1.

INTRODUCCIÓN
En el trabajo del laboratorio es de gran importancia la aplicación los procedimientos,
técnicas y productos que suprimen o disminuyen la vitalidad de los microorganismos
patógenos. No existe un procedimiento de esterilización y desinfección aplicable a
todos los casos. El método de esterilización será seleccionado para cada caso
teniendo en cuenta la naturaleza física del objeto y la naturaleza biológica del
contaminante. Como rara vez se conoce la población de microorganismos sobre un objeto
que debe ser tratado, debemos presuponer que se encuentran presentes las formas
microbianas más resistentes: las endosporas. El método de esterilización a emplearse debe
ser previamente valorado. Actualmente existen valores tabulados de tiempo de
exposición, temperatura y concentración de principios activos para los métodos de
esterilización más usados que nos permiten elegir el más adecuado para cada caso.
En la elección debe tenerse en cuenta también el uso posterior que le será dado (o
no) al objeto a esterilizar (Uercusblog.2016).
La esterilización del material de laboratorio es un proceso que permite eliminar la carga
microbiana patógena y no patógena, incluidas las esporas, de productos e instrumentos que
lo requieran como el instrumental o los medios de cultivo. Para que sea eficaz debe
realizarse sobre materiales limpios y respetando los parámetros y procedimientos definidos
para cada método. Según esta clasificación, los objetos considerados críticos deben
esterilizarse, los semi-criticos deben someterse a una desinfección de alto nivel y los no-
críticos deben limpiarse y someterse a una desinfección de bajo nivel. La esterilización
puede conseguirse usando calor, productos químicos y radiación. El método a elegir
dependerá del material a esterilizar y del equipo e instalaciones disponibles. Con los objetos
de acero inoxidable y de vidrio podemos usar cualquier método, pero en el caso de los
materiales plásticos debemos tener en cuenta su composición para evitar deformaciones e
incluso la destrucción del material (Marquez.2015).
Un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias que en conjunto
proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los microorganismos. La
composición de los medios de cultivo varía en función del grupo microbiano que se
pretende estudiar, y la preparación del medio depende de la complejidad química
(composición), el estado físico y otras condiciones requeridas (pH, concentración, etc.).
Existen medios de cultivo comerciales empleados para el desarrollo de los microorganismos
más comunes, sin embargo en muchas ocasiones se requiere preparar el mismo mediante la
mezcla de sus componentes. Para el estudio de los microorganismos es indispensable
 contar entre otras cosas con material y medios de cultivo estériles. En Microbiología la
esterilización se define como “el proceso mediante el cual se eliminan todos los
microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o superficie”
y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de
cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor
(seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones y
aplicación de gas de óxido de etileno (para jeringas y cajas de plástico) (Crisol.2017).
2. OBJETIVOS
 Objetivo General:
 Eliminar todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de los utensilios
y medios de cultivo.
 Objetivos Específicos:
 Determinar la importancia de la esterilización de medios de cultivo y utensilios de
laboratorio.
 Aplicar algunas metodologías para esterilizar medios de cultivo y utensilios.
 Identificar las formas o métodos de esterilizar medios de cultivo y utensilios.
3. MATERIALES
 Autoclave.
 Estufa.
 Medios de cultivo preparados con anterioridad.
 Vidriería y utensilios de laboratorio.
 Papel.
4. PROCEDIMIENTO
El procedimiento para la esterilización de medios de cultivo es:
 Taponar los matraces con algodón.
 Cubrir hasta del cuello los matraces con papel aluminio y amarrar.
 Introducir al autoclave los matraces con el medio de cultivo
 Cerrar herméticamente la autoclave
 Esterilizar el medio de cultivo a 121 ºC, luego de 20 a 30 minutos abrir el equipo tomando
las precauciones necesarias.
 Sacar los matraces, dejarlos enfriar y colocarlos en la refrigeradora

El procedimiento para la esterilización de utensilios y vidriería es:

  En volver con papel aluminio las cajas Petri u otros utensilios y sujetarlos con una cinta
adhesiva
 Colocarlos en la estufa y esterilizarlos a 110 ºC por 30 minutos
 Luego retirar y almacenar el material en un lugar adecuados
5. RESULTADOS
Esterilización de Vidriería y utensilios de laboratorio
Gráficos Descripción
Gráfico 1 Entre los materiales que se utilizan para la
dispensación de medios de cultivo, tenemos
las pinzas y bisturí. Estos son instrumentos
son de metal, por lo tanto se los debe
esterilizar por vapor, calor seco en una
estufa a una temperatura de 110 ºC en un
tiempo de 30 minutos. También se los puede
esterilizar con etanol y un mechero. Dentro
del material de vidrio tenemos frascos para
autoclavar, matraz, magenta, Estas se las
coloca en la autoclave, después de haber
sido lavado con abundante agua y jabón.

