ARNm del VPH es más específico que el ADN del VPH en la vigilancia de mujeres

con lesiones cervicales leves

Sveinung Wergeland Sorbye 1.2 * Silje FISMEN 1, Tore Jarl Gutteberg 2,3 Elin Synnøve Mortensen 1.3
Encuentra Egil Skjeldestad 4

1 Departamento de Patología Clínica, Hospital de la Universidad del Norte de Noruega, Tromsø, Noruega, 2 Departamento de Biología Médica, Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad del Ártico de Noruega, Tromsø, Noruega, 3 Departamento

de Microbiología y Control de Infecciones, Hospital de la Universidad del Norte de Noruega, Tromsø, Noruega, 4 Instituto de Medicina Clínica, Universidad El Ártico de Noruega, Tromsø, Noruega

abstracto

antecedentes: En Noruega, repetir la citología y la subida los test de VPH retraso vigilancia de mujeres con lesiones citológicas menores. El objetivo de este estudio
fue dos evalúan de ADN del VPH y HPV mRNA pruebas en triaje de mujeres con un diagnóstico ASC-US / LSIL.

Materiales y Métodos: Se utilizó la citología de repetición, HPV ADN de prueba (Cobas 4800) y HPV mRNA de prueba (PreTect HPVProofer) seguimiento 311
mujeres de 25-69 años con ASC-US / LSIL índice de citología.

resultados: De 311 mujeres programadas para el cribado secundario, 30 mujeres (9,6%) tuvieron ASC-H / HSIL citología que triaje y 281 mujeres (90,4%) tuvieron
ASC-US / LSIL o citología normal. La prueba de ADN HPV fue positiva en 92 (32,7%) de 281 casos, y 37 (13,2%) eran de ARNm positivo. De las 132 mujeres con repetida
ASC-US / LSIL, recibimos biopsias de 97,0% (65/67) de la ADN-positivos y 92,9% (26/28) de los casos de ARNm-positivos. El valor predictivo positivo para CIN2 + fueron
21,5% (14/65) para el ADN positivo y 34,6% (9/26) para el ARNm positivos (ns). El odds ratio de ser planteado dos colposcopia en los casos de ADN-positivos fueron 2,8
veces (IC del 95%: 1.8 a 4.6) superior que de los casos de ARNm-positivos. En comparación con la prueba de ARNm, la prueba de ADN detectado cuatro casos más de
CIN2 y un caso de CIN3.

conclusiones: La tasa de positividad más alta de la prueba de ADN en triaje lleva dos mayor tasa de remisión para colposcopia y biopsia, y posterior seguimiento adicional de las
biopsias negativas. Siguiendo constantemente ARNm Mujeres negativos Quién había ASC-US / LSIL que triaje con citología, los casos adicionales de CIN2 + adquirida en
detección de ADN puede ser descubierto. Nuestro estudio indicat Que en triaje de repetida ASC-US / LSIL, HPV mRNA pruebas es más específico y más relevante en el uso
clínico de una prueba de ADN de VPH.

Cita: Sorbye SW, FISMEN S, Gutteberg TJ, Mortensen ES Skjeldestad FE (2014) HPV mRNA es más específico que el ADN del VPH en triaje de mujeres con menores cervicales lesiones. PLoS ONE 9 (11): e112934. doi:
10.1371 / journal.pone.0112934

editor: Anthony WI Lo, Queen Mary Hospital, Hong Kong

recibido 13 de julio 2014; aceptado El 16 de octubre de 2014; publicado 18 de noviembre 2014

Derechos de autor: 2014 Sorbye et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Atribución, Permisos de madera
uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan.

Disponibilidad de datos: Los autores confirman que todos los datos que se basan las conclusiones son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran, el apoyo de sus archivos de información de papel y.

financiación: Esta investigación fue apoyada por el Hospital Universitario de Noruega del Norte (http://www.unn.no/). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, la toma de dos publicar, o
la preparación del manuscrito.

Conflicto de intereses: Los autores han declarado que no existen conflictos de intereses.

