BIOTECNOLOGIA

UNIDAD 1: ETAPA 2 DEBATE Y CONCENSO CIENTIFICO DE LA UNIDAD 1

PRESENTADO POR:

JUAN CAMILO GIRALDO COD.:1.110468.590

LUZ KARIME HERNANDEZ MURILLO COD.:1.110.557.646

MARIA CAMILA LOZANO COD.: 1.110.534.251

YUDY PAOLA ARTUNDUAGA CUELLAR COD.: 1079176017

GRUPO:
305689_7

PRESENTADO A:

RAUL ALBERTO CUERVO

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS, TECNOLOGIA E INGENIERIA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTACIA – UNAD

MARZO DE 2017
 VARIACIÓN EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR DIFERENCIAS EN
LAS CONCENTRACIONES DE ALMIDÓN EN LAS FUENTES DE
CARBONO
Para demostrar el establecido en la hipótesis se
realizan dos procedimientos de laboratorio
donde se aíslan inicialmente tres cepas de
microorganismos amioliticos, con el fin de
determinar cuál de ellos es el más eficiente en
la degradación de este polisacárido.
Posterior a ello se optimizan las condiciones
para la producción, utilizando dos medios de
cultivo diferentes, con dos condiciones de
fermentación donde se demostrara que además
de influir la concentración de almidón,
también influye el tipo de almidón utilizado
como fuente de carbono.
EVIDENCIA Y DATOS
Resultados de ensayo con 3 cepas
amioliticas
TABLA 1. Resultados de cantidad de biomasa obtenida
De las tres cepas utilizadas en el laboratorio,
se observa que evidentemente la cepa más
eficiente para la producción de amilasa es la
cepa n°3, pues los resultados de peso final de
la biomasa obtenida, se observa que la
producción es mayor para esta cepa que para
las otras dos.
Esto se debe a que es capaz de hidrolizar mejor
las moléculas de almidón que dan como
producto dextrinas y polímeros.
Ahora se pretende optimizar las condiciones
para esta producción. Para ello se desea
comparar dos medios de cultivo, los cuáles se
prepararon así:
SUSTRATO MEDIO 1 MEDIO 2
Fuente de carbono Harina de yuca (10 g.L-1) Harina de trigo (10 g.L-
1)
Fuente de nitrógeno Harina de frijol (5 g.L-1) Harina de sangre (5 g.L-
Mezcla de nutrientes K (1ml.L-1)
1)
K (1ml.L-1)
Tabla 2. Medios de cultivo problema 2
Las Condiciones de cultivo en los dos casos
fueron: 5 días de fermentación en medio
líquido y agitación constante de 120 rpm. Se
realizó un experimento, en los cuales cada
medio de cultivo se incubo a dos temperaturas
diferentes (30 °C y 35 °C), con tres replicas.
No se controló el pH durante la fermentación.
Al finalizar el experimento se obtuvieron los
resultados que se muestran en la tabla adjunta,
los valores de pH final y UA/enzimática,
corresponden al promedio de las tres replicas.
Tabla 3. Resultados de UA/enzimática de dos medios de cultivo
GARANTIA
Habiendo utilizado la misma cepa se obtiene
resultados diferentes.
En el primer ensayo realizado, se tuvieron en
cuenta condiciones de Ph que afectaban
claramente la producción de biomasa. Para el
segundo ensayo realizado las condiciones
claramente cambian. A pesar de ser la misma
2
cepa las condiciones de temperatura para
incubación y la composición de medio de
cultivo no son las mismas.
En este ensayo aunque son incubados a
temperaturas diferentes el mismo medio de
cultivo, el PH final no es el mismo al igual
que la U/A enzimática. Conocemos por el caso
anterior que la temperatura de 35°c es la más
cercana a ser la temperatura ideal, pero para
este caso el pH jugó el principal rol en la
obtención de la cantidad mayor de masa, lo
que quiere decir que a PH menores, es mayor
la producción y por tanto el rendimiento.
Para el medio de cultivo n° 2 se observa que a
un Ph menor y a una temperatura cercana a la
ideal (35ºC), es mayor obtención de UA/
enzimática.
RESPALDO
Se debe tener en cuenta que uno de los factores
que influye de manera directa en el aumento de
la producción de biomasa, es el PH de medio y
las características de la cepa en cuanto al PH
propicio para su desarrollo.
Adicional a ello,
la enzima alfa-
amilasa requiere
de un activador
como cloruro de
sodio. Es sensible
a una acidez elevada y se vuelve inactiva a pH
3,3. El pH óptimo de acción está dentro del
rango 5-7, siendo de 6,5 para alfa-amilasa
bacteriana y pancreática. La enzima es
resistente al calor, pues a 70°C conserva un
70% de su actividad. Actúa sobre almidones
crudos y gelatinizados es por esto que a una
temperatura de 37 grados centígrados por 24
horas es un medio optimo para estos resultados
como también es posible que el pH del medio
este entre el rango antes mencionado y que sea
la cepa más eficiente.
Si bien, las tres cepas se inocularon en los
mismos caldos nutritivos, se incubaron a la
misma temperatura al igual que por espacios
de tiempo. Claramente se deduce que esta
última cepa conto con las condiciones de pH
del medio, ideales para crecer lo que permitió
mejor aprovechamiento del mismo, lo cual
indica que al momento de utilizarlos en un
proceso serían los más efectivos
Se
deduce entonces que este microorganismo
logro generar mayor biomasa porque su pH
ideal para crecer y adaptarse era el que tenía el
medio o caldo nutritivo. De igual manera se
tiene en cuenta que la temperatura jugó un
papel importante pues también hace parte de
las condiciones ideales que se le deben dar al
microorganismo para generar un ambiente
propicio para su crecimiento y desarrollo. Por
la temperatura utilizada en este ensayo se
deduce que éste era un microorganismo
mesofilos. Esta información es importante
tenerla en cuenta para futuros repiques de la
cepa con el objeto de optimizar la producción.
En el segundo ensayo donde se optimizan las
condiciones para la producción, se considera
que la razón por la cual se obtuvieron mejores
3
resultados para el medio de cultivo n° 2 que RESERVA
para el n°1 es la composición del medio de
cultivo. En ambos medios hay un importante Según la reacción modelo de la ecuación de
Michaelis- Menten
aporte de almidón,
SUSTRATO MEDIO 1 MEDIO 2 Michaelis y Menten propusieron un modelo
Fuente de Harina de yuca (10 Harina de trigo simple para explicar la mayoría de las
carbono g.L-1) (10 g.L-1)
Fuente de Harina de frijol (5 Harina de sangre
reacciones catalizadas por enzimas. En este
nitrógeno
Mezcla de
g.L-1)
K (1ml.L-1)
(5 g.L-1)
K (1ml.L-1)
modelo la enzima se combina reversiblemente
nutrientes con su substrato para formar el complejo
enzima-sustrato (ES) que subsecuentemente se
rompe para formar el producto, hecho que
Con diferentes fuentes de carbono, es posible regenera a la enzima. El modelo para una
que la harina de trigo aporte mayor cantidad de molécula de sustrato se muestra a
carbono que la harina de yuca, nutriente continuación:
principal utilizado por los microorganismos
para la producción de amilasa. De igual
manera el aporte de nitrógeno puede variar,
entre la harina sangre y la harina de frijol. Se
En donde:
sostiene esta hipótesis porque a pesar de que S es el substrato
existen iguales cantidades de cada componente E es la enzima
mezclado en el medio (tanto de fuente de ES es el complejo enzima substrato o
carbón como de nitrógeno) el aporte de complejo de Michaelis y Menten
nutrientes de cada una varía de acuerdo a la k1,k-1 y k2 son las constantes de velocidad de
la reacción.
composición natural de los mismos.
Orden de la reacción: cuando [S] es más
pequeña que la Km, la velocidad de la reacción
es aproximadamente igual a la concentración
de substrato.

