UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA

MOLINA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

CURSO: QUÍMICA ANALÍTICA-LABORATORIO

INFORME DE PRÁCTICA N°9

Espectroscopía de absorción molecular UV - visible

Determinación de absortividad molar y longitud de onda máxima
absorbancia

Alumno Código
Jachilla Oblitas, Esthefany 20170230
Mendez Reyes, Joselin 20170265
Morocho Rodriguez, Marcello 20170248
Ramirez Quispe, Aldair 20161143

Horario de práctica: miércoles (11:00 am-1:00 pm)

Profesora: Melissa Rabanal
Fecha de práctica: 7/11 /2018
Fecha de Entrega:14 /11 /2018
LA MOLINA-LIMA-PERÚ
OBJETIVOS

 Calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de un cromóforo a partir de

un espectro de absorción.
 Construir una curva de calibración.

RESUMEN

En la presente práctica se empezó midiendo la absortividad molar y longitud de máxima

absorbancia del KMnO4 y la segunda actividad fue construir una curva de calibración.

Para hallar la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia, tomamos 10 mL de KMnO 4, lo

vertimos en una fiola de 50 mL y lo enrazamos con H2SO4 de 0,02 M, seguidamente se tuvo que
agitar la solución para que se homogenice. Luego, se lleno una cubeta de cuarzo solo con el H2SO4
(blanco), para poder llevar la absorbancia a cero, y después se colocó la solución de la fiola en la
otra cubeta, previamente enjuagada con la misma solución, para empezar las mediciones con
diferentes longitudes de onda con un intervalo de 5 nm cada una.

Para construir la curva de calibración se utilizo 6 tubos de ensayo a los cuales se le agrego 0.5, 1, 2,
3, 4 y 5 mL de KMnO4 de se enrazo con H2SO4 hasta los 10 mL, agitando los tubos de ensayo para
homogenizar la solución. Luego, se llevó a cero la absortividad de la cubeta contenida con el ácido
(blanco), seguidamente se empezó a medir la absortividad de cada disolución colocadas en las
cubetas de cuarzo, previamente enjuagadas con la misma solución.

Finalmente, el valor de absortividad del KMnO4 fue A =3.01 y la longitud de máxima absorbancia
fue de λ (máx)=535 nm. Y la función de la curva de calibración fue y = 0.2766x - 0.2109.
INTRODUCCIÓN

La espectroscopía, es una de las técnicas instrumentales más utilizadas en la actualidad porque

tiene una amplia aplicación en sectores como la medicina, las ciencias ambientales, la toxicología,
etc. Debemos de recalcar que la espectrofotometría mide la respuesta de la materia con la
radiación electromagnética, esta radiación presenta un espectro electromagnético, de donde se
trabaja mas con la radiación UV y visible. La respuesta de la materia a esta radiación puede ser una
absorción, una emisión, una difracción, una refracción, una dispersión o una rotación, en todos
estos casos estamos viendo a la radiación como una onda y no como un corpúsculo o fotón.

En los métodos espectrométricos, la muestra en solución absorbe radiación electromagnética

procedente de una fuente adecuada, y la cantidad absorbida se relaciona con la concentración del
analito en la solución. Una solución que contenga iones cobre (II) es azul porque absorbe el color
complementario, el amarillo, de la luz blanca, y transmite la luz azul restante. Cuanto más
concentrada sea esa solución de cobre, más luz amarilla absorbe, y el color azul que resulta en la
solución se hace más intenso. En un método espectrométrico, se mide la cantidad de esta luz
amarilla que se absorbe y que se relaciona con la concentración. (Gary D, 2009)

El presente informe nos detallara como el analito interactúa de mayor o menor manera con las
diferentes longitudes de onda que nos proporciona el espectrofotómetro, además reconoceremos
la importancia de las muestras blanco, que ayuda a preparar la muestra, sino que también en la
parte experimental. También, realizaremos la curva de calibración, de donde se hallará una
ecuación de la recta de primer grado, que representa la relación directa entre la concentración y
absorbancia máxima del KMnO4, y podamos deducir las diferentes concentraciones del analito
solo a partir de la determinación de la absorbancia.
 PARTE EXPERIMENTAL

1. Actividad 1 : Hallar la longitud de onda máxima

1 Coger 10 ml de KMnO4 (0.02M), verterlo a la fiola de 100ml, y enrazarlo con H2SO4 (0.25 M)

2 La solución deberá ser evaluada en el espectrofotómetro. Para calibrar deberá presionarse los
botones: mode, absorbancia y luego escoger la longitud de onda a analizar.