* E-mail: sveinung.sorbye@unn.no

introducción con una prueba de VPH negativa se devuelven al programa de cribado en un intervalo de tres
años.
El objetivo en el cribado primario para el cáncer de cuello de útero es de dos En Noruega, las lesiones citológicas de alto grado se detectan en 1,0
detectar y tratar lesiones intraepiteliales cervicales de alto grado antes que el cáncer
1,2% en cada ronda de cribado del programa de detección de cáncer cervical nacional [3]. El
invasivo [1] desarrollador. En Noruega, un programa de detección de cáncer cervical
principal desafío en cualquier programa de cribado de cáncer de cuello uterino es el manejo
se introdujo en 1995, recomendando a todas las mujeres entre 25 y 69 años de
de las lesiones cervicales leves cosas por el estilo como ASC-US y LSIL [4]. Las mujeres con
edad de dos años tienen una muestra citológica celular (citología vaginal) recogidas
lesiones cervicales leves Comp suben un volumen de 4 veces de pruebas / visitas para el
cada tres años [2]. El cervical programa de cáncer de recomendación de selección
sistema sanitario en comparación dos mujeres con lesiones cervicales de alto grado [3]. En el
secundaria noruego con repetición citología y una prueba de VPH 6-12 meses
cribado basado en la citología varias estrategias havebeen evalúan, para las mujeres con
después del diagnóstico de índice de una de células escamosas atípicas de
lesiones cervicales leves, en combi nación con la prueba para el virus del papiloma humano
significado indeterminado (ASC-US) o lesiones intraepiteliales escamosas de bajo
(VPH). Una estrategia es referencia directa a dos mujeres en colposcopia y biopsia con
grado (LSIL). Las mujeres con lesiones de alto grado (HSIL intraepiteliales
ASC-US / LSIL [5]. En las pruebas de reflejos, las mujeres con ASC-US / LSIL se examinan
escamosas) o ASC-US / LSIL con un resultado positivo de VPH se conocen dos
con una prueba de VPH en la muestra de índice de citología, y los casos positivos se
colposcopia / biopsia Inmediatamente después de triaje.
denominan directamente a dos colposcopia [6,7]. Una tercera

