“Año del Dialogo y la Reconciliación Nacional”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ODONTOLOGIA

PROYECTO DE INVESTIGACION PARA OBTENER EL GRADO

DE BACHILLER EN ESTOMATOLOGIA

AUTOR:

Alva Paredes Alejandro

ASESORA:

CD. Mg. Honores Solano Tammy Margarita

Trujillo – Perú
2018
Título de la tesis

EFECTO ANTIBACTERIANO IN VITRO DEL

EXTRACTO DE BROMELINA FRENTE A Streptococcus
mutans ATCC 25175
 INDICE

1. Título de la tesis.----------------------------------------------------------------------------------------- 2

2. Contenido (índice) ------------------------------------------------------------------------------------- 3

3. Introducción----------------------------------------------------------------------------------------------- 4

4. Planeamiento de la investigación----------------------------------------------------------------- 5

4.1. Planteamiento del problema:

a) Caracterización del Problema: --------------------------------------------------- 5

b) Enunciado del problema: ---------------------------------------------------------- 5

4.2. Objetivos de la investigación: -------------------------------------------------------- 5

4.3. Justificación de la investigación: --------------------------------------------------- 5

5. Marco teórico y conceptual.-------------------------------------------------------------------------6

5.1. Antecedentes--------------------------------------------------------------------------------- 6

5.2. Bases teóricas de la investigación----------------------------------------------------- 9

5.3. Hipótesis------------------------------------------------------------------------------------ 13

6. Metodología.------------------------------------------------------------------------------------------- 13

6.1. El tipo de investigación------------------------------------------------------------------ 13

6.2. Nivel de la investigación de las tesis.------------------------------------------------ 13

6.3. Diseño de la investigación. ------------------------------------------------------------ 13

6.4. Población y muestra.-------------------------------------------------------------------- 13

6.5. Definición y operacionalización de variables-------------------------------------- 14

6.6. Técnicas e instrumentos de recolección de datos------------------------------- 15

6.7. Plan de análisis--------------------------------------------------------------------------- 15

6.8. Matriz de consistencia------------------------------------------------------------------ 16

6.9. Principios éticos------------------------------------------------------------------------ 17

7. Referencias bibliográficas ---------------------------------------------------------------------- 18

8. Anexos ------------------------------------------------------------------------------------------------- 18
 INTRODUCCION

La bromelina es un extracto crudo, acuoso de los tallos y Frutos de piña (Ananas

comosus) derivados de Familia de las bromeliaceas1.

En la planta de piña, la bromelina esta acumulada en toda la planta, con diferente

extensión y Propiedades en función de su fuente. Se distingue como bromelina de fruta o
bromelina de tallo, la más disponible comercialmente es la que deriva del vástago. La
bromelina también está presente en los desechos de piña como el núcleo, cáscara, corona
y hojas en cantidades relativamente pequeñas en comparación con el tallo1.

La bromelina es una mezcla de proteínas que digieren enzimas llamadas proteasas y otras
varias sustancias en pequeñas cantidades. La bromelina es conocida por sus aplicaciones
clínicas. Otorga modulación del crecimiento del tumor, mejora la coagulación de la
sangre, mejora de la acción antibiótica y anti inflamatoria. Posee propiedades de gran
valor terapéutico. Además se ha demostrado que la bromelina se absorbe bien después de
la administración oral o aplicación y no tiene ningún impacto negativo en la salud después
de uso prolongado1.

Esta mejora la absorción de fármacos, pero en principal y mayor medida de los

antibióticos. Debido a los antecedentes anteriores se realizará este estudio con el objetivo
de determinar el efecto antimicrobiano del extracto de bromelina frente al Streptococcus
mutans ATCC 251751.

La ejecución del proyecto es de suma necesidad, debido a que en los últimos años según
estudios recientes se ha revelado que hay un incremento en la caries dental en adultos y
niños, esto se puede dar a muchos factores, debido a la falta de conocimiento sobre una
correcta higiene oral, debido a esto hay un incremento de las bacterias orales que
ocasionan diversas enfermedades de la cavidad oral; de las cuales se debe dar suma
importancia al Streptococcus mutans ATCC 25175, debido a que es la principal bacteria
que favorece la creación de la caries dental.