Mode

Aumentar o Absorbancia
disminuir (λ)

3 Las cubetas de cuarzo deben cogerse por la parte áspera y enjuagarla (2-3 veces) con un poco de
la disolución. Luego con la misma solución llenar la cubeta.
4 Colocar en la primera columna la cubeta que contiene al blanco (H2SO4 (0.25 M)) y segundo la
disolución del KMnO4 . Se analizará la absorbancia del KMnO4 con diferentes longitudes de onda
hasta hallar la onda máxima.

TABLA Y GRÁFICO DE LONGITUD DE ONDA Y ABSORBANCIA

λ (nm) A
400 0.183 Gráfico de longitud de onda y absorbancia
405 0.113 3.5
410 0.074 3
415 0.048
2.5
ABSORBANCIA

420 0.04
2
425 0.045
430 0.059 1.5
435 0.078 1
440 0.111
0.5
445 0.153
0
450 0.215
400 450 500 550 600
455 0.295 LONGITUD DE ONDA (nm)
460 0.373
465 0.49
470 0.67
475 0.806 λ𝑚á𝑥 = 535 nm y A =3.01
480 0.961
485 1.232
490 1.472
495 1.642
500 1.922
505 2.333
510 2.436
515 2.498
 520 2.959
525 3.01
530 3.01
535 3.01
540 3.01
545 3.01
550 2.507
555 2.21
560 1.905
565 1.823
570 1.752
575 1.4
580 0.93
585 0.605
590 0.43
595 0.365
600 0.331

2. Actividad 2 : Análisis de absorbancia con diferentes concentraciones

1 En 6 tubos de ensayo verter (0.5 ; 1 ; 2 ; 3 ; 4 ; 5 ) ml de KMnO4 respectivamente, luego agregar

𝐻2 𝑆𝑂4 a cada tubo hasta completar 10 ml en cada tubo.

6 5 4 3 2 1
2 Se repetirá el procedimiento de la Act. 1 para hallar la absorbancia de cada tubo usando la
longitud de onda máxima ya conocida.

Verter en una cubeta de cuarzo el contenido de Colocar la cubeta en el espectrofotómetro,

un tubo diferente. el análisis de la absorbancia de cada cubeta
será en diferentes momentos.

1 × 10−6 g 10 ml
A. Cálculo de las concentraciones en cada tubo de ensayo:
KMnO4 (0.02M) 𝐶𝐶1 1000 ml
0.02g 1000 ml 2 × 10−4g 100 ml 𝐶𝐶1 = 1 × 10−4M
X 10 ml Y 0.5 ml 𝐶𝐶2 = 2 × 10−4 𝑀
X = 2 × 10−4g Y = 1 × 10−6 g 𝐶𝐶3 = 4 × 10−4 𝑀

𝐶𝐶4 = 6 × 10−4 𝑀

𝐶𝐶5 = 8 × 10−4 𝑀

𝐶𝐶6 = 1 × 10−3 𝑀
 TABLA Y GRÁFICO DE CONCENTRACION Y ABSORBANCIA

CC A
ST 1 0.0001 M 0.128
ST 2 0.0002 M 0.291
ST 3 0.0004 M 0.586
ST 4 0.0006 M 0.887
ST 5 0.0008 M 1.183
ST 6 0.001 M 1.469

1.6

1.4

1.2

1
ABSORBANCIA

0.8

y = 0.2766x - 0.2109
0.6
R² = 0.9939

0.4

0.2

0
0 1 2 3 4 5 6 7
CONCENTRACIÓN (M)
DISCUSIONES

Para la obtención de la longitud de onda a una máxima absorbancia, los valores experimentales de
la absorbancia (A) proporcionados por el espectrofotómetro fueron inversamente proporcionales
en relación con la longitud de onda (λ), hasta que el valor de esta última (λ) llego a 430 nm, desde
aquí comenzó a incrementarse el valor de la absorbancia(A). Luego desde el valor de 525 hasta
545 nm el valor de la absorbancia fue de 3,010 y permaneció constante, hasta llegar a 550 nm
donde nuevamente hubo un declive de valores de absorbancia(A).

Basándonos en el libro del autor Raquel Bermejo Moreno, 2014, es algo aparentemente normal la
presencia de valores constantes, en este caso cinco valores constantes de absorbancia (3,010),
debido que el pico máximo de longitud de onda permanece estable. Lo que muestra que no hubo
valores irregulares en la obtención de la longitud de onda óptima para la máxima absorbancia y se
toma como valor de landa máximo el promedio de estos cinco valores arrojados que es de 535 nm.
(Moreno, 2014)

