN. Sólo cuando se propuso el modelo
de la estructura del ADN, resultó evidente la capacidad de esta molécula para la
replicación y almacenamiento de información (Alberts 4ta edición) (2).

Relacionado a su estructura se propuso dos propiedades de vital importancia,

primero, que la estructura es compatible con cualquier secuencia de bases y
segundo , que debido al emparejamiento de las bases , la secuencia de éstas en
una hebra determina por completo la secuencia de la otra.(bioquímica 5ta
edición).

Basándonos en los conocimientos adquiridos, tanto de su estructura como de

sus propiedades, hubo muchos planteamientos sobre cómo supuestamente
sería el proceso de replicación del ADN. Dentro de los más resaltantes se
encuentra el proceso de duplicación conservativa, según la cual una molécula
de ADN de la progenie estaría formada por dos cadenas de ADN recién
sintetizadas, mientras que la otra contendría las dos cadenas parentales
(Lehninger 4ta edición).

Esta hipótesis sería descartada gracias al experimento de Medelson y Sahl, los

cuales demostraron que el proceso de duplicación en sí es semiconcervativo.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 2

Este modelo es el que actualmente explica la duplicación del ADN (Lehninger
4ta edición). Pero esta búsqueda no quedo ahí, pues nacieron interrogantes que
propiciarían una investigación a más profundidad.

Además, una vez que se comprobó que el ADN era el material hereditario y se
descifró su estructura, lo que quedaba era determinar como el ADN copiaba su
información y como la misma se expresaba en el fenotipo. En el siguiente informe
se pretenderá describir puntualmente en que consiste el proceso “replicación y
duplicación del ADN”.

La replicación la explicaremos como se efectúan en procariotas o procarionte

que son las células sin núcleo celular definido, es decir, cuyo material genético
se encuentra disperso en el citoplasma, reunido en una zona denominada
nucleoide. Así mismo se explicará la duplicación en eucariotas.

Actualmente los principios que se conocen de la duplicación, se aplican en la

clonación del ADN, en terapia genética humana, en biotecnología, en PCR
(Reacción en cadena de la polimerasa), en ADN recombinante (Ingeniería
Genética), entre otras áreas.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 3

OBJETIVOS

1) OBJETIVO GENERAL

 Dar a conocer el proceso de duplicación y replicación del ADN en células

procariotas y eucariotas y comprendan las características y diferencias
entre ellas.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 4

 MARCO TEORICO

1. FORMACIÓN DE LAS HORQUILLAS DE REPLICACIÓN

a) Proceso y enzimas que intervienen.

i) En células procariotas y eucariotas. Cabe enfatizar que en los
procesos de duplicación tanto en procariotas como en eucariotas,
intervienen enzimas con funciones parecidas, las cuales forman un
complejo de síntesis en la horquilla de replicación llamada replisoma,
pero que se los abordaran con sus nombres respectivos en los dos tipos
celulares.
 Células procariotas: El origen de la replicación de E.coli , oricC,
consta de 245 pares de bases ,que contienen secuencias muy
conservativas entre los orígenes de replicación bacterianos. Las
secuencias clave son dos series de repeticiones cortas: tres
repeticiones de una secuencia de 13 pares de bases y cuatro
repeticiones de una secuencia de 9 pares de bases.
En la fase de inicio de la replicación participan al menos 9 enzimas o
proteínas diferentes. El componente clave en el proceso de inicio es la
proteína DnaA. Los pasos que proceden son los siguientes. Primero:
Un complejo formado por cuantro o cinco moléculas de proteína DnaA
se une a las cuatro repeticiones de 9 pares de bases en el origen.
Segundo:

A continuación el complejo reconoce y desnaturaliza sucesivamente el

ADN de la región de las repeticiones de 13 pares de bases, que son
ricas en A=T.Tercero: A continuación , la proteína DnaB se une a esta
región , en una reacción que requiere la proteína DnaC( el cual traslada
al DnaB a un punto cercano del origen de replicación) . Dos hexámeros
en forma de anillo de DnaB, uno en cada hebra del DNA , actúan como
helicasas, desenrollando el ADN de manera bidireccional y creando dos
horquillas de replicación potenciales.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 5

  Células eucariotas: En las levaduras se han identificado y estudiado
los orígenes de replicación, denominados secuencias de replicación
autónoma (ARS) o replicadores. Los replicadores de levadura abarcan
unos 150 pares de bases y contienen varias secuencias esenciales
conservadas. En todos los eucariotas, el inicio de la replicación requiere
un complejo de reconocimiento del origen(ORC) , que se une a varias
secuencias dentro del replicador .Otras proteínas como la CDC6 y la
CDT1 se unen al ORC y hacen posible el traslado de la helicasa MCM
en DNA cerca del origen de replicación, de forma similar al proceso que
ocurre en las células procariotas.

i) ¿Por qué empieza en las uniones adenina – timina?

