FACULTADDE Informe de Práctica de Laboratorio No.

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Laboratorio de Bioquímica
CIENCIAS EXACTAS Y
NATURALES

OXIDACIONES BIOLÓGICAS
Juan Sebastián Valencia 1711720052, María José Narváez Moreno 1711722029

Fecha de presentación dd/02/2019

Grupo de trabajo No. 2
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Resumen
Por medio de muestras cualitativas del extracto de papa con resorcinol, se determinara la actividad enzimática en una segunda prueba con lulos. En
primer lugar, se usaran pruebas simples en tubos de ensayo obteniendo coloraciones, para poder realizar el segundo procedimiento con extractos de
lulo maduro y verde, y así determinar la activación enzimática por medio de las polifenoloxidasas clasificadas como oxido reductasas que pueden
presentar inhibición o desnaturalización. Obteniendo como resultado que a altas temperaturas las enzimas se desnaturalizan presentando formación de
precipitados y coloraciones oscuras, y por el contrario, a bajas temperaturas se inhiben y con coloraciones traslucidas; por ello se debe encontrar las
condiciones óptimas para la activación enzimática y una buena velocidad de reacción de las enzimas.

Palabras Clave: Desnaturalización, Inhibición, Coloración, Enzimas, Oxido-Reducción.

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1. Introducción
Se dará a conocer la oxidación biológica debido a las enzimas
ya que la gran variedad de estas encargadas de catalizar Figura No 1
reacciones químicas en este caso en dos materiales vegetales Extracto de papa con resorcinol a 80 Cº.
como lo son la papa y el lulo, con respecto a tres factores
importantes como: la concentración, la temperatura y el pH.
Dependiendo de la cantidad de concentración de la enzima se de las enzimas se basa en disminuir la energía de activación del
determina la activación enzimática del metabolito. En cuanto a metabolito para poder llegar al producto mucho más rápido
la temperatura la actividad enzimática depende de rangos, por Como se puede observar en la siguiente figura Nº 2.
ejemplo a temperaturas superiores de 80 Cº tiende a presentarse
un aumento en la velocidad de reacción, además una
desnaturalización de la enzima, por el contrario a temperaturas
inferiores de 4 Cº esta se inhibe y disminuye la velocidad de
reacción. Respecto al pH este realiza un cambio en la estructura
de la enzima debido a las cargas del medio “cada enzima tendrá
su conformación más adecuada, y por lo tanto su máxima
actividad, alrededor de un valor concreto de pH, que recibe el
nombre de pH óptimo. El cambio, bien sea hacia valores más
altos o más bajos provocará una disminución de la actividad.”
(Pérez y Borge, 2011). De acuerdo a esto el trabajo primordial
1
 1.2 materiales necesarios para la practica

