ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

Valentina Avendaño Támara FISIOTERAPIA

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
Grupo C
26- septiembre de 2017

RESUMEN
En este informe se hizo uso de distintos reactivos y soluciones para identificar enzimas
específicas según el objeto de estudio como lo fue el hígado, el tomate y la saliva. Para
identificar la catalasa en tejidos animales se usó hígado adicionando agua oxigenada el
cual hizo que liberara el oxígeno cuando la catalasa de este tejido actúa sobre el agua
oxigenada. Para desnaturalizar la catalasa a otro trozo de hígado se añadió agua normal
y se sometió a calentar por unos minutos, al añadir el agua oxigenada la catalasa de este
no reaccionaría igual que antes por la liberación de oxígeno durante la cocción del
tejido. Para la catalasa del tejido vegetal se realizó el mismo procedimiento que con el
hígado, pero a diferencia del anterior el tomate no liberó gran cantidad de oxígeno.
En la hidrólisis del almidón se usó saliva como reaccionante, se colocó en algunos tubos
(6) todos tenían solución de almidón, en el 1 y 2 solo eso, en el 3 y 4 solución de
almidón y saliva sin diluir y en el 5 y 6 solución de almidón y saliva diluida hervida, a
los tubos pares se añadió reactivo de Benedict para identificación de azúcares
reductores, en los tubos pares se añadió Lugol. En los tubos que hubo hidrólisis por
almidón fue en el 3 y 4; más adelante en este informe se detallará todo el proceso y
resultado. Por último para la influencia del pH en la actividad enzimática se tomaron 3
tubos de ensayo con saliva y Buffer fosfato a diferentes pH para determinaren cuál
desaparece más rápido el almidón que se agregará posteriormente, dando como
resultado una rápida desaparición en el pH 11, seguido por el más ácido, el 3 y por
último en pH 7, en los análisis se explicará concretamente las razones de esta
desaparición de color con variabilidad de tiempo.

PALABRAS CLAVES
pH, saliva, hidrólisis, catalasa, desnaturalización.

INTRODUCCIÓN
LAS ENZIMAS
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Son moléculas de naturaleza sistema complejo pero inequívoco, de la
proteica que trabajan como nomenclatura enzimática y las clasifico.
catalizadores, es decir, regulan
OXIDORREDUCTORAS: son las
las reacciones químicas celulares,
enzimas relacionadas con las
siempre que
oxidaciones y reducciones biológicas
sean termodinámicamente posibles: Una
que intervienen de modo fundamental
enzima hace que una reacción química
en los procesos de respiración y
que es energéticamente posible pero que
fermentación.
transcurre a una velocidad muy baja,
sea cinéticamente favorable, es decir, HIDROLASAS: introducen

transcurra a mayor velocidad que sin la componentes del agua en el sustrato

presencia de la enzima.]En estas ocasionando el rompimiento de la

reacciones, las enzimas actúan sobre molécula. Actúan sobre uniones Ester

unas moléculas denominadas sustratos, (lipasas), cuerpos glucosídicos (alfa

las cuales se convierten en moléculas amilasa) y uniones peptídicas (pepsina).

diferentes denominadas productos. Casi ISOMERASAS: transforman ciertas

todos los procesos en las células sustancias en otras isómeras, es decir,
necesitan enzimas para que ocurran a de idéntica formula empírica, pero con
unas tasas significativas. A las diferente desarrollo. Son las enzimas
reacciones mediadas por enzimas se las que catalizan diversos tipos de
denomina reacciones enzimáticas. isomerización, sea óptica, geométrica,

CLASIFICACIÓN DE LAS funcional, de posición, etc.

ENZIMAS TRANSFERASAS: están enzimas

Las enzimas, se clasifican por tipos de catalizan la transferencia de una parte

reacción y mecanismo. Con el de la molécula (dadora), a otra

descubrimiento de más y más enzimas (aceptora).

surgieron ambigüedades inevitables y LIGASAS: unen moléculas utilizando

con frecuencia no estaba claro de que compuestos de alta energía como el
enzima se estaba hablando, para ATP u otra, forma de enlaces.
remediar esta deficiencia la Unión
CATALASA
Internacional de Bioquímica adopto un