A través de esta investigación se pretende entender cómo es que actúa la bromelina como
agente antibacteriano frente al Streptococcus mutans ATCC 25175, para la cual se
realizara una investigación de tipo cuantitativa y experimental teniendo como población
las muestras de Streptococcus mutans ATCC 25175 contenidas en placas Petri, en las
cuales se les aplicara la bromelina previamente extraída; posteriormente se evaluaran los
resultados obtenidos.

4. PLANEAMIENTO DE LA INVESTIGACION

I. Planteamiento del problema:

a) Caracterización del problema:

Estudios han demostrado que el Streptococcus mutans ATCC 25175 está seriamente
relacionado a la caries dental, ya que este está comprometido con la fabricación de la
biopelicula lo cual le otorga un ambiente apropiado para poder prosperar y
propagarse.

Este microorganismo se caracteriza por la destrucción de los tejidos duros del diente.
Siendo la caries una enfermedad muy común. Se han realizado investigaciones con
respecto a la bromelina de la piña, para confirmar su efecto antimicrobiano, teniendo
respuestas satisfactorias tanto que refieren algunos artículos de investigación tanto
que si se consume su fruto directamente, se obtiene resultados como si se tomara
extractos de bromelina.

b) Enunciado del problema:

 ¿Cuál es el efecto antibacteriano del extracto de bromelina frente a Streptococcus

mutans ATCC 25175?

II. Objetivos de la investigación

a) Objetivo General:
 Determinar el efecto antibacteriano in vitro de bromelina frente a Streptococcus
mutans ATCC 25175

b) Objetivos Específicos:
 Evaluar el efecto antibacteriano in vitro de bromelina al 50% frente Streptococcus
mutans ATCC 25175
 Evaluar el efecto antibacteriano in vitro de bromelina al 75% frente Streptococcus
mutans ATCC 25175
 Evaluar el efecto antibacteriano in vitro de bromelina al 100%
frente Streptococcus mutas ATCC 25175

III. Justificación de la investigación:

La ejecución del proyecto es de suma necesidad, debido a que en los últimos años según
estudios recientes se ha revelado que hay un incremento en la caries dental en adultos y
niños, esto se puede dar a muchos factores, debido a la falta de conocimiento sobre una
correcta higiene oral, debido a esto hay un incremento de las bacterias orales que
ocasionan diversas enfermedades de la cavidad oral; de las cuales se debe dar suma
importancia al Streptococcus mutans ATCC 25175, debido a que es la principal bacteria
que favorece la creación de la caries dental.
A través de esta investigación se pretende dar a conocer la actividad antibacteriana de la
bromelina extraída de la piña frente a Streptococcus mutans ATCC 25175, para que de
esta forma los odontólogos tengan más conocimientos al tratar de combatir a dicha
bacteria, lo cual de esta forma se lograra una atención más eficiente a los pacientes que
sufran con dicho problema y de esta forma tratarlo de una forma más eficaz.

