Facultad de Medicina. Escuela de Tecnología Médica. Sede Santiago.

Asignatura de Infectología 2019. Prof TM Marco Silva G.

PARED CELULAR Y ESTRUCTURAS BACTERIANAS (TINCIONES).

MÉTODOS DE OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

1.- Observación directa sin tinción o preparación al fresco:
Permite obtener información rápida, para la búsqueda de bacterias y
hongos. Además, informa acerca de la movilidad bacteriana y es un
examen de gran utilidad en la observación de sedimentos urinarios y
secreciones vaginales.
Técnica: Observación al fresco entre lámina (portaobjetos) y laminilla
(cubreobjetos):
a) Colocar una gota de suspensión bacteriana o muestra sobre una
lámina (portaobjetos) y cubrir con una laminilla (cubreobjetos).
b) Observar al microscopio con aumento mayor (40X)
2.- Observación con tinción o coloración: Corresponde a la observación
de bacterias fijadas y es la base para la realización de cualquier proceso
de tinción, permite el estudio en detalle de la morfología de las bacterias.
Una vez fijadas las muestras (con calor por ejemplo) se puede proceder a
efectuar la tinción.

En bacteriología se utilizan fundamentalmente tres tipos de tinciones:

2.1.- Tinción simple: Estas tinciones se denominan simples ya que sólo
permiten definir forma y agrupación. Usan un solo colorante (azul de
metileno, fucsina) y permiten observar muy bien la presencia de
microorganismos intracelulares como Neisseria.
2.2.- Tinciones dobles:
a) Tinción de Gram: Descrita y desarrollada por Christian Gram en 1884,
esta tinción es la más importante en Microbiología, pues permite
diferenciar a las bacterias en base a su afinidad tintorial: Gram
positivas y Gram negativas, morfología; Cocáceas, Bacilos,
Cocobacilos, Vibrios, Espirilos, Espiroquetas y visualizar su
agrupación:

Cocáceas en diplo: Diplococos

Cocáceas en cadena: Streptococcus
Cocáceas en tétrada: Micrococcus
Cocáceas en octógena: Sarcina
Cocáceas en racimo: Staphylococcus

Esta tinción es uno de los primeros pasos que se realiza para cualquier
identificación bacteriana. Tiene gran utilidad clínica al revisar al
microscopio el Gram de la muestra en estudio, ya que orienta sobre las
posibles bacterias que están causando la infección.

Fundamento: El cristal violeta es un colorante que penetra la pared

celular de bacterias Gram positivas y negativas. Posteriormente se
agrega el lugol, que es un mordiente o fijador y que forma un complejo
con el cristal violeta. Durante el proceso de descoloración con alcohol-

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acetona, la gruesa pared de los Gram positivos impide la salida del

colorante manteniendo la coloración violeta. En cambio, por el alto
contenido lipídico de la pared de los Gram negativos, el alcohol-
acetona genera poros, por los cuales, escapa el cristal violeta, la
bacteria se descolora y se tiñe de color rojo con el colorante de
contraste (safranina o fucsina).
b) Tinción de Zielh-Neelsen: Es de gran importancia en Microbiología,
ya que permite evidenciar la presencia de bacilos ácido-alcohol
resistentes (BAAR), como Mycobacterium tuberculosis, agente causal
de la tuberculosis humana. También se utiliza para el diagnóstico de
Criptosporidium spp. e Isospora belli que son coccidios patógenos que
producen diarreas agudas.

Fundamento: La fucsina, que es un colorante básico, forma un

complejo con los ácidos micólicos de la pared de las micobacterias.
Este complejo es resistente a la descoloración con alcohol-ácido
(alcohol clorhídrico), permaneciendo de color fucsina a diferencia de las
otras bacterias que se descoloran. El azul de metileno se usa como
tinción de contraste.
SEMINARIO
1. ¿Cuáles son las semejanzas y diferencias en la estructura de la pared
celular entre una bacteria Gram positiva y Gram negativa?
2. ¿Qué funciones cumple la pared celular?
3. ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Gram y cuál de sus reactivos la
hace una tinción diferencial?
4. ¿Cómo es la estructura de la pared celular de las micobacterias y que
propiedades le confieren a esta célula? ¿Se tiñen con el método de
Gram?
5. ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Ziehl Neelsen y para que se
utiliza?
6. ¿Qué son los PAMPs y que funciones cumplen? Mencione 3 PAMPs
como ejemplo. ¿Cuáles son los principales receptores de PAMPs?
7. ¿Cuál es su función y donde se encuentran:
a) Ácidos lipoteicoicos
b) Ácidos teicoicos
c) Fimbrias
d) Pilus
e) Cápsula bacteriana
f) Porinas
g) Lípido A
h) Antígeno O
i) Lipoproteína
j) Plásmidos
k) Proteína A
l) Proteína M
8. ¿Mencione antibióticos que afecten la estructura y síntesis del
peptidoglicano (5) y de la pared celular de las micobacterias (4)?
Bibliografía: Murray P., Ken S. Rosenthal, Michael A. Pfaller.(2009). “Microbiología Médica”. S.A. Elsevier.
España. 6ª Ed. Capítulo 2. Págs: 9 - 21

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