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Inicialmente la catalasa es una enzima
que la tienen en su mayoría todos los
seres vivos que están expuestos al
oxígeno, es una enzima antioxidante lo
cual le permite catalizar la conversión
de peróxido de hidróxido en agua y
oxígeno. El peróxido de hidrogeno
puede llamarse un subproducto del
metabolismo celular, que interactúa en
algunas funciones útiles incluyendo una
respuesta inmunológica saludable.
La catalasa es una de las enzimas más
"grandes", ya que tiene uno de los
índices de movimiento más asombroso
comparado con las demás enzimas. La
enzima de la catalasa puede cambiar 40
millones de moléculas de peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno en sólo un
segundo. De hecho, la enzima catalasa
sirve para proteger nuestras células,
contrarrestando y equilibrando
producción continua de peróxido de
hidrógeno. Debido a sus innegables,
poderosas y demostradas propiedades
antioxidantes, la catalasa es muy
Para el reconocimiento de la catalasa en
tejidos animales colocamos en un tubo
de ensayo pequeños trozos de hígado,
añadimos 2mL de agua oxigenada y
observamos variables importantes.
Para el reconocimiento de la catalasa en
tejidos vegetales, se realiza el mismo
procedimiento, colocamos en un tubo de
ensayo pequeños trozos de tomate,
benéfica para los procesos de los
órganos y el cuerpo. Además de fungir
como súper antioxidantes, la catalasa
también tiene la habilidad de usar el
peróxido de hidrógeno para oxidar
toxinas incluyendo el metanol, etanol,
ácido fórmico, formaldehido, y nitrito.
Este tipo de actividad dual la convierte
en una enzima celular crucial.
METODOLOGÍA
Desnaturalización de la enzima catalasa.
Mediante esta experiencia, se estudiará
la propiedad de desnaturalización que
tienen las proteínas y que consiste en la
pérdida de su estructura terciaria
(tridimensional), lo que afecta su
función. La enzima catalasa, al igual
que otras proteínas, se puede
desnaturalizar al exponerla a altas
la temperaturas. Al perder su estructura se
perderá también la función, por lo que
no podrá descomponer el agua
oxigenada.
añadimos 2ml de agua oxigenada y
pudimos comparar la diferencia en las
dos reacciones.
Para la desnaturalización de la catalasa,
colocamos en un tubo de ensayo trozos
de hígado, añadimos agua y hervimos la
muestra por unos minutos, pasado este
tiempo, retiramos el agua sobrante,
agregamos agua oxigenada hasta que
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cubra los pedazos de hígado.
Comparamos la reacción con la
presentada en la guía de laboratorio:
Catalasa
2 H2O2  O2 + 2H2O 1
En la hidrólisis del almidón, utilizamos
saliva de la siguiente manera; en una
gradilla colocamos 5 tubos de ensayo
enumerados, en el tubo 1 agregamos
2ml de solución de almidón, en el tubo
2 agregamos 2ml de solución de
almidón también, en el tubo 3
agregamos 2ml de solución de almidón
+ 1ml de saliva sin diluir, en el tubo 4
agregamos 2ml de solución de almidón
+ 1ml de saliva sin diluir, en el tubo 5
agregamos 2ml de solución de almidón
+ 1ml de saliva diluida hervida, en el
tubo 6 agregamos 2ml de solución de
almidón + 1ml de saliva diluida hervida.
A continuación, colocamos los tubos a
baño María a 37°C por 10 minutos,
después en los tubos 1, 3 y 5 agregamos
una gota de Lugol, esta será la prueba
para almidones. En los tubos 2, 4 y 6
agregamos 1ml de reactivo de Benedict,
esta será la prueba para azucares
reductores. En esta prueba cuando se
usa el reactivo de Benedict, se debe
calentar a 70°C el contenido de los
tubos.
2ml de Buffer fosfato o.1M a pH 3, en
el tubo 2, 2ml de saliva + 2ml de Buffer
fosfato o.1M a pH 7 , en el tubo 3,
2ml de saliva + 2ml de Buffer fosfato
o.1M a pH 11, agitamos cada tubo y
agregamos 2ml de almidón al 1% en
cada 1uno , agitamos de nuevo y
agregamos una gota de Lugol, anotamos
el tiempo de desaparición del color en
cada pH.
RESULTADOS
1. Reconocimiento de catalasa en
tejidos animales
Al agregarle 2ml de agua
oxigenada al tubo de ensayo que
contenía trozos de hígado
produjo una efervescencia,
burbujeo y generó espuma con
gran intensidad. Después de un
tiempo se precipitó agua en el
fondo del tubo. También se
presentó un cambio de
coloración en el hígado,
tornándose de un color pálido.
(Ver figura 1)

En la influencia del pH en la actividad

enzimática recogimos 6ml de saliva en
un breaker de 50ml, colocamos una
gradilla con 3 tubos de ensayo
enumerados, agregamos en cada uno lo
siguiente: en el tubo 1, 2ml de saliva +
1
Reacción 1