La horquilla de replicación llamada también Replicón o Duplicón , es
fundamental para el inicio del proceso de replicación del ADN. El
¿cómo? Y ¿por qué? Se forma , es debido a que las secuencias ricas
en pares de bases de Adenina y Timina pueden ser desnaturalizadas
selectivamente , las cuales forman burbujas de cadena sencilla.Se
sabe también que los puentes de hidrógeno formados por la Adenina y
la Timina son mucho más débiles que los enlaces C-G.

b) Desenrrollamiento de la cadena.
i) ¿En qué se fundamenta la acción de la enzima Helicasa? (3)
La participación de esta enzima en el proceso de duplicación del ADN
consiste básicamente en la separación de las dos cadenas
complementarias. Pero ¿qué cualidades le permiten a esta enzima el
desarrollo de esta acción? La enzima Helicasa es un tipo de proteína
motora que para desplazarse a lo largo de la hebra del ADN durante la
duplicación se necesita de una serie de cambios conformacionales en su
estructura, sin embargo, si no existe ningún elemento que permita que
estos cambios sucedan en una secuencia ordenada, serán
perfectamente reversibles y la proteína se desplazará al azar hacia
adelante y hacia atrás a lo largo de la hebra poniendo en peligro el
proceso de duplicación. Pero al saber esto nace otra pregunta.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 6

 ii) ¿Cómo puede una proteína realizar cambios conformacionales
unidireccionales?
Parea hacer que el ciclo entero funcione en una sola dirección, este
resultado se puede conseguir acoplando uno de los cambios
conformacionales a la hidrólisis de una molécula de ATP unida a la
proteína. A causa de la elevada cantidad de energía libre que se libera
cuando se hidroliza el ATP ( o el GTP) , es muy poco probable que la
proteína unida al nucleótido sefra un cambio en sentido contrario.

iii)Requerimientos de la enzima Polimerasa para actuar

 Células Procariotas: Los trabajos iniciales sobre el ADN polimerasa I
definieron dos requerimientos básicos para la polimerización del ADN.
Primero , todas las ADN polimerasa requieren un molde y segundo , es
necesario un cebador , el cual es un segmento de cadena con un grupo
3’ –hidroxilo libre al cual pueden añadirse nucleótidos. Dicho de otra
manera , parte de la cadena nueva debe contar con un cebador , el cual
va a permitir actuar a la polimerasa.
 Células eucariotas: En las procariotas estos requerimientos son los
mismos.

iv)Intervención de la enzima topoisomerasa

 Células procariotas: La enzima DNA topoisomerasa II libera la tensión
torsional generada por el desenrrollamiento del ADN , actúa cortando
una hebra , la cual después es sellada.
 Células Eucariotas: La enzima realiza la misma función que en células
procariotas.

v) Estabilización de la burbuja de replicación por las proteínas SSB

Muchas moléculas de SSB se fijan de manera cooperativa al ADN de
cadena sencilla, estabilizando las cadenas separadas impidiendo su re
naturalización.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 7

2) SINTESIS DE ARN CEBADORES

El proceso de síntesis de ARN cebadores se da gracias a la enzima primasa,

la cual interviene en el proceso de duplicación discontinua. Pero el proceso va
a ser explicado en forma separada para ser más específica esta etapa,
aunque tenga mucha similitud.

i) Células procariotas: La síntesis de la hebra rezagada se realiza en cortos

fragmentos de Okasaki. Primero, la primasa (primasa DnaG) sintetiza un
cebador de ARN y, como en la síntesis de la hebra conductora , la ADN
polimerasa III se une al cebador de ARN y añade desoxirribonucleótidos.
ii) Células eucariotas: Al igual que en las bacterias, en las células
eucarióticas, hay varios tipos de ADN polimerasas y en esta etapa
interviene el ADN polimerasa alfa , que carece de actividad exonucleasa 3´
5’ , correctora de pruebas , lo que la hace inadecuada para la síntesis fiel
de ADN , debido a esto se piensa que la ADN polimerasa alfa solo
interviene en la síntesis de cebadores cortos para los fragmentos de
Okasaki de la hebra rezagada.

