Técnicas Histoquimicas

Técnica de Pearls.
Objetivo: Demostrar Hierro.
Fijador: Formol al 10%.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Reactivos de Pearls.
Acido Clorhídrico 10% (a).
Ferrocianuro de Potasio 10% (b).
Nota: Poner partes iguales A y B.
Hematoxilina de Mayer.
Alumbre de amonio o de potasio…5gr.
Agua…100ml.
Cristales de hematoxilina…0.1gr.
Yodo de sodio…0.02mg.
Acido cítrico…0.1gr.
Hidrato de cloral…5gr.
Eosina
Eosina…1gr.
Agua…20ml.
Alcohol ABS…80ml.
Acido Acético…0.2ml.
Nota: Se puede suprimir la Eosina por el Rojo Nuclear o Van Gienson.
Procedimiento:
1.-Desparafinar é hidratar.
2.-Reactivo de Pearls…30min.
3.-Lavar en Agua.
4.-Hematoxilina de Mayer…5-8 min.

5.-Lavar en Agua.
6.-Diferenciar y Virar.
7.-Lavar en Agua.
8.-Eosina…3-5 min.
9.-Deshidratar, Aclarar y Montar.
Resultados:
Hierro… Azul.
Núcleos… Violetas.
Citoplasmas… Rosas.
Técnica de Lillie.
Objetivo: Demostrar Melanina.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Solución de Sulfato Ferroso al 2.5%.
Sulfato Ferrico…2.5gr.
Agua… 100ml.
Ferrocianuro de Potasio 2% (A).
Ferrocianuro de Potasio…2.5ml.
Agua…97.5ml.
Acido Acético al 2% (B).
Acido Acético Glacial…2ml.
Agua…98ml.
Colorante Van Gienson.
Solución Saturada de Acido Pícrico…95ml.
Fucsina Acida al 1%…5ml.
Acido Acético…1ml.
Procedimiento:
2.-Sulfato Ferrico 2.5%…1Hr.
3.-Lavar en Agua.
4.-A y B se mezclan en partes iguales…30min.
5.-Lavar en Acido Acético 2%.
6.-Contraste Van Gienson…3min.
7.-Lavan en Agua.
Resultados:
Melanina…Verde.
Demás tejido…Azul.
Técnica de Azul Alcian ph. 2.5
Objetivo: Demostrar Mucina Acida.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Acido Acético al 3%.
Agua…97ml.
Azul Alcian
Azul Alcian…1gr.
Acido Acetico3%…100ml.
Rojo Nuclear Rápido.
Agua…100ml.
Sulfato de aluminio…5gr.
Hervir y Agregar.
Rojo Nuclear… 0.5gr.
Filtrar y Agregar Tymol como conservador.
Procedimiento:
2.-Acido Acético al 3%…3min.
3.-Azul Alcian…30min.
4.-Lavar en Agua…10min.
5.-Rojo Nuclear… 5min.
6.-Lavar en Agua.
Resultados:
Mucinas…Azules.
Núcleos…Rojos.
Técnica de P.A.S.
Objetivo: Demostrar Mucina.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Solución de Acido Peryodico al 5%.
Acido Peryodico… 0.5gr.
Agua… 100ml.
Solución de Acido Clorhídrico 1N.
Acido Clorhídrico…83.5ml.
Agua…916.5ml.
Reactivo de Schiff de Coleman.
Fucsina Básica…1gr.
Agua-Caliente a 60C…200ml.
*Llevarlo a Punto de Ebullición.
*Dejarlo enfriar y luego agregar
Metabisulfito de Potasio…2gr.
Acido Clorhídrico 1N…10ml.
*Dejarlo aclarar durante 24Hrs y luego agregar:
Carbón Activado…0.5gr.
Nota: Dejarlo en refrigeración hasta que quede incoloro.
Procedimiento:
2.-Acido Peryodico…5min.
3.-Lavar en Agua.
4.- Reactivo de Schiff…40min.
5.-Lavar en Agua Caliente…10min.
6.-Hematoxilina…3-8min.
7.-Lavar en Agua.
Resultados:
Mucinas…Rojo a Púrpura.
Núcleos… Azul.
Hongos… Rojo a Púrpura.
Técnica de P.A.S. con Diastasa.
Objetivo: Demostrar Mucina.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Solución de Acido Peryodico al 5%.
Acido Peryodico… 0.5gr.