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 Figura1: tubo de ensayo con
trozos de hígado y agua
oxigenada.
2. Reconocimiento de la catalasa
en tejidos vegetales
Al agregarle 2ml de agua
oxigenada al tubo de ensayo que
contenía trozos de tomate se
produjo efervescencia, pero con
menor intensidad que en la
prueba del hígado, también se
generó agua y el tomate cambió
su coloración por un tono pálido.
(Ver figura 2)
Figura 2: tubo de ensayo con
tomate y agua oxigenada.
3. Desnaturalización de la
catalasa
Al someter el hígado a altas
temperaturas se observó que se
desnaturalizó y perdió sus
componentes. Además, se tornó
de un color verdoso (cocido) y
no se generó burbujas al
agregarle agua oxigenada. (Ver
figura 3)
Figura 3: tubo de ensayo con
hígado sometido a una alta
temperatura.
4. Hidrólisis de almidón
El tubo número uno se tornó de
color azul oscuro, el número
dos, azul verdoso, el número tres
de color blanco cristalino, el
número cuatro amarillo, el
número cinco el Lugol tiñó el
almidón de color violeta y el
número seis se dividió en dos
fases, la del fondo del tubo de
ensayo presentó un color azul
claro y el superior blanco
cristalino. (Ver figura 4)
Figura 4: tubos de ensayo con
resultados de la prueba de hidrólisis de
almidón.
5. Influencia del pH en la
actividad enzimática
En el pH 7 (neutro) fue el
primero en desaparecer la
coloración del lugol, en un
tiempo de 1 minuto y 30
segundos, en el pH 11 (básico)
fue el segundo en desaparecer la
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 coloración, en un tiempo de 2
minutos, y en el último que
desapareció la coloración fue en
el pH 3 (ácidos) en un tiempo de
8 minutos. Por lo tanto en el pH
7 la amilasa estuvo en su pH
óptimo por lo que destruyó el
almidón. (Ver figura 5)
2. Reconocimiento de la catalasa
Figura 5: prueba de pH en la actividad
enzimática
3. Desnaturalización
ANÁLISIS DE RESULTADOS
1. Reconocimiento de la catalasa
en tejidos animales
4. Hidrólisis del almidón
En la prueba de hígado + agua
oxigenada se presentó un intenso
burbujeo por el desprendimiento
de oxígeno; debido a la acción
de la enzima catalasa el agua
oxigenada se trasformó en agua
y oxígeno. 1
Esto también sucedió porque el
hígado presenta peroxisomas
que protegen sus células del
agua oxigenada, cuyas
moléculas fueron rotas por la
enzima catalasa contenida en los
peroxisomas, lo que dio como
resultado la efervescencia y
produjo compuestos no tóxicos
como agua y oxígeno (reacción
uno).
en tejidos vegetales.
En la prueba de tomate + agua
oxigenada se produjo menor
efervescencia con respecto a la
prueba del hígado porque la
cantidad de catalasa presente en
los tejidos vegetales es menor
que en los tejidos animales.
de la
catalasa
En la prueba del hígado
calentado no se generó burbujas
al agregarle agua oxigenada
porque al momento de someterlo
a una alta temperatura se
desnaturalizó la enzima catalasa
por lo tanto no se degradó el
peróxido de hidrogeno en agua y
oxígeno.
La saliva contiene la enzima
amilasa que cataliza la hidrólisis
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del almidón para degradarlo a
los azúcares reductores maltosa
y glucosa, con etapas
intermedias en las dextrinas.
En el tubo 1 agregamos 2ml de
solución de almidón lo
colocamos a baño María a 37°C
por 10 minutos y agregamos una
gota de Lugol. Este tubo tomó
un color azul oscuro, el almidón
reaccionó con el Lugol dando
esta coloración, pero el almidón
no se hidrolizó, solo reaccionó
con el reactivo.
En el tubo 2 agregamos 2ml de
solución de almidón, lo
colocamos a baño María a 37°C
por 10 minutos y agregamos 1ml
de reactivo de Benedict, en esta
prueba se calentó el tubo a 70°C
el contenido. En este tubo el
color que se obtuvo fue un azul
muy claro, que es el mismo
color del reactivo de Benedict,
por lo que es negativa la
presencia de azúcares
reductores.
En el tubo 3 agregamos 2ml de
solución de almidón + 1ml de
saliva sin diluir, lo colocamos a
baño María a 37°C por 10
minutos y agregamos una gota
de Lugol. La coloración del
contenido se pone transparente
con algunos restos de Lugol al
fondo. La saliva sin diluir
cumplió la función de hidrolizar
el almidón.
En el tubo 4 agregamos 2ml de
solución de almidón + 1ml de
saliva sin diluir, lo colocamos a
baño María a 37°C por 10
minutos y agregamos 1ml de
reactivo de Benedict, en esta
prueba se calentó el tubo a 70°C
el contenido, la coloración que
toma es un verde oscuro con un
poco de reactivo de Lugol en el
fondo. Al igual que en el punto
anterior la saliva sin diluir fue
útil para hidrolizar en almidón.
En el tubo 5 agregamos 2ml de
solución de almidón + 1ml de
saliva diluida hervida, lo
colocamos a baño María a 37°C
por 10 minutos y agregamos una
gota de Lugol. La coloración
que toma es transparente y en el
fondo del tubo quedan residuos
de la reacción que tuvo el Lugol,
pero no se hidroliza con la saliva
diluida hervida.
En el tubo 6 agregamos 2ml de
solución de almidón + 1ml de
saliva diluida hervida, lo
colocamos a baño María a 37°C
por 10 minutos y agregamos 1ml
de reactivo de Benedict, en esta
prueba se calentó el tubo a 70°C
el contenido, la coloración que
toma es azul claro igual que en
el tubo dos, con la diferencia
que al fondo del tubo quedan
residuos de almidón.
5. Influencia del pH en la
actividad enzimática