3) Síntesis Semidiscontinua del ADN

i) Células procariotas: La síntesis de los fragmentos de Okazaki en la hebra

rezagada pone en juego complejas actividades enzimáticas. La helicasa
DnaB y la primasa DnaG constituyen una unidad funcional dentro del
complejo de replicación, denominado primosoma. La ADN polimerasa III
usa un juego de sus subunidades núcleo (la polimerasa núcleo) para la
síntesis continua de la hebra conductora, mientras que el otro juego de
subunidades núcleo circula entre un fragmento de Okasaki y el siguiente
sobre el bucle formado por la hebra rezagada. Cuando se ha completado
la síntesis de un fragmento de Okasaki, la replicación se detiene y las
subunidades núcleo del ADN polimerasa III se disocia de su abrazadera
beta deslizante y se asocian con la siguiente abrazadera. Ello inicia la
síntesis de un nuevo fragmento Okasaki.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 8

 Los ARNs cebadores dejan libre su extremo 3’donde tiene un grupo
OH(oxhidrilo)sobre el que la ADN polimerasa III puede incorporar
nucleótidos de ADN.

ii) Células eucariotas: Los cebadores son alargados a continuación por la

ADN polimerasa delta . Esta enzima está asociada a una proteína , que lo
estimula , denominada antígeno nuclear de proliferación celular(PCNA) ,
que se encuentran en grandes cantidades en el núcleo de las células en
proliferación. La ADN polimerasa delta tiene actividad exonucleasa 3´a 5’
correctora de pruebas y parece que realiza la síntesis de las hebras
conductora y rezagada formando un complejo análogo al de la ADN
polimerasa III dimérica bacteriana.

iii)¿Por qué el ADN cebador deja libre su extremo3’?

Primero deberíamos hablar de los telómeros, A diferencia de los
organismos procariotas que tienen un genoma circular, los organismos
eucariotas poseen cromosomas lineales en los cuales se presenta el
problema de su acortamiento durante la replicación debido a que al eliminar
el cebador de los fragmentos de Okazaki del extremo 5' de la cadena
retardada del telómero del nuevo cromosoma lineal se produce un hueco
que no puede ser rellenado por acción de la ADN polimerasa, puesto que
solo funcionan en dirección 5' - 3' y necesitan un extremo 3'–OH, y en el
final del cromosoma no hay espacio para regenerar el ARN cebador
necesario para donar el extremo 3'–OH y completar la síntesis del último
fragmento de Okazaki

a) Duplicación Continua (Adelantada)

Se realiza sobre la cadena del ADN a la que se ha incorporado un solo ARN
cebador, esta cadena de ADN se denomina líder o adelantada. La ADN
polimerasa III incorpora desoxirribonucleotidos trifosfatados en sentido 5’ --
>3’. Los nucleótidos incorporados son complementarios a los del ADN
molde. Luego cataliza la formación de enlaces fosfodiester, en el proceso
se libera 2 fosfatos inorgánicos. La nueva cadena se sintetiza de forma
continua.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 9

 i) Función de desoxirribonucleotidos trifosfatados La energía para el
proceso de replicación la proveen los mismos desoxirribonucleótidos
trifosfatados
ii) Enlaces fosfodiester, origen y función Tanto en el ADN como en el ARN,
el enlace fosfodiéster es el vínculo entre el átomo de carbono 3' y el
carbono 5' del azúcar ribosa. Los grupos fosfato del enlace fosfodiéster
tienen una alta carga negativa. Debido a que los grupos fosfato tienen
una constante de equilibrio cercana a 0, su carga es negativa con un pH
7. Esta repulsión obliga a los fosfatos a posicionarse en los lados
opuestos de las hebras de ADN y está neutralizada por las proteínas
histonas, iones metálicos y poliaminas.
iii)Fosfatos inorgánicos, en el proceso de duplicación continua Es una de
las enzimas que es capaz de catalizar la síntesis de ADN. Posee una
sola cadena polipetídica de 109 kDa. Contiene un átomo de zinc como
cofactor. Esta enzima sintetiza en la dirección 5´-->3´.