5. Marco teórico y conceptual

5.1 ANTECEDENTES:
- Manzoor (2016). “Bromelaina: Métodos de extracción, purificación y
aplicaciones terapéuticas”
Este estudio investigativo, analiza la mejor forma de lograr la extracción,
purificación y aplicación terapéutica de la bromelina extraída de la piña de la
forma más económicamente posible8.
Como metodología se utilizó la bromelina extraída de tallos ya que esta se puede
conseguir a muy bajo costo, posteriormente se extraerá a través de centrifugación,
ultrafiltración, liofilización y cromatografía liquida de proteínas rápidas de dos
pasos8. Después de la extracción de la mezcla es sometida a una purificación para
de esta forma lograr erradicar las impurezas que puedan interferir con la bromelina
para complicar su aplicación y reducir la actividad específica de la enzima8.
La extracción y aplicación de la bromelina se realizó satisfactoriamente, pero se
necesita una estrategia que logue purificar la bromelina de mejor forma y en
menos pasos8.
- Abdulrahman (2015) “Efectos antimicrobianos de la bromelina cruda
extraída de la fruta de la piña. (Ananas comosus (Linn.) Merr.)”.
Este estudio se realizó con el propósito de evaluar la actividad antimicrobiana de
la bromelina extraída del fruto de la piña (Ananas Comosus)1.
Para esta investigación se realizó una extracción de bromelina de la piña mediante
homogeneización en solución de tampon de fosfato frio, de la cual queda la
bromelina cruda, la cual fue estimada por el método de Bradford y la enzima se
 ensayó mediante el método de digestión con caseína1. Esta fue implemetanda en
6 tipos de bacterias: Proteus spp, Corynebacterium spp, B. Subtilis, S. pyogenes
y dos cepas diferentes de E. coli., fueron aisladas e identificadas por los métodos
convencionales1.
La actividad antimicrobiana de la bromelina cruda se determinó mediante el
método de difusión en disco. Una cepa de E. coli tuvo la mayor zona de inhibición
a 25 ° C, pero la otra cepa fue resistente. Corynebacterium spp fue el menos
inhibido de todos los organismos con una zona de inhibición de 8,33 ± 0,33 mm
a 37 ° C y 45 ° C. Proteus spp fue inhibido, pero el efecto no dependió de la
temperatura. B. subtilis y S. pyogenes fueron resistentes al extracto crudo a todas
las temperaturas probadas en pH neutro medio de comunicación. B. subtilis, S.
pyogenes y E. coli se inhibieron totalmente a pH 10.0. La enzima cruda exhibió
mejor actividad contra Proteus spp. a pH 10.0, pero no pudo inhibir el crecimiento
de Corynebacterium spp1. La bromelina bruta parece ser más efectiva en la
inhibición de bacterias gram positivas que gram negativas. La bromelina bruta
puede ser un agente antimicrobiano eficaz contra E. coli y proteus spp1.
El estudio concluyo sugiriendo que la bromelina cruda puede ser efectiva como
agente antimicrobiano contra E. coli, y Proteus spp. Streptococcus pyogenes, y
Bacillus subtilis fue resistente a la bromelina cruda. El crudo el extractode
bromelina fue más potente a 25 ° C y 37 ° C en pH neutro medio contra E. coli y
Proteus spp. respectivamente. La enzima cruda mostró mejor actividad contra
Proteus spp. a pH 10.0. Pero además se identificó que la combinación de la
bromelina cruda combinada con algún antibiótico tuvo mayor efecto que solo
implementado el crudo de bromelina1.

- Anjos (2016) “Actividad antibacterial de papaína y bromelina sobre

alicyclobacillus spp”.
Este estudio se realizó con el propósito de analizar el efecto antibacteriano de la
papaína y bromelina sobre Alicyclobacillus spp. Además de establecer la
concentración mínima inhibidora y antiséptica, comprobar la curva de tiempo de
muerte del microorganismo en presencia y falta de enzimas y por ultimo
investigando el mecanismo enzimático sobre el microorganismo2.
Como metodología se utilizó diversas combinaciones enzimáticas, tales como la
combinación de las enzimas con nisina, donde se demostró que la cepa
 Alicyclobacillus acidoterrestris, la CIM de papaína fue de 0,98 μg / ml y la MBC
fue de 3,91 μg / ml, mientras que la CIM de bromelina fue de 62,5 μg / ml y la
MBC fue de 250 μg / ml.
El resultado fue que la concentración de 4 x CIM para las 2 enzimas fue la
adecuada para eliminar 4 registros del microrganismo posterior de las 24 horas de
incubación2.
Se concluyó la investigación con la demostración de que las enzimas bromelina y
papaína tienen un efecto antibacteriano sobre Alicyclobacillus acidoterrestris2.