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El tubo número uno contenía 2
ml de saliva junto con 2 ml de
buffer fosfato 0.1 M con un pH
3, se agregó almidón al 1% y
una gota de Lugol, dando como
resultado un contenido cristalino
con un precipitado color
purpura, esto sucede ya que el
lugol tiene yodo el cual entra a
la estructura del almidón
provocando la absorción de
yodo en moléculas de almidón;
el tiempo que tardo en teñir el
almidón fue de ocho minutos.
El tubo numero dos que contenía
la misma cantidad de saliva y
también del reactivo de Buffer,
pero este con un pH 7 con la
misma cantidad de almidón y
Lugol, dejando un contenido
blanco y espeso, este fue el que
menos demoró en desaparecer su
color con un tiempo de un
minuto y treinta segundos.
El tubo número tres contenía la
misma cantidad de reactivos y
soluciones, pero con un pH 11
dando como resultado un
precipitado blanco y en la parte
de arriba una sustancia más
cristalina, el tiempo que tardo en
desaparecer el color fue de dos
minutos, siendo el segundo en
reaccionar.
La desaparición del color se da
porque el Lugol no tiñe el
almidón ya que la amilasa lo
degrada y porque está en un pH
óptimo. En el tubo que fue más
activa la enzima sobre el
almidón fue en el número dos
que contenía un pH 7. El pH
óptimo para la amilasa esta entre
un pH 6.5 - 7.2, los otros valores
son inadecuados porque son
mínimos o mayores al pH
optimo el cual no permite un
buen funcionamiento de las
enzimas, el pH óptimo de la
saliva humana varia de 6,2 y
7,4.
FUNDAMENTACIÓN
1. Describa el efecto de la
temperatura en la acción enzimática.
La variación de la actividad enzimática
con la temperatura es diferente de unas
enzimas a otros en función de la barrera
de energía de activación de reacción
catalizada. Sin embargo, a diferencia de
lo que acurre en otras reacciones
químicas, en las reacciones catalizadas
por enzimas se produce un brusco
descenso de la actividad cuando se
alcanza una temperatura crítica. Este
efecto no es más que un reflejo de la
desnaturalización térmica de la enzima
cuando se alcanza dicha temperatura.
Si la Temperatura aumenta por encima
de la Temperatura óptima, disminuye e
incluso cesa la actividad enzimática
debido a que la enzima se desnaturaliza.
Cada enzima posee una temperatura
óptima, en los humanos suele estar
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alrededor de 37ºC (temperatura corporal 5. La pepsina es una enzima
adecuada).2 secretada por el estómago. Discuta el
rango de pH en el cual la enzima se
2. ¿A qué valores de pH y
encuentra activa y sugiera lo que
temperatura es estable la
probablemente le sucede
actividad enzimática de la
estructuralmente a la enzima cuando
catalasa?
pasa del estómago al intestino
La catalasa se desnaturaliza por la
La pepsina exhibe la mayor actividad a
acción del calor, ya que, se rompen los
niveles de pH alrededor de 2,0 y se hace
puentes de hidrogeno que ella posee.
inactiva más allá de un pH de 6,5.
Los valores de pH demasiado ácidos o
básicos inactivan la acción de la enzima El intestino tiene un pH ligeramente
ya que se establecen enlaces polares que alcalino de 7.5 a 8.0.
rodean la molécula de catalasa
impidiéndole su acción sobre el Esto hace que al momento de que la
sustrato.3 pepsina pasa del estómago al intestino
se inactiva.6
3. ¿a qué pH teórico es más activa
la amilasa? 6. Que otros factores además de la
temperatura y el pH influyen en la
El pH óptimo de la actividad enzimática actividad de una enzima.
es 7, excepto las enzimas del estómago
cuyo pH óptimo es ácido.4 Concentración del sustrato: A mayor
concentración del sustrato, fija de la
4. Qué diferencia hay entre una enzima se obtiene la velocidad máxima.
coenzima y una apoenzima Después de que se alcanza esta
velocidad, un aumento en la
Las coenzimas son cofactores orgánicos
concentración del sustrato no tiene
no proteicos, termoestables, que unidos
efecto en la velocidad de la reacción.
a una apoenzima forman la holoenzima,
tienen en general baja masa molecular
Concentración de la enzima: Siempre y
comparada con la apoenzima.
cuando haya sustrato disponible, un
La apoenzima es la parte proteica de
aumento en la concentración de la
una enzima, desprovista de las
enzima aumenta la velocidad enzimática
coenzimas que pueden ser necesarios
hacia cierto límite.
para que la enzima sea funcionalmente
activa, la apoenzima es catalíticamente Presencia de cofactores: Muchas
inactiva enzimas dependen de los cofactores,
Holoenzima = Apoenzima + Coenzima5 sean activadores o coenzimas para
funcionar adecuadamente. Para las
enzimas que tienen cofactores, la
2
Yohandry Ruiz (2015) concentración del cofactor debe ser
3
Freddy Casanova (2010)
4
A.A (2012)
5 6
Felipe (2016) Sirah Dubois (Sin año de publicación)
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igual o mayor que la concentración de
la enzima para obtener una actividad
catalítica máxima.
7. Cite cinco enzimas y los
sustratos respectivos sobre los cuales
actúan
Tripsina: Rompe los enlaces peptídicos
adyacentes a la arginina o lisina.
enzimática se observó que el más activo
sobre el almidón fue el pH 7, después
de unos minutos el PH 11 y por último
el PH 3 que tardo mucho tiempo en
diluirse.
 Para que la catalasa de un buen
resultado necesita de un PH neutro y
una temperatura ambiente.