Agua…100ml.
Solución de Acido Clorhídrico 1N.
Acido Clorhídrico…83.5ml.
Agua…916.5ml.
Acido Clorhídrico 1N…10ml
Solución de Fosfato Estabilizadora. (pH6.0).
Cloruro de Sodio…8gr.
Fosfato de Sodio, Dibasico…0.28mg.
Fosfato de Sodio, Monobásico…1.97gr.
Agua…100ml.
Solución de Diastasa para Digestión.
Diastasa de malta…0.1mg.
Solución de Fosfato Estabilizadora…100ml.
Nota: Se puede utilizar también saliva humana en vez de la Solución de Diastasa.
Procedimiento:
1.-Desparafinar é Hidratar.
2.-Diastasa para digestión a 37*C…1hr.
3.-Lavar en Agua.
4.-Acido Peryodico…5min.
5.-Lavar en Agua.
6.-Reactivo de Schiff…40min.
7.-Lavar en Agua Caliente…10min.
8.-Hematoxilina…3-8min.
9.-Lavar en Agua.
Resultados:
Mucinas…de Rojo a Púrpura.
Núcleos…Azules.
Hongos…de Rojo a Púrpura.
Técnica Azul de Toluidina.
Objetivo: Demostrar Metacromasia Gamma. Fijador: Formol 10%.
Corte: 10 micras (en Criostato).
Reactivos:
Azul de Toluidina al 0.1%.
Azul de Toluidina al…0.1mgr.
Agua…100ml.
Gelatina Gelly (Medio de Montaje).
Gelatina en Polvo (Grenetina)…5gr.
Agua…30ml.
Disolver bien y agregar.
Glicerina…30ml.
Calentar hasta disolver.
Agregar Tymol como Conservante.
Procedimiento:
1.-Corte por congelación 10 micras de grosor a -25*C.

2.-Azul de Toluidina al 0.1%...30min.
3.-Lavar en Agua.
4.-Secar y Montar con Gelatina Gelly.
Resultados:
Metacromasia Gamma…Rojo, Púrpura o Rosa.
Técnica de Von Kossa.
Objetivo: Demostrar Sales Minerales (Sales de Calcio).
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Nitrato de Plata al 5%.
Nitrato de Plata…5gr.
Agua…100ml.
Solución de Tiosulfato Sodico al 2%.
Tiosulfato de Sodio…2gr.
Agua…100ml.
Rojo Nuclear Rápido.
Agua…100ml.
Sulfato de aluminio…5gr.
Hervir y Agregar.
Rojo Nuclear…0.5gr.
Filtrar y Agregar Tymol como conservador.
Procedimiento:
2.-Solución de Nitrato de Plata a Plena Luz…30-60min.
3.-Lavar en Agua.
4.-Lavar en Solución de Tiosulfato…5min.
5.-Lavar en Agua.
6.-Rojo Neutro…3-5min.
7.-Lavar en Agua.
Resultados:
Calcio…Negro.
Núcleos…Rojos.
Técnica de Keller.
Objetivo: Demostrar RNA.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Violeta de Cresilo 0.5%.
Violeta de Cresilo…0.5gr.
Agua…100ml.
Nota: Reposar de 24 a 48hrs y antes de usar filtrar.
Procedimiento:
2.-Violeta de Cresilo…5min.
3.-Alcohol 96*…30seg.
4.-Alcohol ABS…30seg.
5.-Xilol…1min.
6.-Lavar en Xilol.
7.-Montar en Permount.
Resultados:
Sustancia de Nissl…Púrpura.
Técnica de Feugen.
Objetivo: Demostrar ADN.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Acido Clorhídrico.
Acido Clorhídrico Concentrado…82.5ml.
Agua… 17.5ml.
Acido Clorhídrico 1N…10ml
Bisulfito de Sodio al 1%.
Bisulfito de Sodio…1gr.
Agua…100ml.
Verde Luz al 1%.
Verde luz…1gr.
Agua… 100ml.
Procedimiento:
2.-Acido Clorhídrico a 54*C… 20min.