Esterilización de medios de cultivo

Gráficos Descripción
Gráfico 2 Para esterilizar medios de cultivo se utiliza la
autoclave a 121 ºC, luego de 20 a 30 minutos.
Para que la esterilización de medios de cultivo
sea eficaz, la temperatura y el tiempo
seleccionados deben alcanzarse en todo el
líquido. Los recipientes con cierre hermético
deben ser introducidos en la autoclave sin
cerrar totalmente el tapón, para facilitar la
entrada del vapor durante el proceso. Al
vaciar la autoclave después de la
esterilización procederemos a cerrar
totalmente estos recipientes.
 Equipos de Esterilización

Gráfico 3
Cámara de flujo laminar: Es un receptáculo en forma
generalmente prismática con una única cara libre (la
frontal) que da acceso al interior, donde se localiza la
superficie de trabajo, que normalmente permanece
limpia y estéril. El autoclave es un instrumento habitual
en los laboratorios de Microbiología. Es un sistema
cerrado donde se forma vapor de agua que se somete a
una presión elevada, una atmósfera, lo que hace que el
agua alcance una temperatura de 121ºC causando la
desnaturalización de enzimas lo que conlleva a la
muerte de los microorganismos y la destrucción de las
esporas. Habitualmente, se esteriliza a 121ºC durante
20 minutos (Barry.2002).
Gráfico 4 El autoclave esteriliza por vapor calor húmedo a una
temperatura de 121º C en un tiempo de 20 a 30 minutos
en este equipo se puede esterilizar medios de cultivo,
vidriería y utensilios Las ventajas del calor húmedos
son:

- Rápido calentamiento y penetración.

- Destrucción de bacterias y esporas en corto
tiempo.
- No deja residuos tóxicos.
- Hay un bajo deterioro del material expuesto.

(Patricia.1989)

6. DISCUSIÓN
Según (García.2013) menciona que “La presencia de microorganismos en todos los medios
ambientales hace imprescindible que para estudiar una bacteria determinada sea necesario destruir
todas aquellas que pudieran encontrarse contaminando los medios o los instrumentos de trabajo.
Esto se consigue mediante la esterilización, consistente en la destrucción de todo microorganismo”.
Existen diversos métodos de esterilización vistos durante la realización de la presente práctica,
entre ellos: calor (seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones y
aplicación etanol, cloro etc. El método de esterilización por calor es decir agente físico se
fundamenta en que todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del
calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas
y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos. Para el calor húmedo se ocupa la
autoclave y para el calor seco la estufa de esterilización. Para el método de esterilización químico,
podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antisépticos. Su efectividad dependerá de
la concentración, tiempo y pH. Estos lesionan la membrana celular de los microorganismos y
desnaturalizan proteínas celulares. Desorganizan la estructura fosfolipídica, no destruyen esporas y
tienen una acción germicida lenta. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los más utilizados
son el etanol e isopropílico. Existen diversos métodos cuya elección dependerá prioritariamente de
la naturaleza del material a esterilizar.
7. CONCLUSIONES
 Muchos de los experimentos y prácticas realizadas en laboratorios involucra la mezcla
de sustancias y sus correspondientes reacciones, así como inoculación en medios de
cultivo. Si el material de laboratorio cuenta con los requerimientos de limpieza los
experimentos son exitosos. Por el contrario, la presencia de bacterias, virus o
microorganismos puede alterar las reacciones y modificar los resultados. Para evitar
esto, es necesario aplicar algún método de esterilización al material de laboratorio. Uno
de los métodos más utilizados es el uso de hornos de esterilización y autoclave.
 La limpieza, desinfección y esterilización son tareas fundamentales para reducir los
riesgos en entornos donde se presenta una alta carga microbacteriana, principalmente
aquellos asociados con la contaminación. Por tanto, como parte de los programas de
limpieza y seguridad en el laboratorio, se deben implementar procesos que garanticen
que tal limpieza, desinfección y esterilización se realicen de manera correcta, según las
características específicas del tipo de trabajo realizado en cada entorno. Para comenzar
se debe realizar un lavado de instrumental y material para laboratorio. Una vez hecho
esto, se puede proceder a su desinfección, y en caso de ser requerido, a su esterilización.
Todos estos procedimientos se los debe realizar antes de cualquier práctica o trabajo de
laboratorio para así evitar la contaminación y perdida del material (medios de cultivo)
 Los procesos de esterilización son llevados a cabo, no solamente en el laboratorio, donde
son fundamentales para evitar la contaminación de medios, cultivos, placas etc. Las
formas de esterilizar pueden ser realizadas por varias técnicas por calor seco, calor
húmedo, radiación y filtración mismos que necesitan de un equipo especializado para
realizar cada una de estas técnicas nombradas anteriormente. Entre estas tenemos la
estufa para el calor seco, el autoclave para el calor húmedo, la cámara de flujo laminar
para la radiación.
 8. RECOMENDACIONES
 Antes de realizar cualquier práctica o trabajo de laboratorio se debe esterilizar correctamente
los utensilios para evitar contaminación en medios de cultivo.
 Manipular con mucho cuidado el mechero y el alcohol durante la esterilización de las pinzas
en la cámara de flujo laminar, para evitar accidentes.
 Conocer el funcionamiento adecuado de cada equipo para evitar daños en los equipos ya que
estos son muy costosos y accidentes que comprometan nuestra salud.
9. CUESTIONARIO
1, ¿Qué otros sistemas de esterilización se puede utilizar a nivel de laboratorio para
esterilizar utensilios?
Como métodos físicos tenemos:
 Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleicos,
estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los
microorganismos. Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales
termolábiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala
industrial por sus costos. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque
producen alteraciones de los componentes (French.1980).

