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E-mail: daniremonatto@gmail.com
ABSTRATO
O desempenho de uma lipase comercial de baixo custo (Eversa® Transform), foi investigada nas reacções de transesterificação de
ésteres metílicos de ácido gordo de produção (FAME). A fim de reduzir os custos da produção industrial de biodiesel enzimática, a enzima
foi usada, na sua forma solúvel, livre. O óleo de soja foi empregue para a produção de FAME. FAME rendimentos tão elevadas como
95,8% foram alcançados usando 2,5% em peso de água, 1,5 equivalente de metanol e 1% em peso Eversa® transformar o conteúdo de
enzima em 16 h de reacção. Depois, o aumento de escala de laboratório de biodiesel productionwas estudado, aumentando 6 vezes a
reacção de produção FAME. O processo enzimático de biodiesel descrito neste estudo parece ser uma alternativa promissora para o
processo tradicional de biodiesel e pode contribuir para fazer o biodiesel enzimática viável.
1. INTRODUÇÃO
Actualmente, a produção em grande escala do biodiesel tem sido baseada principalmente em catálise homogénea, alcalino. No entanto, a
produção biotecnológica de biodiesel com lipases tem recebido crescente atenção nos últimos anos e está passando por um rápido
desenvolvimento (Ghaly et al., 2010). Em comparação com a produção catalisada-álcali convencional, o processo enzimático é
considerado um “percurso verde”, porque é menos intensivo em energia e também é altamente selectivo, produção de um produto de alta
pureza com menos operações de jusante (Akoh et ai, 2007;. Nielsen et al, 2008;.. Xu et al, 2011). Além disso, o processo enzimático é
muito tolerante com a teores de água elevados de ácido presentes nos óleos de resíduos e aumenta o rendimento do biodiesel, ao evitar
a formação típica sabão devido a transesterificao alcalina (Dizge et al.,
2009). O uso de lipases líquidos para a produção de FAME pode fazer todo o processo de custo-eficiente, mais
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competitiva e sustentável. lipases de líquidos pode ser fabricado e vendido a um preço muito mais baixo (30-50 vezes inferior) e também pode
ser reutilizado após recuperação a partir da fase de glicerina (Cesarine et al., 2013). Neste contexto, o presente trabalho pretende contribuir
para construir uma plataforma para a produção de biodiesel explorando o uso de uma lipase comercial solúvel de baixo custo. Performance de Eversa®
Transform lipase (a partir da Novozymes) foi investigada para a produção de FAME usando óleo de soja.
2. EXPERIMENTAL
ensaios em sistema fechado: As reacções enzimáticas foram realizadas utilizando um agitador incubadora horizontal (New Brunswick Scientific -
Excella E25), na qual um Erlenmeyer de 250 mL de capacidade fechado com uma tampa foi colocada. A mistura de reacção consistiu em óleo de
soja (soja, São Paulo, Brasil), 0,5-1% em peso Eversa® Transform solução de lipase (em peso total de matéria-prima) (gentilmente fornecida pela
Novozymes, Dinamarca) e a adição de água de 2,5% em peso (relativamente ao peso total de matéria-prima). Metanol (MeOH) usado foi de 1,5
equivalentes (EQV, com base na reacção estequiométrica), adicionado por passos (0,25 equiv de cada vez) em 35 ° C e 250 rpm. As amostras
foram tomadas a partir da mistura de reacção em momentos determinados, centrifugadas (3500 rpm / 10 min) e analisou-se o sobrenadante.
Ácido gordo livre (FFA) determinação: Para a determinação de FFA, as amostras foram pesados para um balão de Erlenmeyer e
dissolveram-se em etanol (40 mL). Indicador (0,5 mL de 1 peso% fenolftaleína em etanol) foi adicionado, e a solução titulada com KOH
aquoso 0,1 M a persistência da cor púrpura.
determinação FAME: O teor de FAME foi determinada por cromatografia gasosa (GC Shimadzu
2010), equipado com FID, auto-injector AOC-20i e uma coluna capilar RTX - Wax (30 mx 0,25 mm x 0,25 mm) de série
1208976. As condições de operação empregues estavam em conformidade com 14103 (2003 método EN) ( Comité Europeu de
Normalização ).
Monoacilgliceróis (MAG), diacilgliceróis (DAG) e triacilgliceróis (TAG) determinação: O (MAG), (DAG) e o conteúdo (TAG) foi
determinado por Cromatografia Gasosa (GC - Agilent Technologies 7890A) com automática na coluna e detector de ionização de
chama (FID) a injecção de 1 mL de volume de amostra. Uma coluna capilar DB5 (5% de fenil, 95% de siloxano metilo) 10 mx 0,32
milímetros x 0,1 m foi usada (Agilent). As condições de operação empregues estavam em conformidade com a norma ASTM D 6584
método (ASTM International).