3.-Reactivo de Shiff…40min.
4.-Lavar en Agua.
5.-Bisulfito de Sodio al 1%…1min.
6.-Lavar en Agua.
7.-Verde Luz al 1%…1min.
8.-Lavar en Agua.
Resultados:
ADN…Rojo.
Citoplasmas…Verdes.
Técnica Rojo Oleoso.
Objetivo: Tinción de Tejido Graso.
Fijador: Formol 10%.
Corte: 8 a 10 micras (en Criostato).
Reactivos:
Propilen Glicol ABS.
Rojo Oleoso.
Rojo Oleoso…0.5gr.
Propilen Glicol ABS a 90*…100ml.
Mezclar bien y Filtrar.
Propilen Glicol al 85%.
Propilen Glicol…85ml.
Agua…15ml.
Hematoxilina de Mayer.
Alumbre de amonio o de potasio…5gr
Agua…100ml
Cristales de hematoxilina…0.1gr
Yodo de sodio…0.02mg.
Acido cítrico…0.1gr.
Hidrato de cloral…5gr.
Albúmina de Mayer (Adhesivo de tejidos).
Clara de Huevo.
Glicerina.
Fenol (Preservativo).
Gelatina Gelly (Medio de Montaje).
Gelatina en Polvo (Grenetina)… 5gr.
Agua… 30ml.
Disolver bien y agregar.
Glicerina… 30ml.
Calentar hasta disolver.
Agregar Tymol como Conservante.
Procedimiento:
1.- Corte por congelación 10 micras de grosor a -25*C.
2.- Propilen Glicol ABS…1min.
3.- Lavar en Agua.
4.-Rojo Oleoso…10min.
5.-Lavar en Agua.
6.-Propilen Glicol 85%.
7.-Lavar en Agua.
8.-Hematoxilina de Mayer…3min.
9.-Lavar en Agua.
10.-Secar y Montar con Gelatina Gelly.
Resultados:
Lípidos…Rojos.
Núcleos…Violetas.
Técnica de Azul Luxol.
Objetivo: Demostrar Mielina y Neuronas.
Corte: 4-6 micras
Reactivos:
Solución de Azul Luxol-Resistente al 0.1%.
Azul Luxol…0.1gr.
Alcohol 96*…100ml.
Nota: Por cada 100ml añade 0.5ml. De Acido Acético Glacial al 10%.
Solución ``ECHT´´ de Violeta de Cresilo 0.1%
Violeta de Cresilo…0.1gr.
Agua…100ml.
Nota: Antes de usar, añadir 15 gotas de acido acético glacial al 10%.
Solución de Carbonato de Litio al 0.05%
Carbonato de Litio…0.05gr.
Agua…100ml.
Alcohol al 70*.
Procedimiento:
2.-Azul Luxol a 56*C…24hrs.
3.-Lavar en Alcohol de 96*.
4.-Lavar en Agua.
5.-Carbonato de Litio, Un baño rápido.
6.-Alcohol de 70*, hasta que la sustancia gris este clara y la blanca bien definida.
7.-Lavar en Agua.
8.-Violeta de Cresilio``ECHT´´…6min.
9.-Lavar en Agua.
Resultados:
Mielina y Neuronas…Azules
Demás Tejido…Violetas
Técnica de Ziehl-Neelsen.
Objetivo: Tinción de BAAR.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Carbo-Fucsina.
Cristal Fenol Derretido (a Baño Maria)…2.5ml.
Alcohol ABS…50ml.
Fucsina Básica…0.5gr.
Agua…50ml.
Nota: Filtrar antes de usar.
Alcohol Acido al 1%.
Acido Clorhídrico…1ml.
Alcohol ABS…99ml.
Solución Madre de Azul de Metileno.
Azul de Metileno…1.4gr.
Alcohol de 96*…100ml.
Solución de Trabajo de Azul de Metileno.
Solución Madre…10ml.
Agua…90ml.
Procedimiento:
2.-Carbo-Fucsina…30min.
3.-Lavar en Agua.
4.-Alcohol Acido al 1%…5seg.
5.-Lavar en Agua.
6.-Solución de Trabajo…1min.
7.-Lavar en Agua.
Resultados:
BAAR…Rojo Brillante.
Eritrocitos…Amarillos.
Otros elementos…Azules.
Técnica de Papanicolaou.
Objetivo: Tinción de Citologías.
Fijador: Cito spray, Alcohol de 96*.
Reactivos:
Orange G (Solución Stock).
Naranja G…1gr.
Agua…10ml.
Alcohol ABS…90ml.
Acido Fosfotugstico…0.030mgr.
Nota: Diluir el Naranja G en los 10ml del Agua.
Solución Policroma (EA50).
*(A) Verde Luz 0.5gr en 5ml. De Agua más 95ml de Alcohol ABS.
*(B) Pardo de Bismark 0.5gr en 5ml. De Agua más 95ml de Alcohol ABS.
*(C) Eosina Amarillenta 0.5gr en 5ml. De Agua más 95ml de Alcohol ABS.
Nota: Mezclar.
A…100ml.
B…16ml.
C…84ml.
Y Agregar 30mgr de Acido Fosfotugstico.
Hematoxilina de Gill (Harris Modificada).
Hematoxilina en Polvo…2gr.
Etilen Glicol…250ml.
Agua…730ml.
Sulfato de Aluminio…17.6gr.
Yodato de Sodio…0.2gr.
Alcohol Acido al 1% (Diferenciar).
Alcohol ABS…99ml.
Nota: Se puede sustituir al Alcohol por Agua.
Alcohol Amoniacal al 1%(Virar).
Hidróxido de Amonio…1ml.
Alcohol ABS…99ml.
Procedimiento:
1.-Alcohol de 96*…15-20min.
2.-Lavar en Agua.
3.-Hematoxilina de Harris…3-5min.
4.-Lavar en Agua.
6.-Lavar en Agua.
7.-Baños en Alcohol de 96*.
8.-Naranja G…2min.