1.1 Instrumentos de laboratorio

Figura No 2. Grafica de activación enzimática. Para la ejecución de la práctica se necesitan los siguientes
instrumentos del laboratorio los cuales son:
Es así que las enzimas puedan someterse a dos situaciones, - Gradilla
inhibición y desnaturalización. Donde la inhibición es la - 12 tubos de ensayo
disminución de la actividad enzimática dada por un conjunto de - Baños maria a diferentes temperaturas (50º y 80º)
moléculas que se denominan inhibidores (Pérez y Borge, 2011) - Beaker con hielo
por ende se puede relacionar estrechamente con la conservación - Pipetas y Pipeteador ( NO BOCA)
de los alimentos, mientras que la desnaturalización es el daño - Material de rotulación
estructural de la enzima que puede presentarse cuando esta sobre - Mortero
la temperatura optima, teniendo en cuenta el uso de material - Cuchillo
vegetal es importante tener presente la participación de las
- Algodón
enzimas polifenoloxidasas las cuales son metaloenzimas que se
clasifican como óxido-reductasas dependientes de cobre, que - Embudo de caña corta
catalizan la reacción entre catecol y oxígeno para dar 1.2 Materiales necesarios para la practica
benzoquinona y otras quinonas (Mayorga. e Higuera 2007 ) son - Papa
las responsables del pardeamiento enzimático, este da como - Lulo maduro
indicación un color oscuro al sustrato. Para la determinación de - Lulo verde
la actividad enzimática en los extractos de los materiales - Reactivos (resorcinol {} , sulfato de amonio (NH4)
anteriormente mencionados. Para ello, es necesario la aplicación 2SO4 {1%} , 1 ml de solución 0.05 M buffer fosfato
de una buena técnica descrita en la guía de laboratorio como
también tener una técnica alternativa que ayude a la ejecución e
ilustración de una oxidación biológica que será expuesta en la 2. Procedimiento Experimental
discusión.
Procedimiento 1.
Por ende la importancia de tener como objeto de estudio las Efecto de la temperatura sobre la actividad de la enzima.
oxidaciones biológicas, es debido a que en su proceso se requiere La finalidad de este procedimiento es determinar, como a
un aceptor de electrones para poder realizar una reacción de diferentes temperaturas (0º, 20º, 50º,80º) se ve afectada la
óxido-reducción. Con ayuda de proteínas catalíticas como las actividad enzimática.
enzimas las cuales disminuye la energía de activación esto Se tomaron los ocho tubos de ensayo y se rotularon de la
favorece la velocidad de reacción para que los reactivos lleguen siguiente manera: A, A2 - B, B2 - C, C2 - D, D2; como se indica
más rápido a productos, como por ejemplo la conservación de en la figura No 3.
alimentos. Para iniciar se obtiene el extracto de papa, licuando estas; se
deposita en un beaker (Fig. 4) del cual con una pipeta (Fig. 5)
OBJETIVOS GENERAL se tomaran 3 ml para cada uno de los cuatro tubos de ensayo (
Evidenciar la actividad enzimática cualitativamente y optar por A,B,C,D) , respecto a los otros cuatro tubos (A2, B2, C2, D2 ) se
una técnica diferente para realizar oxidaciones biológicas. les adiciona a cada uno 3 ml de resorcinol {} (Fig. 6) con una
pipeta ( Fig. 5) diferente a la usada con el extracto de papa, con
OBJETIVOS ESPECIFICOS el fin de no mezclar las sustancias. A continuación se mostrara
 Tener en cuenta las diferentes técnicas utilizadas en el en la tabla No 1 la distribución que tendrán los tubos de ensayo
laboratorio de bioquímica. a las diferentes temperaturas de baño maria (Fig. 7) y Beaker
 Basarse en el primer procedimiento para la obtención con hielo (Fig. 8) se deben colocar los tubos de ensayo al mismo
de oxidaciones biológicas. tiempo.
 Analizar las posibles variaciones específicas de paso a
paso en la elaboración de la práctica. Tubos de ensayo Temperatura Tiempo
A, A2 Baño maria a 80 Cº 10 min
 Analizar aspectos importantes en la velocidad de las
B, B2 Baño maria a 50 Cº 10 min
reacciones en las diferentes soluciones.
C, C2 Temperatura 10 min
 Formar un criterio propio en el función de las técnicas
ambiente a 20Cº
desarrolladas en el laboratorio. aprox.
Implementos de laboratorio D, D2 Beaker con hielo 0 Cº 10 min
Tabla No 1. Distribución de los tubos de ensayo a las diferentes
1.1 instrumentos de laboratorio temperaturas.