- Cai (2016) “Serenoa repens asociado con selenio y extracto de licopeno y

bromelina y metilsulfonilmetano pueden mejorar la eficacia de levofloxacina
en pacientes con prostatitis bacteriana crónica”.
Este estudio se realizó con el propósito de mejorar el tratamiento en pacientes con
prostatitis bacteriana crónica (PBC), especialmente en términos de alivio de los
síntomas. Se evaluo la eficacioa y la seguridad de una conbinacion de serenoa
repens, extracto de selenio y licopeno + extracto de bromelina y
metilsulfonilmetano asociado con levofloxacina en pacientes con PBC3.
Se realizó este estudio con todos los pacientes con diagnóstico clínico e
instrumental de PBC admitidos en una única Institución de Urología de marzo a
junio de 2015 se inscribieron en este estudio de fase III. Todos los pacientes
incluidos fueron asignados al azar en dos grupos: el grupo A recibió levofloxacina
500 mg od durante 14 días asociado con licopeno y metilsulfonilmetano; El grupo
B recibió levofloxacina (500 mg od durante 14 días) solamente. Los análisis
clínicos y microbiológicos se realizaron en el momento del ingreso (T0) y durante
los seguimientos a 1 mes (T1) y 6 meses (T2) desde el final del tratamiento. Se
utilizaron los cuestionarios Índice de Síntomas de la Prostatitis Crónica (CPSI,
por sus siglas en inglés), la Puntuación Internacional de los Síntomas de la
Prostática (IPSS) y los cuestionarios de Calidad del Bienestar (QoL)3.
Los resultados que se obtuvieron fueron que cuarenta pacientes que se
inscribieron en el Grupo A y 39 en el Grupo B. Durante el seguimiento (T1),
registramos cambios significativos en términos de NIH-CPSI e IPSS en el Grupo
A y versus el Grupo B en el análisis intergrupal3. No se lograron apreciar
diferencias en cuanto a los hallazgos microbiológicos entre los dos grupos. En la
segunda visita de seguimiento (T2), los resultados del cuestionario demostraron
 diferencias estadísticamente significativas entre los grupos. Un paciente en el
Grupo A (2,5%) y 7 pacientes (17,9%) en el Grupo B mostró una recidiva
sintomática y microbiológica3.
Se pudo concluir que la combinación de extractos de serenoa, selenio, licopeno
+ bromelina y metilsulfonilmetano mejoró la eficacia clínica de la levofloxacina
en pacientes afectados de PBC sin el desarrollo de efectos secundarios3.

- George (2014) “Caracterización funcional de bromelina recombinante de

Ananas comosus expresada en un sistema procariótico”.
El estudio se realizó con la intención de poder analizar la amplificación de las
cualidades terapéuticas de la bromelina7.
El método utilizado fue utilizando el gen codificador completo de la bromelina en
el tallo de la piña, este se amplificó mediante RT-PCR. El producto de la PCR se
clonó, se secuenció y se determinó7.
El análisis de secuencia reveló la secuencia peptídica deducida del gen, el cual
mostró las variaciones de aminoácidos, propiedades fisicoquímicas y
características estructurales secundarias y terciarias de la proteína7.
Se concluyó que la bromelina recombinante (rBRM) presenta efecto inhibitorio
en el crecimiento de cepas Gram-positivas y Gram-negativas de Streptococcus7.

5.2. BASES TEORICAS:

Caries Dental:

La enfermedad común mente conocida como “caries” es el problema de salud más

extendido a nivel global, aunque se ha observado en los últimos años un claro
descenso en los países desarrollados, no sucede lo mismo en los menos ricos, lo
que ha provocado el interés de los investigadores en estudiar el perfil
epidemiológico de la caries dental, así como su prevalencia12.