10.-Solución Policroma…3min.
Resultados:
Células Básales, Parabásales é Intermedias…Azul o Verde.
Células Superficiales…Rosa, Amarillas, Cafés.
Núcleos…Morados, Violetas.
Citoplasmas…Rosas.
Técnica de Hematoxilina y Eosina.
Objetivo: Tinción Rutinaria.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Hematoxilina de Harris.
Hematoxilina…0.5gr.
Alcohol ABS…5ml.
Alumbre de potasio o de amonio…10gr.
Agua…95ml.
Oxido Rojo de Mercurio…0.25gr.
Alcohol ABS…99ml.
Alcohol ABS…99ml.

Eosina
Eosina…1gr.
Agua…20ml.
Alcohol ABS…80ml.
Acido Acético…0.2ml.
Procedimiento:
3.-Lavar en Agua.
5.-Lavar en Agua.
6.-Eosina…3min.
7.-Lavar en Agua.
Resultados:
Citoplasmas…Rojos, Rosas
Técnica de Gridley.
Objetivo: Demostrar Amebas.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Hematoxilina de Harris.
Hematoxilina…0.5gr.
Alcohol ABS…5ml.
Alumbre de potasio o de amonio…10gr.
Agua…95ml.
Oxido Rojo de Mercurio…0.25gr.
Alcohol ABS…99ml.
Alcohol ABS…99ml.
Eosina
Eosina…1.5gr.
Alcohol 80%…100ml.
Aceite de Anilina…3ml.
Verde de Naftol.
Verde ``V´´ Naftol…1gr.
Agua…99ml.
Procedimiento:
3.-Lavar en Agua.
5.-Lavar en Agua.
6.-Anilina-Eosina…5min.
7.-Lavar en Agua…2min.
8.-Verde de Naftol…5min.
9.-Lavar en Agua.
Resultados:
Citoplasmas…Rojos, Rosas.
Amebas…Verdes.
*Técnica de Gridley para Hongos.
Objetivo: Demostrar Hongos.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Acido Crómico al 4%.
Acido Crómico (Trióxido de Cromo)…4gr.
Agua…100ml.
Fucsina Básica… 1gr.
Agua-Caliente a 60C… 200ml.
Metabisulfito de Potasio… 2gr.
Acido Clorhídrico 1N… 10ml
Carbón Activado… 0.5gr.
Solución de Fucsina Aldehídica.
Alcohol ABS…100ml
Paraaldehido…1ml.
Amarillo de Metileno al 0.25%
Amarillo de Metilo…0.25gr.
Agua Destilada…100ml.
Acido Acético Glacial…0.25ml.
Alcohol de 70*
Alcohol ABS…70ml.
Agua…30ml.
Procedimiento:
2.-Oxidar con Acido Crómico al 4%…1hr.
3.-Lavar en Agua.
4.-Reactivo de Coleman-Schiff…15min.
5.-Lavar en Agua.
6.-Lavar en Alcohol 70*.
7.-Fuscina Aldehídica…30min.
8.-Lavar en Alcohol 96*.
9.-Lavar en Agua.
10.-Solución de Amarillo de Metileno…1min.
11.-Lavar en Agua.
Técnica de Gram.
Objetivo: Tinción de Bacterias.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Cristal Violeta 1%.
Cristales de Violeta…1gr.
Agua…100ml.
Fucsina Básica al 0.25%.
Agua…100ml.
Yodo de Gram.
Agua…300ml.
Yoduro de Potasio…2gr.
Yodo…1gr.
Solución para Diferenciar de Gallegos.
Agua…100ml.
Formol…2ml.
Procedimiento:
2.-Cristal Violeta…1min.
3.-Lavar en Agua.
4.-Yodo de Gram…1min.
5.-Lavar en Agua.
6.-Acetona…1min
7.-Lavar en Agua.
8.-Fucsina Básica…5min.
9.-Lavar en Agua.
10.-Solución de Gallegos…1min.
11.-Lavar en Agua.
12.-Acetona…30seg.
13.-Solución Acido Pícrico y Acetona…2min.
14.-Solución Xilol y Acetona…2 Baños
Resultados:
Bacterias Gram Positivas de: Azul, Violeta