2
Pasados los diez minutos, mezclar los dos tubos B, B2 Baño maria a 50 Cº Color un tanto
correspondientes a cada temperatura como por ejemplo A y A2, oscuro
así con todos los demás y volverlos a colocar a su temperatura C, C2 Temperatura Color rosado
asignada durante cinco minutos; Posterior a esto observar si hay ambiente a 20Cº opaco
cambios de coloración y presencia de precipitados. aprox.
D, D2 Beaker con hielo 0 Cº
Color rosado
Procedimiento 2. traslucido.
Actividad de polifenoloxidasas. Tabla No 3.Resultados primer procedimiento.
Para el segundo procedimiento, es necesario quitar la cascara a
los lulos, utilizando la mitad de ellos (Fig.9), debido a que serán A, A2: Al mezclar los 3 ml del extracto de papa con los 3ml de
sometidos a un proceso de maceración con treinta ml de sulfato resorcinol y someterlos a una temperatura de 80 Cº en un
de amonio (NH4)2 SO4 al 1%, de manera independiente (Fig. 10). tiempo de 10 minutos esta presentó un coloración oscura con
El cual nos permitirá adquirir el extracto mediante la filtración formación de precipitado.
con un embudo de caña corta en un beaker (Fig. 11). B, B2: Tanto el extracto de papa como el resorcinol se
Por lo tanto rotular los cuatro tubos que no se han usado como solubilizaron obteniendo como resulto una coloración uniforme
en el procedimiento anterior, ocupar dos de ellos con tres ml por un tanto oscura en la mezcla.
medio de pipetas tal que uno es el extracto de lulo maduro y el C, C2: La mezcla no sufrió muchos cambios, solo un cambio de
otro es el extracto de lulo verde en ambos adicionar un ml de coloración rosado muy opaco, y además de esto la papa se
solución buffer 0.05 M de fosfato (Fig. 12). Se deben agitar y precipito tornándose una sustancia blanca.
pasar la mitad a los otros dos tubos de ensayo que no se han D, D2: Debido a la baja temperatura, la coloración se tornó muy
usado, y colocarlos a temperaturas diferentes como lo muestra la traslucida sin formación de ningún precipitado.
siguiente tabla No 2
Los resultados obtenidos en el segundo procedimiento, se
Tubos de ensayo Temperatura Tiempo mostraran en la siguiente tabla No 4.
V, M Baño maria a 80 Cº 5 min
V2, M2 Baño maria a 0 Cº 5 min Tubos de Temperatura Coloración
Tabla No 2. Distribución de los tubos de ensayo en diferentes ensayo
temperaturas. M2 Baño maria a 80 Cº Amarillo opaco
V2 Baño maria a 80 Cº Verde oscuro
Posterior a los cinco minutos observar y comparar cambios de V, M Baño maria a 0 Cº Coloración clara
coloración o cambios que se aprecien, para determinar la Tabla No 4.Resultados segundo procedimiento.
activación enzimática. En la (Fig.13).
M: Con la solución buffer se tornó mucho más claro, casi blanco
incoloro y al someterlo a 80 Cº se oscureció a un amarillo opaco
mientras que a 0 Cº se volvió más traslucido.
V: Con la solución buffer se tornó un verde claro, el cual al
someterlo a 80 Cº se tornó mucho más oscuro y a 0 Cº no surgió
grandes cambios se mantuvo traslucido.

DISCUSIÓN

 ¿Crees que un color oscuro indica que la enzima es

Figura No. 13 Coloración de los lulos a diferentes más activa que en un color
Claro?
temperaturas.
3. Resultados y Discusión Rta / Si, por que un color oscuro y precipitado indica que la
enzima se desnaturalizo ya que se encontraba a una temperatura
Los resultados obtenidos en el primer procedimiento, se mayor a la óptima en este caso 80 Cº presentando precipitados,
mostraran en la siguiente tabla No 3. en cambio si el color es claro indica que la enzima se inhibió ya
que se encontraba a una temperatura a 0 Cº.
Tubos de ensayo Temperatura Coloración
A, A2 Baño maria a 80 Cº Color oscuro y  ¿Cuál temperatura parece ser más óptima para la
formación de enzima?
precipitado