 Todas las ADN polimerasas poseen una actividad exonucleasa; esto

corresponde a la actividad de hidrolizar el ADN de hebra simple,
removiendo deoxirribonucleotidos terminales desde el extremo 3´
(actividad exonucleasa 3´-->5´) o desde el extremo 5´ (actividad
exonucleasa 5´--> 3´).

b) Duplicación Discontinua (Retrasada o Retardada)

Se realiza sobre la cadena del ADN en la que se han incorporado varios
ARNs cebadores. Esta cadena del ADN se denomina retrasada 5’-->3’. Los
nucleótidos incorporados son complementarios a los del ADN molde. Luego
se cataliza la formación de enlaces fosfodiester y en el proceso se libera
pirofosfato.

i) ¿En que afecta la presencia de varios ARNs cebadores en la

horquilla?
El Cebador (o primer), que proporciona el – OH libre en 3’. La síntesis
del cebador la realiza una ARN polimerasa llamada primasa. Posterior/,
este cebador se elimina del ADN formado.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 10

 Por otro lado la ADN polimerasa III no lee las secuencias de ADN en
sentido 5’ --> 3’. Por tanto, de las 2 hebras molde de las dos horquillas,
la que está orientada en sentido 3’ --> 5’ es copiada de manera continua
y la nueva réplica formada en sentido 5’ --> 3’ se llama hebra conductora
o líder. Pero la otra hebra antiparalela está orientada en sentido 5’ --> 3’
y no puede leerla.

Este problema se soluciona abriendo porciones de ADN lo

suficientemente grandes para que el ez pueda leerlas en sentido
contrario, sintetizando pequeños fragmentos de ADN (fragmentos de
Okazaki) que crecen en sentido 5’ --> 3’. Estos fragmentos, después, se
unen, por una ADN ligasa, para formar otra réplica (hebra retardada) que
tarda más en sintetizarse. Los pasos para formar la hebra retardada son
los siguientes: Comienza la replicación cuando una ARN polimerasa
(primasa) fabrica el ARN cebador o primer.

ii) El pirofosfato, origen y función en la duplicación discontinua

El pirofosfato es la forma más simple del fosfato siendo su función en las
reacciones de las protocélulas.

iii) Acción de los fragmentos de Okazaki Constan de 1000 a 2000

nucleótidos. Cada fragmento de Okazaki requiere un ARN cebador
para iniciar la síntesis de una secuencia de nucleótidos. Siendo su acción
la de sintetizar de manera continua La hebra conductora Posteriormente,
tras la eliminación de los ARN cebadores, los fragmentos de Okazaki se
unen gracias a la acción de las enzimas ligasas.

4) EXPULSIÓN DE ARN CEBADORES

La síntesis del nuevo fragmento de Okazaki termina por chocar con el
fragmento de Okazaki aguas abajo, el cebador de ARN que se utilizó para
iniciar el posterior fragmento de Okazaki se elimina por la actividad
exonucleasa 5 'a 3' del ADN polimerasa I con llenado simultáneo de la brecha
con los desoxirribonucleótidos (traducción nick). Por último, al lado de los
fragmentos de Okazaki se unen por la ADN ligasa utilizando NAD + como
cofactor de la energía.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 11

 i) ADN polimerasa I
Esta enzima cuenta con tres actividades. Tiene actividad polimerasa, de
síntesis en dirección 5’a 3’. Una actividad 3’a 5’ exonucleasa, remoción de
nucleótidos erróneos o conocida como proofreading o revisora. Y
finalmente, una actividad 5’a 3’ exonucleasa, que a partir de un nick
(rompimiento del enlace entre dos nucleótidos vecinos) resintetiza una
porción de DNA removiendo la ya existente. Esta enzima no lleva a cabo el
proceso de replicación. Estaría involucrada en la síntesis de los primers.

ii) “Corrección de pruebas de imprenta”

Una vez aparezca el ADN polimerasa reemplaza al ARN cebador y llena
todos los huecos en la hélice discontinua

iii)Fases para el cambio de ARN cebador a ADN polimerasa

En este momento actúa una ribonucleasa que elimina el ARN cebador que
está entre dos fragmentos de Okazaki. El hueco que queda es rellenado
por la ADNpolimerasa. El proceso continuaría con la colocación de un
nuevo ARN cebador, otro fragmento de Okazaki, eliminación del ARN
cebador y llenado del hueco por la ADN -polimerasa. Y así sucesivamente.
La hebra que se sintetiza de esta manera es la retardada y crece en sentido
3'--5'.