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estrategia es la citología de repetición después de 6-12 meses, mientras que una cuarta
estrategia es repetición citología / HPV pruebas 6-12 meses después del diagnóstico primario
ASC-US / LSIL (triaje HPV retardada) [8]. Es también posible, dos mujeres de triaje con lesiones
cervicales menores por HPV 16/18 genotipado o mediante biomarcadores cosas por el estilo
como HPV E6 mRNA / E7, p16 / Ki67, metilación y Proex C [9-16].
En el ASC-US / LSIL Triage Study (ALTS) las mujeres se asignaron al azar a repetir la
citología, colposcopia derivación directa de dos o VPH triaje [6,7,17]. Después de dos años de
seguimiento, no hubo diferencias en las tasas de detección de CIN 3+ entre los brazos del
estudio. El brazo VPH triaje Referido aproximadamente la mitad de muchas mujeres de dos
colposcopia como aquellos comentarios con referencia directa en casos de
ASC-estadounidenses. Las mujeres con citología repetida requiere que privilidge dos
seguimientos que conduce a exámenes más colposcópicas que en el brazo VPH [6,7,17]. En el
estudio ALTS la prevalencia de HPV oncogénico era demasiado alto (85%) de triaje dos
permiso eficaz de LSIL Uso de pruebas de ADN de VPH. ASI inmediata remisión de dos
colposcopia fue defendida por estas mujeres [17].
Como sólo una pequeña proporción (12,8%) de las mujeres con ASC-US o LSIL puerto
histológicamente de alto grado confirmó la enfermedad (CIN2 +) [6-8,17,18], una prueba con
alta especificidad pediría Deseable en el cribado secundario para evitar demasiadas
referencias de dos colposcopia [19]. Gerente y personal de la infección por VPH es un factor
necesario en la carcinogénesis, la mayoría de las infecciones por VPH son transitorias
incluso en mujeres con CIN2 después de un diagnóstico de ASC-US / LSIL [20]. En general,
las pruebas de ADN de VPH generan resultados más positivos que el ensayo de HPV E6 /
E7 ARNm [21]. Esto se debe a pruebas de ADN detectan la presencia del virus y habrá
detectan También- infecciones transitorias inofensivos, de madera son manejados por el
sistema inmune, alongwith regresión de las lesiones [10]. La verdadera causa de cáncer de
cuello uterino no es la infección por el virus del VPH en sí, pero continua sobre la expresión
de los oncogenes virales E6 y E7 de tipos de HPV oncogénico [22]. En consecuencia, las
pruebas de la presencia de ADN de VPH se asocia con un riesgo relativamente bajo de
lesión intraepitelial confirmado-histológico de alto grado Subyacente, incluso en mujeres con
ASC-US / LSIL [4].
En este estudio se realizó una comparación directa de un ARNm de VPH y una prueba de
ADN del VPH en el cribado secundario de ASCUS / LSIL en relación con las tasas de
derivación a colposcopia, las tasas de biopsia, los resultados histológicos y el tiempo de
estancia de nuevo al programa de cribado.
resultados
Para la mayoría de las mujeres (81%) la citología índice representado el primer
diagnóstico ASC-US / LSIL, wherea 10% y 9% de las mujeres tenían una historia de una o
cuatro y cincuenta y ocho diagnóstico ASC-US / LSIL, respectivamente. La tasa de
positividad de la prueba de ADN HPV era 36,7% (114/311) con relación 18,3% (57/311) de la
prueba de HPV mRNA (Tabla 1).
Tabla 1. Citología que triaje por positividad de la prueba del VPH.
Citología que triaje número pos ADN del VPH
normal 142 25 (17.6)
poco concluyente 7 0 (0,0)
ASC-US / LSIL 132 67 (50.8)
ASC-H / HSIL 30 22 (73.3)
total 311 114 (36.7)
doi: 10.1371 / journal.pone.0112934.t001
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HPV mRNA es más específico que el ADN del VPH en triaje de ASC-US / LSIL
Treinta de los 311 mujeres tenían ASC-H / HSIL citología que la selección, y 22,
20 y 8 de los casos ASC-H / HSIL fueron HPV mRNA HPV DNA positivo positivo y
HPV ADN / ARNm doble negativo, respectivamente. Todos los 20 HPV mRNA casos
positivos fueron DNA positivo. Entre los casos ASC-US / LSIL que triaje, 68 eran
HPV positivo para una o ambas pruebas, 27 eran doble positivo (ADN + / mRNA +),