Por otro lado, la elaboración de la curva de calibración tuvo ligeras desviaciones, esto pudo
deberse a que se dejó reposar los tubos de ensayo con las diferentes concentraciones del analito
por un tiempo relativamente prolongado, aproximadamente 25 minutos, lo que podría generar
una leve sedimentación y la heterogeneidad de la sustancia al momento de pasar por el
espectrofotómetro y de alguna forma verse afectado el resultado, prueba de ello es que el
espectrofotómetro no arrojaba a veces valores exactos. Según el manual de prácticas de
bioquímica elaborado por el departamento de química de la UNALM, se dice que toda solución
que pase por el espectrofotómetro debe estar homogenizada con antelación para evitar cualquier
error sesgado y que este tiempo de espera debe tratarse de reducir al mínimo si se dese obtener
datos con alta precisión y confiabilidad. También debemos considerar la posibilidad de alguna
impureza tanto en la muestra de permanganato de potasio como en la de ácido sulfúrico con el
que se enrasó, estos factores pudieron influir en la lectura del espectrofotómetro UV- visible
alterando así la curva de calibración. Además, siempre se debe asegurar que el espectrofotómetro
UV – visible este libre de otras sustancias o polvo que pueda actuar como una interferencia en la
misma lectura.

A su vez la controversia generada respecto a la utilización del agua destilada o del ácido sulfúrico
como blanco radicaba en que cual debía ser implementado antes de la operación, leyendo
bibliografía al respecto se determinó que su uso varía entre estos dos y que la diferencia es
minúscula. Por lo que probablemente se sugería que se use agua destilada para evitar consumo
innecesario de material de laboratorio.
CONCLUCIONES

 La λ𝑚á𝑥 del KMnO4 (0.02M) es 535 nm.

 La ecuación de la curva de calibración es y = 0.2766x - 0.2109.

BIBLIOGRAFÍA

 Moreno, R. B. (2014). Análisis instrumental. Madrid: Síntesis.

 Skoog, D. (2008). Principios de análisis instrumental. Mexico DF: Cengage Learning.

 Gary, D., (2009). Química Analítica. Universidad de Washington. USA. p 457- 458.
 Hernández Hernández,L. , González Pérez, C. 2002. Introducción al análisis instrumental.
Edición 1. Editorial Ariel. Barcelona, España. 464 p.
CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el propósito e hipótesis de la práctica 9?

Propósito: Calcular en un cromóforo la absortividad molar y la longitud de onda de máxima

absorbancia a partir de un espectro de absorción y con los datos elaborar una curva de calibración.

Hipótesis: La absorbancia es directamente proporcional a la concentración de las sustancia, se

calcula con la absortividad molar y varía con la longitud de onda (de máxima absorbancia).

2. ¿Cree usted que ha logrado esa competencia?

Si, ya que en el espectrofotómetro se pusieron varios valores de longitud de onda , consiguiendo

el espectro de absorción donde se identificó la longitud de onda de máxima absorbancia, y con
ello se halló absortividad molar. Además considerando el protocolo de cada actividad, el equipo
de espectroscopia y dichos reactivos que se emplearon, se logró determinar los datos para cada
unidad correspondida y de esa manera construir la curva de calibración.

3. Explique la espectroscopia de absorción molecular UV-VIS. Aplicaciones

La espectroscopia UV-VISIBLE se basa en la absorción de radiación UV-VISIBLE por un analito. Se

origina un estado excitado y luego elimina su exceso de energía en forma de calor.

4. ¿Qué son los colores complementarios? Explique.

La luz visible (400 nm - 780 nm aproximadamente) está conformada por varias vibraciones
electromagnéticas con diversas longitudes de onda. Todas estas partes en conjunto dan como
resultado el color blanco; sin embargo, la ausencia de una cierta longitud de onda da como
resultado una luz de algún color. De esta manera el color percibido por el ojo humano es en
realidad el conjunto de todas las longitudes de onda reflejadas o no absorbidas por la sustancia. En
cambio, el color complementario es el conjunto de las longitudes de onda absorbidas por la
sustancia.

5. Explique la ley de Lambert y Beer. Defina transmitancia y absorbancia. ¿Cuál es la relación

entre ellos?

-Según la Ley de Beer, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de la

especie absorbente c y a la longitud de trayecto de b del medio de absorción, como se expresa en
la siguiente ecuación: A = log (Po/P) (SKOOG 2008). En caso de que se considere una radiación
monocromática se verifica que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de
la especie responsable de la absorción. Esta relación se conoce como la Ley de Lambert-Beer y se
representa matemáticamente con la siguiente ecuación: A = ϵ.l.c Donde ϵ representa la
absorbancia específica o absortividad de la especie que absorbe. Depende de la naturaleza del
cromóforo y de las condiciones experimentales (disolvente, temperatura, pH, etc.); por eso,
aunque estos valores se pueden encontrar tabulados para muchas sustancias químicas, se hace
necesario un calibrado analítico para determinar exactamente la relación entre la absorbancia y la
concentración del analito en las condiciones del análisis. La letra l es el paso óptico: longitud
atravesada por la radiación electromagnética a través del medio absorbente. La letra c

es la concentración de la especie absorbente (o del cromóforo). (BERMEJO 2014). -La absorbancia

es la cantidad de radiación electromagnética que ha sido absorbida por el analito. Mientras
que la transmitancia es la radiación electromagnética que podido pasar a través del analito.