5) Síntesis de Cromatina

i) ¿Qué topoisomerasas hacen que las moléculas de ADN adquieran

forma helicoidal?
Al producirse la duplicación, el ADN adquiere cierto grado de
superenrollamiento. Imaginemos que la molécula de ADN es como una
bandita elástica, a la cual le conferimos vueltas alrededor de su eje
longitudinal. Si ahora tomamos uno de sus extremos y separamos cada
una de sus partes veremos que, por delante de donde se produce la
separación, la bandita adquirirá una mayor tensión, plegándose sobre sí
misma.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 12

 Lo mismo ocurre con la molécula de ADN, si la Helicasa separa las
cadenas delante de donde se está produciendo la replicación aumentará,
en forma más que considerable, la tensión de la molécula. Para evitar
esto, las topoisomerasas cortan la doble hélice, rotan el ADN y vuelven a
unirlo, evitando así que aumente la tensión por delante de la horquilla de
replicación. En consecuencia, encontraremos a las Topoisomerasas por
delante del lugar donde se está produciendo la duplicación.

ii) Cromatina como estructura estable, compleja y funcional

La cromatina de las eucariotas es una compleja escructura de ADN y
proteínas. Cuando sus células no se dividen, la larga cadena está
desplegado en el nucleoplasma y, en ella hay arrollamiento situadas como
las cuentas de un rosario. Estas cuentas Estas cuentas llamadas
nucleosomas , están formadas por un modulo central de 8 proteinas
básicas (histonas)envueltas por el arrollamiento del ADN básico.

iii)Enzimas y proteínas que intervienen en el proceso de duplicación

que tienen similares actividades

Enzimas y proteínas que Enzimas y proteínas que

intervienen-células procariotas intervienen-células eucariotas
ARN PRIMASA Polimerasa Alfa(E)

Polimerasa III Polimerasa Delta (E )

Polimerasa I Polimerasa Epsilon( E )

DnaC CDC6( P), CDT1 (P)

Topoisomerasa II O DnaG Topoisomerasa

DnaA ORC(Complejo)

DnaB( HELICASA ) HELICASA MCM (helicasa

replicativa en forma de anillo)

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 13

6) TECNOLOGÍAS BASADAS EN LOS PRINCIPIOS DE LA DUPLICACIÓN
DEL ADN
2.1 La gel-electroforesis
El problema de encontrar, separar y analizar los fragmentos de ADN
correspondiente a un gen especifico se logró resolver sobre las bases de los
estudios Linus Pauling que demostraron que las moléculas migran a distintas
velocidades hacia los polos magnéticos: se colocan porciones de ADN sobre
un gel de agarosa y se les permite que migren hacia los polos del campo
visibles en una película de rayos X como el código de bandas de un producto
en el supermercado.
Esta técnica permite tratar con bajas concentraciones de ADN, de hasta 100
nanogramos y su objetivo es, mediante un método bioquímico basado en
reacciones enzimáticas analizar de forma rápida la variabilidad genética que
se puede encontrar en una población determinada. La práctica de la
electroforesis de enzimas en gel aplica la afirmación teórica de que el
producto de un gen, será una proteína que tendrá actividad enzimática.
El método consiste en obtener las enzimas del material que se desea conocer
empaparlas en papel secante, e introducir estos papeles en el gel.
Posteriormente habrá que someterlo a la electroforesis para lograr la
migración de las proteínas que será diferencial dependiendo de la carga
eléctrica de la proteína.

2.2 ADN recombinante

Esta técnica permite aislar un gen de un organismo, para su posterior
manipulación e inserccion en otro diferene. De esta manera podemos hacer
que un organismo animal, vegetal, bacteria, hongo, o un virus, produzcan una
proteína que le sea totalmente extraña.
Se emplea normalmente para la producción de proteínas en gran escala, ya
que podemos hacer que una bacteria produzca una proteína humana y lograr
una superproducción.
De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano y
se lo )"pegamos" al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que regula
la fabricación de insulina, lo que haríamos al ponérselo a una bacteria es
"obligar" a ésta a que fabrique la insulina.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 14

 Como las bacterias se multiplican muy rápidamente y pueden expresar
grandes cantidades de proteínas, es posible lograr una sobreproducción de
la proteína deseada. A esto justamente se dedica la biotecnología, es decir
a la utilización de organismos vivos o de sus productos con fines prácticos.

El desarrollo de la tecnología del ADN recombinante fue posible gracias a

varias líneas de investigación el conocimiento de las enzimas de restricción
la replicación y reparación de ADN la replicación de virus y plásmidos la
síntesis química de secuencias de nucleótidos.

2.3 Vectores

Cuando se pretende que las “factorías” biotecnológicas (o una célula)

produzca un material específico, debe dársele la orden específica, esto es
proveerle de los genes necesarios. Para ello se debe agregar a su ADN
natural un complemento génico (previamente determinado y aislado), lo que
es posible por medio de un vector o transportador.