40 eran de ADN + / ARNm y una mujer fue de ADN / ARNm +.
Un total de 281 mujeres (90,4%) tenía ASC-US, LSIL, citología normal o no
concluyente que de triage. De estos 281 mujeres, 92 (32,7%) eran de ADN de VPH
positivo y 37 mujeres (13,2%) fueron HPV mRNA positivo (Tabla 2). Entre estos 281
mujeres, 16 fueron positivos para HPV de tipo 16 (ADN y / o ARNm), 15 para el ADN
del VPH y 14 para HPV mRNA. estimaciones similares de nueve HPV tipo 18 mujeres
positivas (HPV 16 negativo) tenían siete y seis para ADN de VPH y el ARNm de VPH,
respectivamente. pares más discordantes se observaron para otros tipos de HPV
(VPH 16 y 18 negativas), donde 70 de 71 eran ADN de VPH mujeres positivas
relativas 02:17 VPH mRNApositive (Tabla 2).
El estado que triaje por prueba de diagnóstico se muestran en la Tabla 3. La tasa de
derivación directa de dos colposcopia / biopsia eran 24% usando la prueba de ADN de VPH
respectiva 10% usando la prueba de HPV mRNA (p, 0,001). Dentro de los 12 meses después de
la selección, 65 de 67 HPV ADN positivo se habían reunido para la biopsia respectiva 26 de 28 en
el grupo de HPV mRNA (Tabla 4).
El valor predictivo positivo para CIN2 + fueron 21,5% (14/65) para el ADN
positivo y 34,6% (9/26) para el ARNm positivo. El valor predictivo positivo para CIN3
+ eran 6,2% (4/65) para el ADN positivo y 11,5% (3/26) para el ARNm positivo. El
odds ratio (OR) para ser referido dos colposcopia eran (IC del 95%: 1.8 a 4.6) 2,8 en
el grupo de ADN de VPH en comparación con el grupo de HPV mRNA. La tasa de
remisión Aumento dio lugar a un diagnóstico adicional de cuatro casos más de CIN2
y un caso más de CIN3.
Desde que utilizamos el ADN del VPH como prueba de referencia, la sensibilidad de la
prueba de ADN de VPH es 100% (14/14) con relación 64,3% (IC del 9/14, 95%: 39,2 a 89,4)
para la prueba de HPV mRNA. Las correspondientes estimaciones de la especificidad son 70,8%
(IC del 189/267, 95%: 65,5 a 76,3) y 89,5% (IC del 239/267, 95%: 85,8 a 93,2).
discusión
Nuestro estudio muestra que el ARNm del VPH es más específico que el ADN del VPH en
la vigilancia de mujeres con repetidos ASC-US / LSIL. Una baja tasa de positividad se traduce
en una tasa de derivación baja para colposcopia, de madera muy atractivo para Situaciones
de triaje. La tasa de remisión para colposcopia fue significativamente mayor para el pariente
dos mRNA de ADN de VPH positivo HPV positivo, ganando sólo cuatro casos más de CIN2 y
un caso más de CIN3. Así, frente a la prueba de mRNA, el uso de pruebas de ADN en
morethan triaje se duplicó la carga de trabajo para los ginecólogos y laboratorios. Mientras las
mujeres con ASC-US repetida / LSIL y pruebas de ARNm de VPH negativos son objeto de
seguimiento
pos HPV mRNA
9 (6,3)
0 (0,0)
28 (21.2)
20 (66.7)
57 (18.3)
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Tabla 2. La concordancia entre los ARNm de VPH y el ADN de VPH tipos.
prueba de la clasificación ADN de VPH
ARNm de VPH negativo VPH 16 *
HPV mRNA negativo 186 2 3
ARNm del VPH 16 * 0 13
HPV mRNA 18 ** 2 0
Otros HPV mRNA *** 1 0
total 189 15
* VPH 16 y todos los demás tipos.
* * VPH 18, todos los demás tipos excepto para el VPH 16.
* * * Todos los demás tipos, excepto para el VPH 16 y / o 18. doi:
10.1371 / journal.pone.0112934.t002
con una nueva citología después de 12 meses, muy pocos casos de CIN2 + capturados por
ADN que triaje se perderán [8,18].
La mayor especificidad de la prueba de HPV mRNA se traduce en 39 más referencias
directas dos colposcopia / biopsia después del diagnóstico ASC-US / LSIL y el ADN de VPH
positiva y negativa mRNA HPV. Entre estas mujeres, se diagnosticaron cuatro casos de CIN2
y un caso de CIN 3, además 2:20 casos adicionales de CIN 1 y 14 casos adicionales con
histología normal (Tabla 4). Todas las mujeres con biopsias negativas (normal / CIN1)
necesitan más seguimientos Debido a la limitada sensibilidad de la colposcopia / biopsia
[23,24]. La elección de la prueba representa la una compensación entre los beneficios