Bacterias Gram Negativas de: Rojo
Fondo Amarillo.
Técnica de Fite Faraco.
Objetivo: Demostración de BAAR.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Carbol-Fucsina
Agua…50ml.
Fenol (fundido, a baño maría)…2.5ml.
Alcohol ABS…5ml.
Fucsia Acida…0.5gr.
Acido Sulfúrico al 5%
Acido Sulfúrico…5ml.
Agua…95ml.
Verde Brillante al 1%
Verde Brillante…1gr.
Agua…100ml.
Solución Xilol-Aceite de Oliva
Xilol…50ml.
Aceite de Oliva…50ml.
Procedimiento:
1.-Xilol-Aceite de Oliva a 60*C…30min.
2.-Lavar en Agua Jabonosa.
3.-Lavar en Agua.
4.-Carbol-Fucsina…20min.
5.-Lavar en Agua.
6.-Decolorar con Acido Sulfúrico (por goteo).
7.-Lavar en Agua.
8.-Verde Brillante…1min.
9.-Secar al Aire.
10.-Aclarar y Montar.
Resultados:
BAAR…Rojo Brillante.
Demás Tejido…Verde.
Técnica de Grocott.
Objetivo: Demostrar Hongos.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Acido Crómico al 4%.
Acido Crómico (Trióxido de Cromo)…4gr.
Agua…100ml.
Agua…100ml.
Metenamina al 3%.
Metenamina…3gr.
Agua…100ml.
Bórax al 5%.
Bórax…5gr.
Agua…100ml.
Solución Nitrato de Plata-Metenamina (Stock).
Nitrato de Plata al 5%…5ml.
Metenamina al 3%…100ml.
Nota: Agitar bien y guardar en refrigeración.
Solución Nitrato de Plata-Metenamina (Trabajo).
Nitrato de Plata-Metenamina (Stock)…25ml.
Agua Bidestilada…25ml.
Bórax al 5%…2ml.
Bisulfito de Na al 2%.
Bisulfito de Sodio…2gr.
Agua…100ml.
Cloruro de Oro al 0.2%.
Solución Madre de Cloruro de Oro al 1%…20ml.
Agua…80ml.
Nota: La solución madre se hace con una ampolla de 1ml de Cloruro de Oro en 99ml de agua.
Verde Luz al 0.2%.
Verde Luz…0.2gr.
Agua…100ml.
Procedimiento:
2.-Acido Crómico al 4%…1hr.
3.-Lavar en Agua.
4.-Solución Nitrato de Ag-Metenamina (Trabajo) a 60*C…1hr.
5.-Lavar en Agua.
6.-Cloruro de Oro al 0.2%…3min.
7.-Lavar en Agua.
8.-Bisulfito de Sodio 2%…1min.
9.-Lavar en Agua.
10.-Verde luz al 0.2%…1min.
11.-Lavar en Agua.
Resultados:
Mucina…Gris.
Demás tejido…Verde.
Hongos…Negros.
Técnica de Verhoeff.
Objetivo: Tinción de Fibras Elásticas.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Reactivo de Verhoeff.
Solución I.
Hematoxilina al 5% en Alcohol ABS.
Solución II.
Cloruro Ferrico al 10%
Solución III (Lugo)
Yodo…2gr.
Yoduro de Potasio…4gr.
Agua destilada hirviendo…100ml.
Nota: Mezclar
Solución I…40ml.
Solución II…16ml.
Solución III…16ml.
Cloruro Ferrico al 2%.
Cloruro Ferrico…2gr,
Agua…100ml.
Alcohol de 96*.
Colorante Van Gienson.
Solución Saturada de Acido Pícrico… 95ml.
Acido Acético… 1ml.
Procedimiento:
2.-Reactivo de Verhoeff…2min.
3.-Lavar en Agua.
4.-Cloruro Ferrico al 2%…1min.
5.-Alcohol de 96*…1min.
6.-Lavar en Agua.
7.-Van Gienson…1min.
8.-Lavar en Agua.
Resultados:
Fibras Elásticas…Café o Negro.
Demás Tejido…Rojo
Técnica de Tricromica de Masson.
Objetivo: Tinción de Fibras Colágenas.
Fijador: Bouin.
Corte: 4-6 micras.