Estos vectores permiten obtener múltiples copias de un trozo específico de

ADN, lo que proporciona una gran cantidad de material fiable con el que
trabajar. El proceso de transformación de una porción de ADN en un vector
se denomina clonación.

2.4 Tecnica de la PCR

También existen métodos para amplificar una determinada secuencia o

fragmento de ADN. La más conocida es la técnica de la reacción en cadena
de la polimerasa PCR. Así se consigue multiplicar un determinado fragmento
de ADN millones de veces para poder tener una cantidad suficiente para
estudiarlo. Sin esta técnica serían imposibles los estudios de ADN para el
reconocimiento de la paternidad o en caso de delito, pues la cantidad de
ADN presente en las células es tan pequeña, del orden de picogramos, que
se necesitaría una gran cantidad de material celular para tener una cantidad
apreciable de ADN.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 15

 Por su lado, para la amplificación del gen, los biotecnólogos cuentan con dos
procedimientos que son hoy en día los más usados: El logrado por E.M.
Southern en 1975, comienza con la separación del ADN digerido por
enzimas de restricción, los fragmentos resultantes se separan por tamaño
mediante la gel-electroforesis y luego se transfieren a un filtro. El ADN
adherido se desnaturaliza (sometiendo las doble cadenas de ADN a alta
temperatura lo que rompe los puentes hidrogenados que las mantienen
unidas) y se hibrida (o deja que se ligue) exponiéndolo a sondas radiactivas,
lo que permitirá detectar por rayos X los fragmentos de interés para su
purificación y duplicación en procedimientos de estudios o manipulación.En
1988 estuvo disponible un nuevo método la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR), ideada en 1983 por Kary Mullis. Éste permite
mecánicamente, la amplificación de genes en grandes cantidades a partir de
muy poco ADN. El sistema implica la adición de un cebador corto
(unoligonucleótido) en cada extremo de la secuencia elegida de ADN,
separando las dos cadenas de la doble hélice por calentamiento y
exponiéndolas a un ADN polimerasa que reconoce a los cebadores
dispuestos a cierta distancia entre sí en lados opuestos de la cadena y
duplica el número de cadenas de ADN en la muestra. Esta enzima es
obtenido a partir de una purificación de una bacteria que prospera en las
elevadas temperaturas de las aguas termales y que no se desnaturaliza por
temperatura cuando el ADN seleccionado lo es. De este modo en la PCR,
ambas cadenas de ADN se copian simultáneamente y si el procedimiento se
repite unas veinte veces, se obtendrán un millón de copias a partir de un solo
fragmento original.

Todo esto ha servido para el desarrollo de la ingeniería genética, ya que

aparte de conocer los aspectos moleculares más íntimos de la actividad
biológica, se han encontrado numerosas aplicaciones en distintos campos
de la industria, la medicina, la farmacología, la agricultura, la ganadería, etc.

2.5 Biochips

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 16

 Los últimos avances en biología molecular, especialmente en genética y
genómica, ha llevado a la aparición de numerosas técnicas experimentales.

Entre estas herramientas destacan los biochips, que permiten conocer

mutaciones genéticas en los pacientes. De este modo, la comunidad
científica dispondrá del material adecuado para afrontar el reto que se le
plantea tras haberse completado la primera fase del Proyecto Genoma:
estudiar la función de los genes, las diferencias genéticas individuales y su
incidencia en el desarrollo de las enfermedades. Estos biochips son
dispositivos miniaturizados en los que se pueden depositar decenas de miles
de sondas de material genético conocido en posiciones predeterminadas,
constituyendo una matriz.

En los estudios, se ponen en contacto los biochips con material genético

marcado, obtenido de una muestra de un paciente o experimento. En ese
momento, generan un patrón de señales particular cuya lectura se realiza
con un escáner y posteriormente se interpretan con un ordenador.

1. APLICACIONES DE LA INGENIERÍA GENÉTICA

La aplicación de las técnicas utilizadas por la Ingeniería Genética ha

permitido elevar la calidad de vida del ser humano. Los organismos
transgénicos han pasado a ocupar una posición central en la biotecnología
moderna, porque permiten hacer modificaciones muy específicas del
genoma que vale la pena analizar con detalle, debido a sus importantes
aplicaciones presentes y futuras.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 17

 3.1 Obtención de proteínas de interés médico y económico

 Antibióticos
 Enzimas
 Hormonas: insulina, hormona del crecimiento, eritropoyetina…
 Vacunas
 Proteínas sanguíneas: seroalbúmina, factores de coagulación…

3.2 Mejora genética de vegetales y animales para obtener una mayor

producción y mejor calidad nutricional

Con el mejoramiento genético de los vegetales, se espera conseguir:

 Mayor adaptación a diversos ambientes.