Tabla 4. Composición fisicoquímica de harina de trigo y yuca

Es importante tener en cuenta siempre que los

nutrientes, temperatura y pH debe existir un
completo y perfecto equilibrio para la
optimización de cualquiera que sea el proceso.

La velocidad de reacción se dice en estas

condiciones es de primer orden con respecto
al substrato. Cuando [S] es más grande que
la Km, la velocidad es constante e igual a

4
la Vmax. La velocidad de la reacción es
independiente de la concentración de substrato
y se dice que es de orden cero con respecto a
la concentración de substrato
CUALIFICADOR MODAL
Seguramente
CONCLUSIONES
-Es claro que para la obtención de productos
derivados de la actividad enzimática se debe
tener en cuenta no solo las condiciones del
medio que se proporciona como temperaturas,
disponibilidad de oxígeno, actividad acuosa
entre otros, sino también las condiciones del
medio en disponibilidad de nutrientes los
cuales deben ajustarse no solo a la eficiencia
de la enzima como tal si no del producto
mismo que se desea obtener tanto en cantidad
como en tiempo y disponibilidad de recursos,
buscando siempre conseguir los mejores
rendimientos en estos aspectos y diminución
de costos en la producción. Es por ello que se
realiza este análisis, para determinar las
verdaderas causas que interfieren en la
producción de amilasa específicamente para
esta enzima, con relación a disponibilidad en
la fuente de carbón de los almidones
proporcionados.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Contreras, V., E(2003) Ecuacion de
Michaelis-Mentel., Bioquimica y biología
molecular en línea. Recuperado de:
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/040
3/ecuacion%20de%20michaelis.html
Crecimiento y muerte de microorganimos
(2009). Microbiologia Clinica, Recuperado
de:
http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/t
ema02.pdf
Ortiz, B., F( 2012) Laboratorio Virtual de
Biotecnología. Universidad Nacional Abierta
y a Distancia
Laboratorio 2 y 3 En:
http://hdl.handle.net/10596/9964
Fedra Lorena, O. ( 01,06,2014). OVA DE
ARGUMENTACIÓN. [Página Web].
Recuperado de:
http://hdl.handle.net/10596/9966
Ortiz, F. (2015). Tutorial sobre enzimas.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
http://campus14.unad.edu.co/ecbti14/pluginfil
e.php/9431/mod_folder/content/0/Tutorial_E
nzimas.pdf?forcedownload=1