-Relación de la absorbancia con la transmitancia: La absorbancia A de una solución se

relaciona con la transmitancia de manera logarítmica, como lo indica la siguiente ecuación:

A = -log T = log (Po/P)

Se observa que se reduce la transmitancia a medida que aumenta la absorbancia de la

solución. Las escalas en los primeros instrumentos eran lineales en transmitancia, los
instrumentos modernos tienen escalas de absorbancia lineales o un computador que calcula la
absorbancia a partir de las medidas. (Skoog, 2008)

6. A que se refiere la naturaleza dual de la radiación electromagnética. ¿Cuales son las regiones
del espectro electromagnético? ¿Cual es la ecuación que relaciona la velocidad de la luz con la
frecuencia? ¿Cual es la ecuación de plank?

 El comportamiento dual onda-partícula es la mejor descripción de la radiación

electromagnética actualmente. Dependiendo del tipo de experimento realizado, el
comportamiento de la luz se puede explicar cómo ondulatorio (ondas electromagnéticas) o
como partículas (fotones).
 El espectro electromagnético ha sido dividido en diferentes regiones cuyos límites son más o
menos arbitrarios y dependen en buena medida en nuestra capacidad de poder producir o
detectar esas regiones del espectro.

 La frecuencia (f) de un campo, señal u onda electromagnética es el número de ciclos (paso de

una polaridad a otra y vuelta a la primera) que realiza en cada segundo. En cambio, la longitud
de onda λ se define como la distancia que recorre una onda electromagnética en un tiempo
igual a un período. Para c = 3.108 m/s , es decir, la velocidad de la luz en el vacío o en el aire.
 Planck descubrió que su constante (h) está íntimamente ligada con la energía y en una de sus
ecuaciones fórmula que lo siguiente:
E=hν

Donde ν es la frecuencia, en este caso lo que se quiere decir es que la energía absorbida o
emitida en un proceso de interacción de un oscilador es proporcional a una constante por la
frecuencia en que oscila y está relacionada con la velocidad de la luz y la longitud de onda.
(ZAMARRIPA 2012)

7. Dibuje los componentes generales de un espectrofotómetro de absorción molecular. Indique

cual es la función de cada uno.

 La Lámpara: se utiliza como fuente de radiación.

 Lente: redirige la radiación hacia la rendija de entrada.
 Prisma: Se utiliza para separar una radiación específica de la luz visible (monocromador).
 Cubeta: Contiene el analito que va a absorber la radiación.
 Pantalla: registra la información de la radiación absorbida por el analito a una
determinada longitud de onda.

8. ¿Qué es un espectro de absorción? ¿Cómo se construye y qué información permite obtener?

El espectro de absorción es como una huella digital de una molécula en donde se encuentran
registrados todos los enlaces y sus transiciones correspondientes. Su gráfico presenta
ondulaciones con máximos y mínimos.

Se construye con el espectro de las longitudes de onda absorbidas que tiene la forma de una
secuencia de líneas o bandas oscuras, dentro de un espectro de luz continuo. Estas conocidas
como líneas de Fraunhofer en memoria de su descubridor, Joseph von Fraunhofer.

Permite identificar una molécula con bastante exactitud, observar la máxima y mínima
absorbancia y en qué longitud de onda se da.
 Figura. Espectro de absorción obtenido para una solución diluida de KMnO4

9. ¿Qué es una curva de calibración y cómo se construye?¿Cómo demuestras si la relación es

lineal o cumple con la ley de Lambert y Beer?

Una curva de calibración se determina experimentalmente, preparando una serie de soluciones de

concentración conocida y midiendo la absorbancia de cada una de ellas a la longitud de onda de
máxima absorbancia. Con los datos obtenidos se construyen curvas de absorción-concentración.
Generalmente la relación entre la concentración y la señal analítica es lineal y cumple con la ley de
Lambert y Beer, para la cual se procede a obtener la recta de regresión. Con esta recta se puede
estimar las concentraciones de muestras desconocidas por interpolación, pero teniendo en cuenta
el límite de detección del procedimiento analítico. Es muy importante tener en cuenta al
coeficiente de correlación ( r ), el cual es un parámetro utilizado para estimar el grado de ajuste de
los puntos experimentales a la recta, así si r2 es cercano a 1 cumple con la linealidad, de lo
contrario se llega a la denominada desviación de la ley. En la siguiente imagen se observa: la recta
de calibración con su respectivo coeficiente de correlación