 Mejores características agronómicas (resistencia, desgrane, buena
cobertura, etc).
 Resistencia a plagas y enfermedades
 Resistencia a la sequía, temperaturas bajas o altas, etc.

Para incrementar la calidad de los productos se persigue:

 Alto valor nutritivo (proteínas y vitaminas).

 Mayor coloración, sabor y/o tamaño de los frutos.
 Resistencia al transporte y almacenamiento.
 Reducción de la cantidad de ciertas sustancias indeseables en los
productos, etc.

3.3 Obtención de plantas clónicas para cultivos

La clonación de vegetales en un proceso técnicamente sencillo debido a que

los vegetales tienen la capacidad de generar (en condiciones muy
especiales) todo un organismo completo a partir de pocas células
completamente diferenciadas. Los pasos a seguir para la obtención de

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 18

 plantas clónicas son: Se aíslan una o diversas células de cualquier parte de
la planta (especialmente las hojas).Se cultivan en el laboratorio las células
hasta que se desarrolla una planta adulta.

3.4 Obtención de "bioinsecticidas", animales y plantas capaces de

destruir a otros seres vivos que se alimentan de los cultivos

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 19

3.5 Obtención de animales y vegetales transgénicos

 Animales

-obtención de órganos animales (cerdos) con genes humanos para no ser

rechazados en trasplantes.

-Animales con carnes y huevos con menos colesterol y grasas

-Pollos sin plumas

 Vegetales

-Resistentes a insectos: maíz y algodón con un gen que produce una toxina
para orugas y escarabajos.

-Resistentes a herbicidas: soja, algodón, maíz, resisten a altas

concentraciones de herbicidas que se echan en los campos para erradicar
malas hierbas.

-Resistentes a condiciones ambientales: frío, sequía, alta salinidad, etc.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 20

 3.6 Secuenciación de ADN

Secuenciar ADNs es analizar la composición de un fragmento de ADN para

saber qué genes tiene y qué producen esos genes; esto es lo que se está
haciendo en el Proyecto Genoma Humano.

3.7 Terapias Génicas

Consisten en manipular genéticamente células enfermas para que ellas

mismas puedan producir las proteínas cuya falta o mal funcionamiento
provoca la enfermedad: con la ayuda de un vector adecuado se introduce el
gen correcto y se integra en el ADN de la célula enferma Las enfermedades
hereditarias provocadas por la carencia de una enzima o proteína son las
más idóneas para estos tratamientos. Pero también aquellas en las que no
importa demasiado el control preciso y riguroso de los niveles de la proteína
cuya producción se pretende inducir mediante manipulación genética.

Se trata normalmente de enfermedades monogénicas, originadas por la

alteración de un único gen recesivo anómalo y en las que basta la mera
presencia del producto génico para corregir el defecto.

Una de las principales vías de investigación actuales es la de marcar

genéticamente a las células tumorales de un cáncer para que el organismo
las reconozca como extrañas y pueda luchar contra ellas.

-Cáncer: melanoma, riñón, ovario, colon, leucemia, pulmón, hígado,

próstata…

-Fibrosis quística

-Hipercolesterolemia

-Hemofilia

-Artritis reumática

-Diabetes

-SIDA

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 21

 CULTIVOS TRANSGÉNICOS

 Alfalfa Espárrago Maíz Soja

 Algodón Fresa Manzana Tabaco
 Arroz Girasol Melón Tomate
 Berenjena Guisante Patata Trigo
 Centeno Lechuga Pepino Uva
 Ciruela Lino Pimiento Zanahoria.

4- VENTAJAS E INCONVENIENTES

4.1 Ventajas

El principal avance de la Ingeniería Genética consiste en la capacidad para

crear especies nuevas a partir de la combinación de genes de varias
existentes, combinando también por lo tanto sus características.

Cultivos con genes de insectos para que desarrollen toxinas insecticidas o

tomates con genes de pez para retrasar la marchitación, han dejado hace
tiempo de ser ciencia-ficción para constituir una realidad en nuestros días.

Permitir el cultivo de hortalizas en áreas desérticas hasta ahora estériles o

aumentar el tamaño de los frutos cultivados son algunos de los adelantos
que la utilización de este tipo de técnicas puede aportar a la Humanidad, con
los logros que supone hacia la erradicación del hambre en el Mundo. Lo que
no se ha definido todavía es cómo compatibilizar estos objetivos con los
intereses económicos de las empresas de biotecnología que los desarrollan.