(detectado CIN2 +), de madera son mayores para la prueba de ADN de VPH, y Harms
(innecesarios colposcopias / biopsias), de madera son más pequeños para la prueba de HPV
mRNA.
La prueba de ADN de VPH tiene mayor sensibilidad para CIN2 + que la prueba de HPV
mRNA. Las mujeres con repetidos ASC-US / LSIL y una prueba de ARNm de VPH negativo no
pueden considerarse libres de CIN2 + y necesitan un seguimiento con otra tinción dentro de los
12 meses. En dos estudios publicados recientemente en Noruega, este es también el caso de
las mujeres con una prueba de ADN del VPH negativo en un retraso en el triaje de ASCUS /
LSIL [8,25]. Como muestran los datos del Registro de Cáncer de Noruega son completas de
todos los laboratorios de citología, la práctica de dar seguimiento a los casos de ADN del VPH
negativos de hielo repetida ASC-US / LSIL A nivel nacional A pesar de la falta de guía nacional
de esta práctica [8,25].
Varios estudios han comparado el rendimiento de las diferentes pruebas de diagnóstico
de VPH en remisión directa de dos colposcopia después de una citología anormal de
repetidas discariosis limítrofe / leve o peor [26,27]. En el estudio Predictor 2, las mujeres
colposcopia-negativos fueron consideradas libres de la enfermedad cervical intraepitelial. En
un subgrupo de 670 mujeres con insuficiencia renal leve o repetidas frotis dudosos, Cobas
4800 tuvo una sensibilidad y especificidad para CIN 3+ de 100,0% y 23,0%, respectivamente,
frente a 80,9% y 67,9% para el mRNA PreTect
Tabla 3. Estado de triaje mediante la prueba de VPH.
resultado de triaje
Volver a la selección *
El seguimiento por citología **
Colposcopia / biopsia ***
total
* Citología normal / concluyentes y VPH negativo.
* * Normal y VPH positivo o ASC-US / LSIL y VPH negativo.
* * * ASC-US / LSIL y VPH positivo. doi: 10.1371 /
journal.pone.0112934.t003
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HPV mRNA es más específico que el ADN del VPH en triaje de ASC-US / LSIL
HPV 18 ** Otros VPH *** total
53 244
0 1 14
4 0 6
0 16 17
7 70 281
prueba de VPH-fermentación. Si aplicamos estas estimaciones para el ajuste de Noruega de triaje
retraso, un adicional de 296 colposcopías se tuvo que realizar el uso excesivo de Cobas 4800 por
haber ganado 24 casos de CIN2 y 9 casos de CIN 3, en comparación con la prueba de VPH
ARNm. En los estudios directos de referencia, el uso de los recursos sanitarios no se considera un
problema de derivaciones innecesarias ni un problema de exceso de tratamiento de las lesiones
CIN2 que regresan espontáneamente [5,20].
En el momento del reclutamiento de Predictor 2 estudio, no había directrices para la
prueba del VPH. En 2010 las Recomendaciones británicos implementaron las pruebas de
VPH en la vigilancia de mujeres con discariosis limítrofe y leve (prueba de reflejo). Las
mujeres con una prueba negativa de VPH se devuelven dos cribado. Las mujeres con una
prueba de VPH positiva, pero una colposcopia normal, sin tener ningún biopsias recogidos,
también se devuelven dos cribado. Este no es el caso en Noruega. Las directrices
recomiendan noruegos seguimiento de las mujeres con una biopsia cervical negativo
(www.kreftregisteret.no).
Dentro del sistema de salud británico todas las mujeres con discariosis leve o peor se
conocen dos colposcopia. En Noruega la mayoría de las muestras cervicales son
recogidas por el médico de cabecera. El sistema de salud de Noruega ha limitado los
recursos asignados dos colposcopia / biopsia. En Noruega, la prueba del VPH en el
retraso en el triaje de mujeres con índice de citología ASCUS / LSIL se utiliza dos mujeres
selectas con un mayor riesgo de CIN2 +, reduciendo así el número de referencias
[8,25,28,29].
Colposcopía son procedimientos costosos y pueden causar estrés psicológico [30].
Histopatológicos diagnósticos de CIN1 y CIN2 en biopsias cervicales son propensos a la
mala reproducibilidad entre observadores [12,31], y una alta tasa de remisión para