Como métodos químicos tenemos:

 El óxido de etileno gaseoso: Es uno de los agentes químicos de esterilización usados
habitualmente con productos termosensibles que no soportan las temperaturas de los
procedimientos por calor. Por su capacidad de difusión en conductos muy estrechos suele
utilizarse para catéteres y similares. Es un agente alquilante capaz de destruir los
microorganismos, incluídos los viruz (López.1995).

2. ¿Cuál es la función de la esterilización?

La limpieza, desinfección y esterilización son tareas fundamentales para reducir los riesgos en
entornos donde se presenta una alta carga microbacteriana, principalmente aquellos asociados con
la contaminación. Por tanto, como parte de los programas de limpieza y seguridad en la industria
farmacéutica, alimenticia, bioquímica y en entornos de servicios sanitarios, se deben implementar
procesos que garanticen que tal limpieza, desinfección y esterilización se realicen de manera
correcta, según las características específicas del tipo de trabajo realizado en cada entorno. Para
comenzar se debe realizar un lavado de instrumental y material para laboratorio. Una vez hecho
esto, se puede proceder a su desinfección, y en caso de ser requerido, a su esterilización. Todas estas
tareas en los entornos que acabamos de mencionar se encuentran reguladas por una normativa
estandarizada y en todo caso están a cargo de personal capacitado para llevarlas a cabo de manera
satisfactoria (Amazonaws.2004).

3. ¿Qué pasará si la esterilización de los medios de cultivo se realiza a 60ºC por 10 minutos?
Los medios de cultivo contienen diferentes organismos que proceden de las diferentes materias
primas y de los recipientes utilizados. Estos organismos deben ser eliminados antes de la
inoculación para evitar falsos resultados. Existe una gran variedad de métodos de esterilización pero
el más utilizado es la esterilización por calor. Las células vegetativas se eliminan rápidamente y
a temperaturas alrededor de los 60ºC durante 5-10 minutos, sin embargo, para la
eliminación de las esporas se necesitan una temperatura de 121ºC durante 15 minutos
(García.2013).
4. Si no dispondría de autoclave ¿qué otro equipo podría utilizar para esterilizar medios de
cultivo y explique su principio de funcionamiento?
Óxido de etileno: Óxido (ETO) de esterilización de etileno consiste en colocar objetos que
necesitan esterilización en una cámara. Gas de óxido de etileno se bombea en, penetra a través de
cualquier envase y luego se aspira de forma continua. Todo el proceso puede tardar hasta 14 días.
Cualquier embalaje deberá ser poroso, de modo que el gas puede esterilizar cualquier equipo que
está contenido (Crisol.2017.

10. BIBLIOGRAFÍA
 Uercusblog.2016. Esterilización de material de laboratorio, En línea. Disponible en:
https://quercuslab.es/blog/esterilizacion-del-material-de-laboratorio/
 Marquez.2015. Importancia de la esterilización. En línea. Disponible en:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp3.pdf
 Crisol.2017. Importancia de la limpieza, desinfección y esterilización del material para
laboratorio. En línea. Disponible en: https://elcrisol.com.mx/importancia-la-limpieza-
desinfeccion-esterilizacion-del-material-de-laboratorio/
 Barry, A. y S. Gibson. 2002. Control de calidad en microbiología, en Dharan, M. Control de
Calidad en los Laboratorios Clínicos. Ed. Reverté. Sevilla, España. Collins C.H. y Lyn
 Patricia M. 1989. Métodos Microbiológicos. ACRIBIA. 524 pp Díaz, R., G. Gamazo e I.
 López Goñi.1995.Manual Práctico de Microbiología. 1ª edición. MASSON, S. A.
España
 FRENCH, E.R. y HERBERT, T. 1980. Métodos de investigación fitopatológica. Libros y
materiales educativos, nº 43. San José, Costa Rica, IICA. 289p. 632 FREm• Vignoli, R.
Esterilización, desinfección y antisepsia.
 Amazonaws.2004.Esterilización, desinfección y antisepsia. En línea. Disponible en:
http://ecaths1.s3.amazonaws.com/catmicromed/APUNTE%20esterilizacion,%20desinfeccio
n%20y%20antisepsia.pdf
 García, M., & López, Z. (2013). Tema 7: Métodos de Esterilización. | UVS Fajardo.
Retrieved October 11, 2018, from http://uvsfajardo.sld.cu/tema-7-metodos-de-esterilizacion