ESTUDIO DE LA SANGRE

I. INTRODUCION.
La sangre está constituida por células especializadas (eritrocitos, leucocitos y plaquetas)
o masa globular que constituye el 55%, suspendidas en un medio líquido o plasma que
es el 45% por ciento de la masa sanguínea. Su función principal es el transporte de
materiales hacia los órganos y tejidos del cuerpo, esta función vital es dependiente
del sistema circulatorio. La composición química del líquido que baña a la célula está
en equilibrio con la sangre circundante, así la concentraciones de H, P02, PC02, Na,
K, Cl, sustancias nutritivas y otros productos vitales permanecen relativamente fijas
y los productos metabólicos celulares en lugar de acumularse, son removidos
continuamente. A este líquido extracelular, Claudio Bernard le llamó MEDIO
INTERNO, cuya composición normal es indispensable para la fisiología de los diversos
órganos y sistemas y la vi da del individuo. La interrupción ón de la circulación de la
sangre por unos cuantos mi n u tos puede ocasionar daños irreparables o la muerte.
La conservación de las constantes del medio interno constituye u n aspecto del control
biológico, denominado por Cannon "Homeostasis"
El objetivo de esta práctica está orientado al conocimiento de algunas técnicas
utilizadas en el laboratorio clínico para el reconocimiento de las características de la
sangre.

II. MATER IAL

M. Biológico:

 1 Alumno voluntario por mesa de trabajo

M. de vidrio:

 Tubos de ensayo x 15mm

 Pipetas cuenta glóbulos rojos

 P i petas cuenta glóbulos blancos

 Cámara cuenta glóbulos rojos y blancos: Neubauer

 Tubos de hematocrito to: Wintrobe

 Tubos de Cutler: para determinar velocidad de sedimentación

 Micropipeta de Salhi : Para dosaje de hemoglobina

 Pipetas Pasteur

 Láminas portaobjetos
 Láminas cubreobjetos.
M. Químico:

 Anticoagulante: Oxalato de potasio a l 2 %

 Solución de Turk: Diluyente para glóbulos blancos.

Ácido acético glacial ...... ... . . . . ... ... ... 1 ml
Violeta de genciana al 1 % ... 0,5 ml
Agua destilada c.s.p. ...... .. .. ................. .... 50,0 ml

 Soluci ón hidróxido de amonio al 0,4%

Equipos:

 Centrífuga

 Fotocolorímetro

 Microscopios

III. P RO CED IM IE NTO

a) Obtención de la muestra de sangre. Primero hacemos una limpieza de la zona elegida
con alcohol yodado y l uego introducimos la aguja en el vaso sanguíneo superficial del
alumno. La muestra extraída se extravasa a un recipiente que contenga un anti
coagulante (oxalato de potasio al 2%) y luego se agita para que se homogenice.

b) Recuento de glóbulos rojos. Se siguen los siguientes pasos.

 Utilizando el tubo de goma de la pipeta, succionar sangre hasta la señal 0,5 li m pi

ando el exceso de sangre que haya quedado alrededor de la pi peta. Luego llenar
la pi peta con la solución de Hayem hasta la señal de 101 de esta manera la
dilución de la sangre será igual a 1 /200. Esta di lución deberá ser exacta ya que
de ello dependerá que los resultados sean correctos. Quitamos el tubo de goma
de la pi peta y tapando ambos extremos con los dedos de las manos mesclamos el
contenido con mucho cuidado. El recuento deberá l levarse a cabo después de
realizada la dilución y si esto no fuera posible deberá agitarse nuevamente antes del
recuento.
 Descartar las primeras gotas de di lución antes de llenar la cámara. Colocar una gota
en el borde del cubre objeto de la cámara de tal manera que el líquido fluya por
debajo, llenándose de esta manera la cámara.
 Poner la cámara en el microscopia a un aumento de 450 x contar las células en los
cuatro campos de las esquinas y el del centro de 1 6 cuadritos cada uno. Calcular
e l número de células por cada cuadra (5x 1 6 = 80 cuadraditos).
 Calculo: Las dimensiones de la cámara y el grado de di lución, constituye la base del
cálculo. Cada uno de los cuadraditos más pequeños tienen una superficie de 1/400
mm cuadrad os, de los cuales se han contado 80, la profundidad es de 1 / 10 mm. y la
 dilución es de 1 /200, por lo que la fórmula para calcular el número de hematíes x mm.
cúbico sería la siguiente. N/800 x 400 x 10 x 200, donde:
N: número de hematíes en los cuadraditos contados; 4000: producto de la superficie
De cada cuadradito (1/4000) x la altura (1 /10); 1/200: Grado de dilución.
Regla práctica: Contar 80 cuadraditos y agregarle cuatro ceros. El resultado será
el número de glóbulos rojos x mm cúbico.
C) Recuento de Glóbulos Blancos. Se sigue los mismos pasos q ue para el recuento de
glóbulos rojos con la diferencia de:

 La pipeta de glóbulos blancos se llena con la muestra de sangre hasta la seña l de 0,5
y se diluye con la solución Turk hasta la marca 11, quedando de esta manera la dilución
a 1/20.
 Llenar la cámara con líquido y comenzar al conteo con pequeños aumentos de los
cuatro milímetro de las esquinas y sumarlos.
 Calcular: la altura de las cámaras es de O, 1 mm, el grado de dilución es de 1/20, por lo
que, para el cálculo de los glóbulos blancos por mm, cubico será ut i l izada la siguiente
fórmula: N/4 x 20 x 10; Dónde N: número de los glóbulos blancos contado en las
cuatro esquinas.
Regla práctica: A la suma total de glóbulos blancos de los cuatro mm cuadrados
se le agrega 2 ceros y se le saca la mitad, el resultado será el número de glóbulos
blancos por milímetro cúbico.
d) Hematocrito. Colocar en u n tubo de Wintrobe sangre oxalatada h a s t a la m a r c a
d e 100, centrifugar a 1 5 r/ mi n, hasta que el volumen de hematíes permanezca
estable, luego leer o hacer la lectura dada por el límite superior de l a masa de
glóbulos rojos en la escala graduada.
e) Dosaje de Hemoglobina. Colocar en la micropipeta para dosaje de hemoglobina
0,02 ml d e la muestra de sangre y luego pasarlo varias veces en un tubo de ensayo
que contiene la sol uci ón de hidróxido de amonio al 0,4%, después aforar a 5 ml con
dicha solución. Luego dejar en reposo unos 1 O minutos aproximadamente, para
posteriormente leerse en el fotocolorímetro. La lectura dada por el
fotocolorímetro será multiplicada por el factor correspondiente y su resultado será
expresado en gramos de Hb x 1 00 ml de sangre
f) Constantes Corpusculares. Para el cálculo de estas es necesario conocer
previamente la cantidad de hematíes por mm cubico, el hematocrito y la cantidad
de hemoglobina. Las constantes corpusculares son:

 Volumen Corpuscular Medio (V .C.M). Se expresa en micras cúbicas.

VCM= Hcto (en %) x10 / # de hematíes (en millones)= micras cúbicas.

 Hemoglobina Corpuscular Media (Hb.C.M). Se expresa en microgramos.

Hb. C. M. = Hb (g%) x 10 / # de hematíes (millones) = μμg
 Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media (C. H b.C.M). Se ex presa
en porcentaje. C.Hb.C.M. =H b (g.%x) / Hcto x 1 00 = %
g) Velocidad de Eritrosedimentación: Colocar en el tubo de Cutler la muestra de
sangre con anticoagulante, hasta la marca superior, dejar en reposo y en forma
vertical por el lapso de una hora, al final de la cual se leerá el límite inferior que
al canza la columna clara de plasma, en milímetros. El resultado se ex presa en mm.
por h ora.
IV. R ESULTADOS

G. Rojos en millones/mm3

G. Blancos en millones/mm3

Hb. en g/100 ml

Hcto. En %

V.S. en mm/h

V.C.M. en ug.

C.Hb.C.M en % .
RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE:

SERIE BLANCA:

A) GRANULOCITOS: NEUTRÓFILOS, EOSINÓFILOS Y BASÓFILOS

B) AGRANULOCITOS: LINFOCITOS Y MONOCITOS

SERIE ROJA: ERITROCITOS

PLAQUETAS.