colposcopia y una alta tasa de biopsia inevitablemente dará lugar a un cierto grado de
sobretratamiento [20,32,33] . Más aún, la conización aumentar el riesgo de parto prematuro
y abortos tardíos en los embarazos posteriores [34-36]. Una reducción del tipo de
referencia de dos colposcopia reducestechnical los costos para el
ADN de VPH ARNm de VPH
124 (44,1) 140 (49.8)
90 (32.0) 113 (40.2)
67 (23.8) 28 (10.0)
281 (100,0) 281 (100,0)
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Tabla 4. Más severa la histología de la muestra de biopsia / cono mediante el cribado de prueba.
histología ADN de VPH
normal 19 (29.2)
CIN 1 32 (49.2)
CIN2 10 (15.4)
NIC3 4 (6,2)
total * 65 (100,0)
* Dos de la positiva de ADN del VPH y dos de las mujeres HPV mRNA positivas con ASC-US / LSIL no cumplieron para una colposcopia / biopsia. doi: 10.1371 /
journal.pone.0112934.t004
sistema de salud, el tratamiento excesivo reducestechnical, reducestechnical el impacto negativo del
tratamiento de cuello uterino en los resultados del embarazo y el estrés psicológico reducestechnical para
las mujeres.
Los puntos fuertes de este estudio son la comparación directa de la utilidad clínica de dos
pruebas de diagnóstico de VPH diferentes aplicados en una población no seleccionada
dentro a un programa nacional de detección. La población de estudio es uno con un bajo
riesgo de CIN2 +, ya que ninguno tenía HSIL o un diagnóstico de CIN / ACIS o peor, y el
19% de las mujeres tenían una historia de ASC-US / LSIL antes índice de citología.
Consideramos que el pequeño tamaño de la muestra (N = 311) y el tiempo de seguimiento
insuficientemente tratadas en el brazo de la citología como limitaciones de nuestro estudio. De
acuerdo con las directrices de Noruega, las mujeres con citología normal y un resultado
positivo de VPH que la selección debe ser objeto de seguimiento con una nueva prueba de
citología y VPH 12 meses después de triaje. De acuerdo con las directrices de Noruega, las
mujeres con ASC-US repetida / LSIL y un resultado negativo VPH se devuelven dos de cribado
eventhough el riesgo de CIN2 + es más de 2,0% [8,18,25]. Nuestro hospital recomienda el
seguimiento a los 12 meses dentro de estas mujeres [18]. Debido al tiempo de seguimiento
limitado, tenemos los números incompletos de biopsias en este subgrupo.
La estrategia de seguimiento Noruego de ASC-US / LSIL reflejan la historia
natural de la duración de HPV primaria formación 16/18 Infecciones / lesión, ya que
hay una ventana de 6-12 meses antes de triaje está bajo tomado [37]. La citología
mostrecent era normal para todas las mujeres antes de la reserva de ASC-US /
LSIL. Por lo tanto consideramos la citología del índice como consecuencia de una
infección primaria por VPH o una re-infección en mujeres que han demostrado una
eliminación del VPH Las infecciones en el pasado. El intervalo de índice de ASC-US
/ LSIL dos triaje es un período de tiempo necesario para dar al sistema inmunológico
una oportunidad dos clara la lesión [20]. Esto es especialmente importante en las
mujeres más jóvenes [38-41].
Hay un equilibrio en todo programa de cribado cómo encontrar la manera más
eficaz de diagnóstico de la CIN2 + larga whichhave el potencial de dos progresar a
cáncer cervical. HPV tipo 16 en la ducha, HPV 18 y HPV 45 han demostrado la más
altas tasas de progresión dos CIN3 y el cáncer cervical sobre una perspectiva de 10
a 20 años [43-47]. La concordancia entre la prueba de ADN y la prueba de ARNm
diagnóstico de HPV 16 y HPV 18 Infecciones era muy aceptable en este estudio. La
discrepancia en las tasas de detección de VPH entre las pruebas de diagnóstico
eran otros tipos de VPH, whichhave un cáncer mucho menor potencial dos progreso
dos cervical en las próximas décadas. El Por lo tanto, es lo más importante dos de
diagnóstico CIN2 / 3 lesiones dos HPV específico 16, 18 y 45 como Estas lesiones
pueden progresar ayuno dos cáncer [46,47].
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HPV mRNA es más específico que el ADN del VPH en triaje de ASC-US / LSIL