Lactasa: Utilizada en la industria láctea, REFERENCIAS

evita la cristalización de la leche 1. Reacción 1 Guía unificada de
concentrada. Laboratorio (Tomado el 23 de
Gastrina: Produce y segrega ácido septiembre de 2017)
clorhídrico, al tiempo que estimula la 2. Yohandry Ruiz (2015) (Tomado
movilidad gástrica. el 23 de septiembre de 2017)
(Recuperado de
Dipeptidasa: Productora de dos http://unisucre.academia.edu/Yo
aminoácidos. handryRuiz)
Quimosina: Coagula las proteínas de la 3. Freddy Casanova (2010)
leche, en la industria de la quesería. (Tomado el 23 de sept. de 17)
(Recuperado de
Lipasa: Proporciona ácidos grasos, http://bioquimica.obolog.es/dete
siempre que actué en un medo alcalino, rminacion-actividad-catalasa-
con previa acción de las sales biliares. frente-diferentes-factores-
Secretina: Segrega agua y bicarbonato inhibidores-1287945)
de sodio, además de inhibir la motilidad 4. Autor anónimo (2012) (Tomado
gástrica.7 el 23 de septiembre de 2017)
(Recuperado de
http://amilasa.blogspot.com.co/)
5. Felipe (2016) (Tomado el 23 de
CONCLUSIONES
septiembre de 2017)
 La temperatura juega un papel (Recuperado de
muy importante a la hora de observar la https://brainly.lat/tarea/1313868)
actividad enzimática, si esta se eleva la 6. Sirah Dubois (Sin año de
reacción ocurre más rápido, aunque se publicación) (Tomado el 23 de
corre el riesgo de que la actividad se septiembre de 2017)
anule y no se termine la (Recuperado de
experimentación. https://muyfitness.com/enzimas-
 Al realizar el procedimiento de pepsina-quimotripsina-
influencia del PH en la actividad info_1633/)
7. Enciclopedia de Ejemplos
7
Enciclopedia de Ejemplos (2017) (2017). "25 Ejemplos de
P á g i n a 10 | 11
Enzimas (y su función)". funcion/)
(Recuperado Fuente: http://www.ejemplos.co/
de: http://www.ejemplos.co/25- 25-ejemplos-de-enzimas-y-su-
ejemplos-de-enzimas-y-su- funcion/#ixzz4tYKNXRD

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