La caries dental ha sido descrita como una enfermedad multifactorial directamente

relacionada con la alimentación, bacterias intraorales, composición de la saliva y
otros factores12.
 Debido a diversos elementos que se relacionan con la evolución de un conjunto
aglomerado de bacterias, las cuales pasan de ser una biopelícula saludable a una
patológica9. Se puede denominar a una “biopelícula sana” cuando esta está
conformada con alrededor de 700 diversos tipos de bacterias, entre estas menos
del 1% son bacterias patogénicas; se puede decir que una biopelícula se encuentra
saludable cuando esta actúa como defensa de línea inicial para ayudar a defender
la cavidad oral de diversas infecciones causadas por distintas bacterias
patogénicas9.

La caries dental siempre ha sido relacionada como una enfermedad multifactorial

enlazada con la dieta, con bacterias intraorales y con la composición de la saliva
y de otros diversos factores5.

Esta enfermedad ha sido muy problemática por su extensión entre la población sin
importan la edad de las personas, en los últimos años ha ocurrido una disminución
de esta en los países más desarrollados, pero es todo lo contrario en los países
subdesarrollados5. Por tal motivo las investigaciones sobre esta enfermedad se han
aumentado, ya que es de suma importancia el poder disminuir la prevalencia de
esta misma5.

Streptococcus Mutans ATCC 25175:

La comunidad científica señala al Streptococcus mutans ATCC 25175 como el

microrganismo que tiene más participación en la caries dental. Por lo tanto, las
estrategias de aislamiento, identificación, tipificación, prevención y control están
dirigidas hacia este6. El Streptococcus mutans ATCC 25175 es un coco
grampositivo que fue aislado e identificado por Clarke, en 1924, a partir de
lesiones cariosas en humanos6. Lo denominó Streptococcus mutans ATCC 25175
por la forma en la que se presenta: cocobacilo (forma ovalada) en un medio ácido
y coco (forma redonda) en un medio alcalino6.
La mayoría de las cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175 producen
mutacinas (bacteriocinas) que son péptidos antimicrobianos que pueden inhibir
principalmente el crecimiento de bacterias relacionadas genéticamente y
ambientalmente19.

Clasificación:
Estos son clasificados teniendo en cuenta a los enlaces de los polisacáridos de su
pared celular y a su composición, el Streptococcus mutans ATCC 25175 se puede
clasificar en 8 serotipos:
 Streptococcus mutans (serotipos c, e, f y k)
 Streptococcus sobrinus (serotipos d y g)
 Streptococcus cricetus (serotipo a)
 Streptococcus rattus (serotipo b)
 Streptococcus ferus (serotipo c)
 Streptococcus macacae (serotipo c)
 Streptococcus downei (serotipo h)

Es bien sabido que el serotipo c de Streptococcus mutans ATCC 25175 es el

serotipo con mayor presencia en la boca, incluso más que las cepas e, d, f y k9.

Esta bacteria debido a que es anaeróbica facultativa le es de suma importancia el

estar en contacto con el oxígeno, ya que lo utiliza para su crecimiento, por el
contrario si está en un ambiente con falta de oxígeno esta se podrá mantener viva.
Sin embargo, para que pueda crecer apropiadamente necesitara estar en
anaerobiosis6. En medios de cultivo con sacarosa este microrganismo tiene la
capacidad de producir polisacáridos extracelulares, además de adquirir una forma
rugosa, opaca y blanca, la cual no se puede unir al medio de cultivo, esta algunas
veces es rodeada por polímeros de glucano de aspecto húmedo6. Estos
streptococcus carecen la capacidad de hidrolizar el almidón6.

El Streptococcus mutans ATCC 25175 tiene la capacidad de producir

polisacáridos extracelulares desde la sacarosa por la acción de dos enzimas: la
glucosiltransferasa (GTF) y la fructosiltransferasa (FTF). La GTF se encarga de
sintetizar el glucano a partir de la glucosa, y la FTF, fructano a partir de la
fructosa6.

El Streptococcus mutans ATCC 25175 se encuentra de forma permanente en la

cavidad oral después de la erupción dental, debido a que requiere la presencia de
tejido duro no descamativo para colonizar6.