Reactivos:
Hematoxilina Ferrica de Weigerth.
Solución (A).
Hematoxilina al 1% en Alcohol ABS…0.5gr.
Solución (B).
Cloruro Ferrico al 29%…4ml.
Agua destilada…95ml.
Escarlata de Biebrich.
Escarlata de Biebrich al 1%…90ml.
Mordente.
Acido Fosfotugstico…2.5gr.
Acido Fosfomoliboico…2.5gr.
Agua…100ml.
Azul de Anilina.
Azul de anilina…2.5gr.
Agua…100ml.
Acido Acético Glacial al 1%.
Acido Acético Glacial 1ml.
Agua…99ml.
Alcohol ABS…99ml.

Alcohol ABS…99ml.
Procedimiento:
2.-Fijador de Bouin a 60*C….5min. (O 24Hrs a Temperatura Ambiente).
3.-Lavar en Agua.
4.-Hematoxilina Ferrica…5min.
Nota: Preparar antes de tinción mezclando cantidades iguales de Solución A y Solución B.
5.-Lavar en Agua.
7.-Lavar en Agua.
8.-Escarlata de Biebrich…4min.
9.-Lavar en Agua.
10.-Mordente…5min.
11.-Lavar en Agua.
12.-Azul de Anilina…3min.
13.-Acido Acético Glacial al 1%…1min.
14.-Lavar en Agua.
Resultados:
Fibras Colágenas…Azul.
Núcleos…Obscuros.
Músculo, Citoplasmas y Eritrocitos…Rojos.
Técnica de Retículo de Gomori.
Objetivo: Demostrar Fibras Reticulares.

Corte: 4-6 micras
Reactivos:
Permangonato de K al 0.5%.
Permangonato de K…0.5gr.
Agua…100ml.
Metabisulfito de Potasio al 2%.
Metabisulfito de Sodio…2gr.
Agua…100ml.
Sulfato Ferrico Amoniacal al 2%.
Sulfato Ferrico Amoniacal…2gr.
Agua…100ml.
Agua…100ml.
Hidróxido de Potasio al 10%.
Hidróxido de Potasio…10gr.
Agua…100ml.
Cloruro de Oro al 0.2%.
Solución Madre de Cloruro de Oro al 1%…20ml.
Agua…80ml.
Nota: La solución madre se hace con una ampolla de 1ml de Cloruro de Oro en 99ml de agua.
Formol al 20%.
Solución de Formaldehído al 37-40%…20ml.
Agua…80ml.
Diosulfato de Sodio al 2%.
Diosulfato de Sodio…2gr.
Agua…100ml.
Verde Luz al 0.2%.
Verde Luz…0.2gr.
Agua…100ml.
Nota: El Nitrato de Plata se prepara antes de la tinción: A 4 partes de el Nitrato de Plata (ejem: 8ml.)Agregar una parte de
Hidróxido de Potasio (2ml.) Se formara un precipitado de color gris el cual se disuelve agregando gota a gota de Hidróxido
de Amonio concentrado. Estable por unas Horas.
Procedimiento:
2.-Permangonato de Potasio al 0.5%…1min.
3.-Lavar en Agua.
4.-Metabisulfito de Potasio al 2%…1min.
5.-Lavar en Agua.
6.-Sulfato ferrico Amoniacal al 2%…5min
7.-Lavar en Agua.
8.-Reactivo de Plata…10min.
9.-Lavar en Agua.
10.-Formol al 20%…3min.
11.-Lavar en Agua.
12.-Cloruro de Oro al 0.2%…3min.
13.-Lavar en Agua.
14.-Metabisulfito de Potasio 2%…1min.
15.-Lavar en Agua.
16.-Diosulfato de Sodio al 2%…1min.
17.-Lavar en Agua.
18.-Verde luz al 1%…1min.
19.-Lavar en Agua.

Técnica de Grimelius.
Objetivo: Demostrar Gránulos Argirofilos.
Fijador: Bouin.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Impregnación: Solución de Plata 1%.
Nitrato de Plata al 1%...4ml.
Buffer de Acetato (0.2mol)…10ml.
Reducción: Solución de Hidroquinona.
Hidroquinona…1gr.
Sulfato de Sodio…5gr.
Procedimiento:
2.-Solución de Plata 58* a 60*C…3Hrs.
3.-Lavar en Agua.
4.-Solución de Hidroquinona 40* a 45*C…1:30Hrs.
5.-Lavar en Agua.
Resultados:
Gránulos Argirofilos…Pardo, Dorado o Negros.
Fijadores de tejido.
El formaldehido comercial (formol fuerte), es una solución saturada de gas formaldehido en agua, entre un 37 y 40% (para
fines prácticos se considera al 100%).
1.- Solución salina formolada al 10%:
Formol comercial………………………100 ml.

Agua destilada………………………… 900 ml.
Cloruro de sodio………………………… 8.5 gr.
2.- solución formol neutro amortiguado al 10%:
Formol comercial………………………….. 100 ml.
agua destilada……………………………… 900 ml.
Fosfato de ………………………………. 3.5 gr.
Fosfato de ………………………………. 6.5 gr.
3.- solución McManus-Baker (cobalto, calcio, formol) para lípidos:
Formol comercial………………………………………… 10 ml.
Agua destilada……………………………………………. 80 ml.
Cloruro de calcio al 10%................................ 10 ml.
Sulfato de nitrato de cobalto…………………………. 1 gr.
Fijadores de formol complejos o especiales:
4.- Solución de formol con acetato de Calcio Lillie:
Formol comercial………………………….. 10 ml.
Agua destilada……………………………… 90 ml.
Acetato de calcio monohidratado….……... 2 gr.
5.- Solución de formol con bromuro de aluminio de Cajal:
Formol comercial…………………………… 50 ml.
Agua destilada…………………………….... 500 ml.
Bromo de calcio…………………………….. 2 gr.
6.- Solución fijadora Gough-Wentowrth (para cerebro o pulmón entero):