Gracias a la ingeniería genética, los científicos pueden hacer ciertas

combinaciones entre genes de diferentes especies, para así solucionar
problemas y mejorar el rendimiento económico-comercial de las
explotaciones. Se pueden buscar curas a enfermedades genéticas para que
las nuevas generaciones nazcan más sanas.

Al tomate por ejemplo se le ponen genes antisentido (en sentido inverso a

un gen concreto) para así retrasar el proceso de reblandecimiento. Gracias

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 22

 a esto, la ciencia ha conseguido que se cultiven plantas con mayor tolerancia
a la sequía o protegidos frente a virus.

En algunos cultivos, se han puesto genes de bacterias para que desarrollen

proteínas insecticidas y reducir el empleo de insecticidas. También se
pueden insertar genes humanos responsables de la producción de insulina
en células bacterianas para obtener insulina de gran calidad a bajo coste.
Estas células pueden producir mucha cantidad ya que se reproducen a una
gran velocidad.

4.2 Inconvenientes

Los expertos advierten que detrás de estas mejoras y nuevas aplicaciones

se esconden también riesgos y peligros de notable importancia. Como
sucede siempre, las desventajas provienen o pueden proceder del mal uso
de las técnicas mencionadas, lo cual es motivo de preocupación por los
riesgos e implicaciones que pueden derivarse.

A ello ha dado respuesta el Comité Internacional de Bioética de la Unesco

fijando unos objetivos que pueden concretarse en dos.

a) evitar aspectos del progreso que atenten contra la dignidad humana

b) que las posibilidades científicas no generen peligrosidad por falta de

definiciones éticas

Los criterios para evitar dichos inconvenientes establecen una serie de

limitaciones por motivos ecológicos, sanitarios, morales, sociales, políticos...
y en concreto se trata sobre todo de la salvaguarda de la dignidad y los
derechos humanos, de no dar posibilidad a la discriminación social ni
ideológica de evitar desastres ecológicos y de impedir el desarrollo o
aparición de enfermedades que pudieran ser incontrolables.

Uno de estos peligros es el hecho de que detrás de los proyectos de

manipulación genética están las compañías multinacionales muy
preocupadas por el interés económico.

También pueden “contaminar” otras plantas no transgénicas.

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 23

 Pueden llegar a ser cancerígenas en el caso de ser consumidos por sujetos
proclives o en un estado inmunológico deficiente. No obstante esto es una
hipótesis pero que muchos médicos que están en contra de los alimentos
transgénicos lo afirman. Puede producir alergias, algo que preocupa mucho
a los productores de estos alimentos. Puede ser debida al material genético
transferido, a la formación inesperada de un alérgeno o a la falta de
información sobre la proteína que codifica el gen insertado.

7) CONCLUSIONES
 La duplicación se origina en muchos sitios en los eucariotas , a diferencia
de los procariotas, que solo se da en uno.
 En los eucariotas la duplicación es bidireccional , a diferencia de los
procariotas , que puede ser uni o bidireccional.
 La velocidad de duplicación en eucariotas es menor , a diferencia de los
procariotas.
 Los fragmentos de Okasaki en eucariotas están conformados por 1000 a
2000 nucleótidos, mientras que en procariotas están formados por 200.
 El ARN cebador en eucariotas está conformado por 9 nucleótidos ,
mientras que en procariotas lo están en 50 nucleótidos.
 En los procariotas no hay dificultad para sintetizar su ADN debido a que
es circular, pero en los eucariotas si, debido a ello cuentan con una
secuencia especial, incorporado a su telómero. (esta secuencia controla
la proliferación celular).
 El proceso de duplicación se da en la Fase S del ciclo celular, cuando el
ADN se encuentra como cromatina. Después para el momento de la
división celular , su condensación es máxima ( los cromosomas )

BASES MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN 24

BIBLIOGRAFIA
 https://es.khanacademy.org/science/biology/dna-as-the-genetic-
material/dna-replication/a/mode-of-dna-replication-meselson-stahl-
experiment
 https://www.ecured.cu/Replicaci%C3%B3n_del_ADN
 https://es.khanacademy.org/science/biology/dna-as-the-genetic-
material/dna-replication/a/molecular-mechanism-of-dna-replication
 http://www.edu.xunta.gal/centros/iesriocabe/system/files/u1/T_207_Gen_
_tica_molecular_Prueba.pdf

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