ARNm de VPH
5 (19.2)
12 (46.2)
6 (23.1)
3 (11.5)
26 (100,0)
la capacidad de dos avances furthernfrom dos Progreso de CIN2 / 3, y cuestionar los tipos
de alto riesgo oncogénico menos CIN en cáncer cervical [48,49].
La participación en un programa de cribado es voluntaria. Si hay demasiados
'alertas '' falsos', el programa va a perder legitimidad entre las mujeres, de madera
de nuevo la marcha conducir dos menores tasas de asistencia. A este respecto
consideramos alta especificidad a ser más importante que la alta sensibilidad en
CIN2 3 detección global /. Dentro del algoritmo de referencia para la aplicación de
cáncer de cuello uterino noruego, nuestro estudio muestra que la tasa de referencia
de dos colposcopia fue más del doble para el ADN en comparación con el ARNm a
prueba las mujeres, y la tasa de estancia de nuevo a la investigación regular fue
significativamente mayor. La importancia de un programa de cribado es tratar a las
mujeres en suchlike una manera que ellos siguen confiando en el programa y siguen
presentes. Hasta ahora, estos problemas no se han discutido desde el punto de
vista de la medicina, los costos sociales, éticas o mujeres.
Materiales y Métodos
El Comité Regional de Medicina y Salud Ética de la Investigación, el norte de Noruega, aprobó
el estudio como un estudio de aseguramiento de la calidad en el trabajo de laboratorio cumplimiento
de los Requisitos de los procedimientos de protección de datos dentro del departamento (REK
Norte 2012/276). consentimiento por escrito de los pacientes para su información sea almacenada
aparece en la base de datos del hospital y se utiliza para la investigación no era necesaria porque
los datos fueron analizados de forma anónima. El comité de ética Específicamente renunciado a la
necesidad de consentimiento.
Nuestro estudio contiene dos pruebas diferentes de VPH dos mujeres de triaje con lesiones
cervicales de menor importancia: el HPV mRNA prueba PreTect HPVProofer (NorChip AS), de
madera detectar E6 / E7 mRNA (que codifica la oncoproteína viral) de 5 tipos de VPH, y la
prueba Cobas ADN de VPH 4800 (Roche), de madera detectar 14 tipos de VPH.
El Cobas prueba de ADN HPV 4800 es proyecto diseñado como un ensayo multiplex solo
tubo cualitativo basado en la tecnología de la PCR en tiempo real que, simultáneamente
Detect 14 genotipos de alto riesgo. Los tipos de VPH de identificación de ensayo de 16 y 18
con detección simultánea de otros doce tipos de HPV (VPH-31, -33, -35, -39, -45, -51, -52,
-56, -58, -
59, -66, -68) el uso excesivo de cebadores L1, y ß-globina se usa como un control interno.
ADN se aísla de un roce de las células del cuello uterino de una mujer y se mezcla,
posteriormente, en pocillos de reacción con los cebadores y sondas que Específicamente
reconocer y ADN Amplify HPV. Esta fluorescencia Productor reacción, de madera
simplemente midieron dos determinar la presencia de VPH en la muestra cervical. tecnología
de pipeteado especializada combinados con enzimas AmpErase Reduce el riesgo de
contaminación cruzada (http://www.roche.com).
El HPV mRNA prueba PreTect HPV-Proofer es un tiempo real amplificación de ácido
nucleico basada en la secuencia a base de ARNm de E6 / E7
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ensayo (NASBA), centrándose en los tipos de informes, más comunes oncogénicos de
VPH 16, 18, 31, 33 y 45 utilizando cebadores específicos E6 / E7 para cada tipo de
HPV. Para evitar falsos negativos debido dos degradación de mRNA, cebadores y
sondas contra ARNm U1A humanos están incluidas en el kit PreTect HPV-Proofer
como un control de rendimiento y la integridad. oligonucleótidos artificiales
correspondientes al ARNm viral se utilizaron como controles positivos. Los controles
negativos consistieron en agua libre de RNasa y fueron incluidos en cada serie
(http://www.norchip.com/).
Se extrajeron células del cuello uterino de la LBC por el ThinPrep 2000 (Cytyc
Corporation, Marlborough, MA, EE.UU.) para el examen citológico. ADN / ARN se