Formol comercial…………………………….. 50 ml.
Agua destilada………………………………. 500 ml.
Acetato de sodio……………………………… 20 gr.
Fijadores metalicos
7.- Fijador zenkere:
Cloruro Mercúrico……………………………. 50 gr.
Bicromato de Potasio………………………... 25 gr.
Sulfato de Sodio……………………………… 10 gr.
Agua destilada……………………………….. 100 ml.
NOTA: se añaden 50ml. (5%) de acido acético glacial
Inmediatamente antes de usarlo.
8.- Fijador Susa de Heindenhain:
Cloruro de Mercúrico…………………………. 45 gr.
Cloruro de sodio………………………………. 5 gr.
Formol comercial……………………………... 200 ml.
Agua destilada………………………………… 800 ml.
Acido acético glacial………………………….. 40 ml.
Tricloracetico…………………………………… 20gr.
Fijadores de cromato
9.- Liquido de orth:
Dicromato de potasio al 2% en agua………. 100 ml.
Sulfato de sodio……………………………… 1 gr.
Formol…………………………………………. 10 ml.
10.- liquido de Regaud (Moller):
Dicromato de potasio al 3%.......................... 80 ml.
Formol………………………………………… 20 ml.
Fijadores a base de plomo:
11.- Nitrato de plomo formolado alcohólico de Lillie:
Nitrato de plomo………………………………. 8 gr.
Formol comercial…………………………….. 10 ml.
Agua……………………………………………. 10 ml.
Alcohol etílico absoluto………………………… 80 ml.
12.- subacetato de plomo:
Subacetato de plomo…………………………. 8 gr.
Formol…………………………………………. 25 ml.
Agua……………………………………………. 100 ml.
Acido acético (para volver transparente la
Solución)………………………………………… 2 ml.
Fijación en acido pícrico:
13.- Liquido de bouin:
Solución acuosa saturada de
AC. Pícrico………………………………. 75 ml.
Formol……………………………………. 25 ml.
Acido acético glacial…………………….. 5 ml.
Fijación en alcohol:
14.- Fijador de carnoy:
Alcohol absoluto…………………………. 60 ml.
Cloroformo………………………………. 30 ml.
Acido acético glacial……………………. 10 ml.
Fijadores con sales minerales
Fijador de zenker
Cloruro de mercurio (Hg CL2)…………………. 50 gr.

Dicromato de potasio…………………………… 23 g.
Sulfato de sodio…………………………………. 10 g.
Agua destilada…………………………………… 100 ml.
Se añaden 50ml. de acido glacial a esta solución antes
de usarla o sea al 5% este es un buen fijador general que
conviene para los tejidos corrientes.
Es pesor de las piezas hasta 3mm.
Duración de la fijación. 6 a 24 horas.
Lavado en agua y enseguida con alcohol yodado que contiene
como función la de eliminar los pigmentos de mercurio en los tejidos.
Alcohol yodado.
Alcohol de 96…………………………………. 100 ml.
Solución saturada de yodo………………….. 0.5 %.
En lo que se refiere a los tejidos ya se sigue el mismo procedimiento para
eliminar los restos del mercurio seguido de un lavado de tiosulfato de sodio
al 5% durante 5 minutos para eliminar los restos de yodo.
Fijador de Hely Zenker Formol.