3 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Na tentativa de elucidar o papel do teor de enzimas na evolução de reacção, dois ensaios cinéticos foram realizados a 35 ° C, 250 rpm até
48 h, usando 0,5 e 1% em peso de Eversa® Transform, quais os resultados são apresentados na Figura 1. Em conjunto com o estudo da
cinética da reacção de óleo de soja utilizando como substrato, dois ensaios de reacção em branco foram também realizadas com a mesma
condição experimental, excepto para o facto de que, em um caso, nenhuma enzima foi adicionada a o meio de reacção, e no outro, foi
adicionada nenhuma água. Os ensaios em branco, ambos efectuados em um agitador a 35 ° C, 250 rpm, durante 24 h,
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demonstraram, no entanto, que a produção de ésteres só ocorre na presença de Eversa® Transform catalisador de enzima, isto é, a
reacção não é autocatalítica, no primeiro caso. Pode-se observar a partir da Figura 1 que, para 0,5% em peso de enzima adicionado,
teor relativamente elevado de FAME foi obtido em 40 h,
95,1% em peso, com 2,1% em peso de AGL e baixos valores de MAG (0,21% em peso), do DAG (1,35% em peso) e TAG (1,66% em peso). No entanto,
uma taxa de reacção muito mais rápida foi observada quando se utiliza 1% em peso de enzima, tal como 94,5% em peso de FAME foi encontrada em 16
h, juntamente com 1,49% em peso de AGL, 0,39% em peso de MAG, 1,92% em peso de DAG e 0,67 wt % de TAG.
Figura 1. Avaliação da cinética de produção de biodiesel enzimática utilizando óleo de soja com (a) 0,5% em peso de Eversa®
Transformand (b) 1% em peso de Eversa® Transformar em termos de MAG, DAG, TAG, FAME e teor de FFA.
Considerando os bons resultados obtidos com os óleos estudada, um estudo laboratorial aumento de escala do processo foi levada a cabo
na melhor condição encontrada para a produo de biodiesel, utilizando frascos Erlenmeyer de 1000 ml com 600 g de óleo, metanol (1,5
equiv) , água (2,5% em peso), Eversa® Transform enzima (1% em peso), incubou-se num agitador (250 rpm, 35 ° C, durante 16 h). Os
resultados para este aumento de escala foram semelhantes aos obtidos para a reacção em escala menor (100 g de óleo), FAME 95,8% e
3,8% de FFA. Tais resultados demonstram que Eversa® enzima pode ser aplicada a sistemas de reactores de escala maior, como o
catalisador mostrou uma excelente versatilidade e não necessitam de adaptações especiais. De acordo com Cesarini et al. (2013), que
explorou o desempenho da lipase solúvel callera L. Trans na produção de ésteres metílicos, utilizando óleo de soja em bruto, a análise
HPLC de curso de tempo dos produtos da reacção sugere que as enzimas solúveis prossegue através de um mecanismo de formação de
éster metílico baseado em um primeiro passo de hidrólise que liberta FFAs, DAG ou MAG, seguido por esterificação de FFAs com metanol
para a produção de FAMEs.
4. CONCLUSÕES
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O desempenho de Eversa® Transform enzima solúvel foi avaliado para as reacções de transesterif icação usando-se metanol,
água, incubou-se 16 h em agitação a 35 ° C e 250 rpm. Alta conversão de FAME em condições de reacção suaves a partir de óleo
de soja (96,7% em peso). Além disso, a boa aparência de glicerina obtida no final da reacção, o tempo de reacção razoável e a
simplicidade dos processos de separação envolvidos acoplado com o baixo custo da enzima, que mostra Eversa® Transform lipase
tem um grande potencial para o processamento em larga escala comercial utilizando óleos de soja diferentes.
6. Referências
Akoh, CC, Chang, SW, Lee, GC Shaw, JF, 2007. enzimática Abordagem à produção de biodiesel, J.
Agric. Chem alimentos. 55, 8995-9005.
Cesarini, S., Nielsen, P., Diaz, PM, 2013. Explorando a lipase novo, solúvel para a produção FAMEs em
sistemas que utilizam óleo de soja em bruto como uma matéria-prima, Processo de água contendo. Biochem. 48, 484-487. Dizge, N.,
Aydiner, C., Imer, DY, Bayramoglu, M. Tanriseven, A., Keskinler, B., 2009. O biodiesel
produção de girassol, de soja, e óleos de culinária resíduos por transesterificação utilizando lipase imobilizada sobre um
polímero microporoso romance, Bioresource Technol. 100, 1983-1989. Ghaly, AE, Dave, D., Brooks, MS, Budge, S., 2010.
A produção de biodiesel por enzimática
transesterificação: revisão, Am J. Biochem. Biotechnol. 6, 54-76.
Nielsen, PM, Brask, J., Fjerbaek, L., 2008. A produção de biodiesel enzimática: técnica e econômica
considerações, Eur. J. Lipid. Sei. Technol. 110, 692-700.
Xu, Y., Nordblad, M., Nielsen, PM, Brask, JM, 2011. Woodley, Na visualização in situ e de efeito
glicerol em etanólise catalisada por lipase de óleo de colza, J. Mol. Catal. B: Enzym. 72, 213-219.