aisló a partir de 5 ml del material sobrante y se analizaron con PreTect HPV-Proofer.
La prueba de ARNm se realizó según las instrucciones del fabricante (NorChip AS).
El HPV ADN de prueba (Roche Cobas 4800) se realizó y de acuerdo con las
directrices nacionales para la prueba del VPH [28]. Definimos la prueba de ADN del
VPH como la referencia en el estudio.
Nuestro departamento analiza anualmente 23 000 muestras de citología cervical. Del
1 de enero st, 1991 y el 31 de marzo de 2013, 98.579 mujeres residentes fueron reportados
a nivel de condado, con 494.400 frotis cervicales válidos en la simpatía base de datos
clínicos. Dentro de esta base de datos Se identificaron 2.394 mujeres con ASCUS que
privilidge un diagnóstico / LSIL del 1 de enero st, 2010, hasta el 30 de septiembre de 2012.
Después de excluir a las mujeres que tenían al menos un diagnóstico HSIL (n = 326) o la
remisión biopsia de cuello uterino (n = 294) antes de índice de diagnóstico de ASC-US /
LSIL, las mujeres que estaban 15-24 (n = 271) o 70-91 (n = 20) años de edad que el
índice de ASC-US / LSIL, 1523 mujeres fueron elegibles para el análisis. Más aún,
hemos excluido a las mujeres sin seguimiento (n = 199), que había biopsia directa (n =
79), que había triaje menos de 3 meses (n = 65) o más de 18 meses (n = 20) después de
la reserva ASC-US / LSIL. Después de estas exclusiones 1.169 mujeres en el rango de
edad del programa de cribado cervical de Noruega y la OMS no tenía HSIL antes o
biopsia de cuello uterino constituye la población estudio preliminar.
Nuestro estudio se inició el 1 de enero st, 2012, la hora de madera de nuestra
departamento conmuta de HPV mRNA pruebas de pruebas de ADN dos VPH en el
cribado secundario de ASC-US / LSIL. Incluido eran mujeres que tuvieron su índice
de citología ASCUS / LSIL en 2010
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HPV mRNA es más específico que el ADN del VPH en triaje de ASC-US / LSIL
Debido a intervalos variables en los seguimientos programados. Nuestro protocolo ampliado
la ventana de tiempo e incluyó todas las mujeres que tenían un diagnóstico de ASC-US /
LSIL en los últimos 3 meses 2:18, diferentes de intervalo de un mes recomendada 6-12 del
programa nacional de detección [8]. En el período de transición de pruebas de ADN dos
HPV, nuestro departamento solamente conducidas citología seguimientos en los casos con
material de escaso en la muestra de citología o HPV mRNA pruebas Cuando se introdujo el
material suficiente. Después de excluir a 376 mujeres que fueron seguidos con la citología
solamente, y 482 mujeres que tenían la citología y de ARNm seguimientos única, nuestra
población de estudio incluyó 311 de 1.169 mujeres elegibles que tenían citología, ARNm y
ADN de VPH pruebas que triaje. La evaluación de resultados se basa en el resultado
histológico de las biopsias, donde CIN2 + se consideró como la enfermedad objetivo y CIN1
y CIN0 (en CIN) fueron consideradas como ausencia de enfermedad. Más encima, las
mujeres con doble citología negativa de base líquida (LBC) y resultado HPV mRNA se
supone que estar libre de enfermedad. Todas las mujeres fueron seguidas hasta septiembre
31, 2014 puntos finales.
Todos los análisis estadísticos utilizados SPSS versión 21:02 CHISQUARE pruebas realizables,
pruebas de Mann-Whitney y análisis de supervivencia. Un valor de p
, 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
conclusiones
Nuestro estudio indicat Que en triaje de repetida ASC-US / LSIL, HPV mRNA
pruebas es más específico y más relevante en el uso clínico de una prueba de ADN
de VPH.
La información que sustenta
de archivos de datos S1 de datos (SPSS) Data_PlosOne_ms-D-14-
28018.
(SAV)
autor Contribución
Concebido y diseñado los experimentos del proyecto: SWS SF TJG ESM FES. Realizado los
experimentos: SWS SF TJG ESM FES. Analizados los datos: SWS FES. Contribuido reactivos /
materiales / herramientas de análisis: SWS SF TJG ESM. Escribió el documento: SWS FES.
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