Este fijador es completamente igual que el Zenker excepto en cuanto al acido
en cuanto al acido acético que en este se cambia por formol.
Los resultados con este son mucho mejores de que si se dejan por más de 2 días dentro de este los cortes se vuelven
quebradizos.
Fijadores de cromo:
Liquido de ORTH.
Dicromato de potasio………………………………… 2.5 gr.
Agua………………………………………………….. 100 ml.
sulfato de sodio……………………………………….. 1 gr.
formol antes de su uso……………………………….. 10 ml.
Liquido de Regaud Moller.
Dicromato de potasio al 3%........................................ 80 ml.
formol concentrado………………………………….... 20 ml.
Se añade antes del uso.
Ventajas de los fijadores de cromo.
Se recomienda para la demostración de mitocondrias aparato de Golgi,
figuras mitóticas, tejidos que contengan coloide y eritrocitos.
Estos se recomiendan para los tejidos como fines por ejemplo, medula suprarrenal.
Técnicas de uso.
1.-grosor de los cortes de 2 a 3 mm
2.-lavado en agua de 2 a 24 horas
3.-evitar la fijación excesiva (la que produce una oxidación).
Fijadores a base de acido pícrico:
Fijador de Bouin.
Acido pícrico, solución saturada…………………………… 75 ml.
Formol concentrado………………………………………… 25 ml.
Acido acético………………………………………………... 5 ml.
Ventajas del fijador de Bouin.
Es uno de los mejores fijadores de glucógeno; penetra rápidamente y resulta muy específico para las coloraciones
tricromicas.
Elección de fijadores:
El fijador que debe emplearse en todo caso, depende de la clase de estudio a realizar.
estudios citológicos (acido osmico, fijación nuclear Zenker formol para fijar el citoplasma.
estudios histoquímicas.- alcohol absoluto, de 96 grados o agentes físicos (calor, frio, desecación, etc.)
estudios generales topográficos.- Zenker, Helly, Bouin, o a falta de esto formol neutro al 10%.
Duración de la fijación
Varía en relación al poder de penetración del fijador, el volumen de la pieza y de la temperatura de los fijadores. Para el
Helly y el Zenker de 12 a 24 hs. con el Bouin de 1 a 3 días. El lavado de las piezas depende también del tipo de fijador; con
Zenker el lavado es de 12 a 24 hs. con el Bouin, un lavado ligero.
Factores especiales que modifican la fijación:
debe de tomarse en cuenta que aparte del grosor de fragmento por fijar se debe tomar en cuenta la naturaleza del material,
puesto que de ella depende el tiempo de fijación. La grasa, el moco y otras substancias que pueden estar envolviendo los
tejido retardan la fijación, porque la penetración es lenta y a veces resulta casi imposible sino se elimina parcial mente o
totalmente estas materias.
Se debe considerar también a los medios físicos como factores positivos en la fijación, puesto que estos la aceleran. Un caso
físicamente es el realizado por medio de las fijación y con ayuda de calor de 37 a 56 grados, se acelera le fijación en los
casos que preside de estos medios por la urgencia de un diagnostico, estos medios resultan muy útiles.

Técnicas Histoquimicas

Enviado por

Dados do documento

Título original

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Técnicas Histoquimicas

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Técnica de Pearls.

Objetivo: Demostrar Hierro.

Fijador: Formol al 10%.

Corte: 4-6 micras.

Acido Clorhídrico 10% (a).

Ferrocianuro de Potasio 10% (b).

Nota: Poner partes iguales A y B.

Alumbre de amonio o de potasio…5gr.

Nota: Se puede suprimir la Eosina por el Rojo Nuclear o Van Gienson.

4.-Hematoxilina de Mayer…5-8 min.

9.-Deshidratar, Aclarar y Montar.

Objetivo: Demostrar Melanina.

Fijador: Formol al 10%.

Corte: 4-6 micras.

Solución de Sulfato Ferroso al 2.5%.

Ferrocianuro de Potasio 2% (A).

Acido Acético al 2% (B).

Acido Acético Glacial…2ml.

Colorante Van Gienson.

Solución Saturada de Acido Pícrico…95ml.

Fucsina Acida al 1%…5ml.

2.-Sulfato Ferrico 2.5%…1Hr.

4.-A y B se mezclan en partes iguales…30min.

5.-Lavar en Acido Acético 2%.

6.-Contraste Van Gienson…3min.

8.-Deshidratar, Aclarar y Montar.

Técnica de Azul Alcian ph. 2.5

Objetivo: Demostrar Mucina Acida.

Fijador: Formol al 10%.

Corte: 4-6 micras.

Acido Acético al 3%.

Acido Acético Glacial…3ml.

Rojo Nuclear Rápido.

Filtrar y Agregar Tymol como conservador.

2.-Acido Acético al 3%…3min.

5.-Rojo Nuclear… 5min.

7.-Deshidratar, Aclarar y Montar.

Objetivo: Demostrar Mucina.

Fijador: Formol al 10%.

Corte: 4-6 micras.

Solución de Acido Peryodico al 5%.

Acido Peryodico… 0.5gr.

Solución de Acido Clorhídrico 1N.

Reactivo de Schiff de Coleman.

*Dejarlo enfriar y luego agregar

Acido Clorhídrico 1N…10ml.

*Dejarlo aclarar durante 24Hrs y luego agregar:

Nota: Dejarlo en refrigeración hasta que quede incoloro.

4.- Reactivo de Schiff…40min.

5.-Lavar en Agua Caliente…10min.

8.-Deshidratar, Aclarar y Montar.

Hongos… Rojo a Púrpura.

Técnica de P.A.S. con Diastasa.

Objetivo: Demostrar Mucina.

Fijador: Formol al 10%.

Corte: 4-6 micras.

Solución de Acido Peryodico al 5%.

Acido Peryodico… 0.5gr.

Solución de Acido Clorhídrico 1N.

Reactivo de Schiff de Coleman.

*Llevarlo a Punto de Ebullición.

*Dejarlo enfriar y luego agregar

Acido Clorhídrico 1N…10ml