3
 Rta/ La temperatura óptima para la activación enzimática es
máxima es la de 50 Cº basados en los resultados obtenidos con
el lulo verde y maduro.
De acuerdo a los resultados obtenidos en la práctica y dado que
estos son más que todo datos cualitativos; se pudo evidenciar que
los precipitados y colores muy oscuros son indicadores de una
desnaturalización de las enzimas por un exceso de temperatura
en este caso de las polifenoloxidasas del lulo, por otro lado los
colores oscuros sin precipitados nos señalan una actividad
enzimática y una velocidad de reacción favorable debido a una
concentración, temperatura y pH óptimos y por último los
colores claros y traslucidos son muestras de una inhibición
enzimática por ende la velocidad de reacción es mucho más lenta
lo que promueve la conservación del lulo.
Técnica Alternativa.
Oxidación química de los lulos.
Objetivo de la técnica.
Demostrar la oxidación química de los lulos por el oxígeno,
haciendo uso de un indicador redox.
Materiales.
Lulos maduro y verde, tubos de ensayo, algodón, embudo de
caña corta, mortero, reactivos (resorcinol y permanganato de
potasio).
Método.
Primero se debe macerar los lulos, obteniendo los extractos por
separado en dos tubos de ensayo, agregar resorcinol a cada uno,
después agregar el indicador redox (Permanganato de potasio
KMnO4), el cual indicara un cambio de coloración rosado si esta
reducido y un violeta fuerte si esta oxidado , esto mostrara la
cantidad de oxigeno que esté presente con fin de evidenciar la
oxidación a diferentes temperaturas como 0 Cº, Ambiente y 80
Cº , en un tiempo de 10 minutos posterior a esto anotar todos los
cambios de coloración.
4. Conclusiones
Gracias a la experiencia adquirida en el laboratorio se puede
determinar la actividad enzimática por medio de cambios de
temperatura el cual fue un factor alterado en esta práctica, es así
que podemos decir que los colores más oscuros indican buena
actividad enzimática, mientras que los colores claro demuestran
una disminución de dicha actividad, según la literatura estas
coloraciones son evidencias de procesos que ocurren a niveles
enzimáticos, donde es claro que la tendencia a violentar estos
procesos es muy fácil gracias a la modificación o alteración de
parámetros que tienen una relación muy estrecha con estos
procesos como lo evidenciamos con la temperatura en la
práctica.
Por medio de la práctica se permitió la compresión de la
conservación de alimentos mediante la regulación de
temperaturas, teniendo claro que si se afectan los otros dos
factores (concentración de sustrato y pH) los resultados podrían
variar drásticamente, ya que la literatura argumenta los cambios
que pueden darse. Es así que la importancia de las oxidaciones
biológicas radica en cómo funcionan y los procesos que estos
desencadenan en sistemas biológicos y como estos pueden
favorecer en la obtención de factores óptimos para que se logró
el funcionamiento de un sistema biológico.
Bibliografía:
Factores Que Afectan Las Reacciones Enzimáticas.
Monografias.com SA. Recuperado de
https://www.monografias.com/docs/Factores-Que-Afectan-
Las-Reacciones-Enzimaticas-P3SYQCTPCDU2Y
Khan Academy. Las enzimas y el sitio activo. (2019).
Recuperado de
https://es.khanacademy.org/science/biology/energy-and-
enzymes/introduction-to-enzymes/a/enzymes-and-the-active-
site
Mayorga, V., and Higuera, B. (2007). Aislamiento y
caracterizaciónde una polifenoloxidasa relacionada con la
tolerancia del clavel (Dianthus caryophyllus) A Fusarium
oxysporum f. sp. Dianthi raza 2. Colombia: Acta Biológica
Colombiana, pp. 81-94. Recuperado de
http://www.scielo.org.co/pdf/abc/v12n2/v12n2a7.pdf
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Vela, J. (2004). Purificación y caracterización cinética de
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Pérez, J., and Borges, M (2011). Fisiología general.
Universidad de Catambria. Open course ware Recuperado de
https://ocw.unican.es/pluginfile.php/879/course/section/967/T
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ANEXOS
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Figura No 3. Gradilla y 12 tubos de ensayo Figura No 7. Baño Maria

Figura No 4. Sustrato de papa en el beaker

Figura No 8. Beaker con hielo.

Figura No 5. Pipeta y Pipeteador.

Figura No 9. Lulo maduro y Lulo verde

Figura No 6. Resorcinol.

5
Figura No 10. Mortero y solución de sulfato de amonio.
Figura No 13. Parte experimental.

Figura No 14. Parte experimental.

Figura No 11. Elementos de filtración

Figura No 12. Tubos de ensayo con el extracto del lulo maduro Figura No 15. Parte experimental.
y verde con solución buffer

6
Evaluación (espacio para el docente)

ítem Máx. Nota

Resumen - Palabras clave 1.0

Introducción 1.0

Procedimiento experimental 1.0

Resultados y Discusión 1.0

Conclusiones 1.0

Calificación 5.0