I.

INTRODUCCION
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles
de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el
contraste es la utilización de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el
contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos
que usan un solo colorante llamados de tinción simple. Sin embargo, a menudo
se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso
denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción
Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. Esta tinción tiene gran
importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales
de la pared celular de las distintas bacterias. Mientras que las bacterias Gram
negativas son constantes en su reacción, los microorganismos Gram positivos
pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son Gram
lábiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias Gram positivas
pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y, en consecuencia, se tiñen por
la safranina apareciendo como Gram negativas.
La tinción Gram es de gran importancia en Microbiología porque permite
diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram positivas y Gram negativas),
según se comporten ante esta tinción. El fundamento radica en la diferente
estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una
gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram-
tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica
externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un
lavado con etanol que arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras que
en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules.
Las células Gram (-) se teñirán después con un colorante de contraste
(safranina) para que puedan observarse.

OBJETIVO

OBJETIVO GENERAL:
Realizar adecuadamente el frotis de bacterias sobre el portaobjeto para llevar a
cabo la tinción con los colorantes que componen la tinción de Gram, e identificar
si se tratan de bacterias Gram positivas o Gram negativas al momento de
observarla al microscopio.

OBJETIVO ESPECIFICO:
Observar las diferencias que existen en la tinción Gram positivas y Gram
negativas.
 II. METODO TEORICO

HISTORIA DE LA TINCION GRAM

En 1884, un bacteriólogo danés, Christian Gram, desarrolló una técnica de
tinción que permite separar a las bacterias en dos grandes grupos: gram
positivas y gram negativas, basados en si retienen o no, el colorante primario
(cristal violeta) luego del proceso de decoloración. Los organismos que retienen
el cristal violeta luego de la adición del agente decolorante, el alcohol, aparecen
como azul oscuro o violeta, y se designan como gram positivos; aquellos que
pierden el cristal violeta y se tiñen con el colorante secundario, la safranina,
aparecen como rojos y se designan como gram negativos.

TINCION GRAM
Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en
muestras clínicas. También se emplea como primer paso en la diferenciación
bacteriana. El examen con microscopio óptico de preparación con tinción de
Gram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas
comunes son cocos (esféricas), bacilos (alargadas) y formas espiraladas
Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los
microorganismos Gram. positivos se tiñen de azul, mientras que
aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los
organismos espira lados se tiñen de rojo y se dice que son gramnegativos.
Las aplicaciones más comunes de la coloración de Gram son las siguientes:
 La presencia de cocos gram positivos agrupados sugiere
estafilococos; en cadenas sugiere estreptococos; en forma de
lanceta a los diplococos.
 La presencia de diplococos gramnegativos son características de
especies de Neisseria
 Los bacilos Gram. positivos grandes sugieren especies de Bacillus
o clostridium, los bacilos Gram. positivos pequeños sugieren
especies de Listeria o una de las corineiformes (difteroides)
 Los bacilos Gram. negativos son las bacterias mas comunes
halladas en los laboratorios clínicos e incluyen a
Enterobacteriaceae, bacilos no fermentados y especies de
Haemophilus.
El valor diagnóstico de esta tinción es variable; normalmente permite una buena
orientación al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más
adecuadas y también tiene valor en orientar hacia un diagnóstico etiológico, en
especial para instaurar un tratamiento inicial.
DIFERENCIAS DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS

 T Stuart Waiker, Me Graw Hill, Mexico-2000-Editores S.A-Microbiología.

 Jawest - Meinick y Edelberg, 16a Edición- México - Manual Moderno
Microbiología Médica.
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 Restrepo Angela, Robledo Jaime. 6a Edición - Corporación
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Enfermedades Infecciosas.