Streptococcus mutans es considerado un streptococcus a-hemolítico o no

hemolítico, que aparenta a simple vista ser un bacilo, esto pasa cuando se bloquea
 de un medio con pH ácido13. Esta bacteria fue descrita por Clarke en 1924, quien
fue el primero en darse cuenta de la variación en la morfología con el pH del
medio13.

Es de conocimiento que el Streptococcus mutans ATCC 25175 es un

microrganismo que forma parte de la floral oral microbiana, debido a esto se le
puede encontrar tanto en pacientes sin presencia de caries como en pacientes con
caries6. En estos tiempos los estudios realizados Actualmente, los estudios no solo
van dirigidos a la búsqueda del Streptococcus mutans ATCC 25175 en la saliva y
la placa dental, por el contrario también se realizan investigaciones a la
cuantificación de dicho microrganismo6. A través de diversos estudios se ha
demostrado una correlación entre el conteo de este microorganismo en la boca con
la aparición de la caries6. Por el contrario, en diferentes estudios no se ha podido
encontrar la conexión entre la cantidad de Streptococcus mutans ATCC 25175 y
la aparición de caries6.

Plantas Medicinales

Las diversas plantas medicinales siempre desde la antigüedad se han empleado

para proteger la salud, en la actualidad esta es una práctica que lo realizan más del
80% de toda la población mundial según la OMS (Organización Mundial de la
Salud) 20. Esto ha ocasionado un gran incremento en la utilización de los vegetales,
plantas y frutos empleados con dicho fin, los cuales representan de gran manera
una opción terapéutica, debido al cambio de mentalidad de diversas culturas,
además de los altos precios de los fármacos20.

En estos recientes años se ha podido observar un crecimiento del interés por los
fitomedicamentos, esto no solo está pasando en los países más desarrollados, los
mercados nacionales e internacionales, sino que las autoridades sanitarias y la
opinión pública han tomado interés en la inocuidad y la calidad de estos
medicamentos17.

Entre las cuales podemos encontrar: el aloe vera, el jengibre, el orégano, la papaya,
la piña, etc. Entre algunos de los más conocidos.

La Piña
 La piña o ananas comosus pertenece a la familia de la bromeliacea. El cultivo de
la piña cobra cada vez mayor importancia a nivel mundial, siendo una de las frutas
tropicales más apetecidas por su excelente sabor, sus propiedades culinarias y
medicinales. Constituye la tercera fruta más importante del mundo después de los
cítricos y plátanos, el 70% de la piña que se produce a nivel mundial16.

Dichas cualidades terapéuticas de la piña son gracias a la bromelaina, que es un

extracto elemental de la piña que contiene, junto con otros compuestos, diversas
proteinasas14. La bromelina ha demostrado mostrar diversas facultades
fibrinolíticas, antiedematosas, antitrombóticas y antiinflamatorias desde in vitro
hasta in vivo14. Desde que se conocía químicamente la bromelina, se ha
implementado como agente fitomédico14. Para confirmar dicha naturaleza se han
realizado varios estudios clínicos, los cuales han demostrado que la bromelina
puede ayudar en el tratamiento de varias enfermedades, tales como: enfermedades
cardiovasculares, la osteoartritis, la diarrea y el cáncer14. Ha sido ampliamente
utilizado en el desbridamiento de quemaduras, coagulación e inmunogenicidad.
Se ha utilizado ampliamente como agente antiinflamatorio, sin embargo, su uso
como agente antibacteriano aún no se ha estudiado en su totalidad14.

La Bromelina

La bromelina fue extraída por primera vez del jugo de la piña a finales del siglo
XIX y la cual se presentaba como un complemento terapéutico en el siglo XX.
Este es un cisteíno-proteasa, aislada y purificada de diversos órganos de muchas
plantas de la familia Bromeliacease4. Esta cumple una función fisiológica de gran
importancia al influenciar en diversas reacciones metabólicas y a la vez proteger
al vegetal de sufrir enfermedades y el ataque de plagas4. Presenta una gran
cantidad de cualidades farmacológicas: mejora la recepción de medicamentos,
priva la agregación de plaquetas, además se utiliza como un antiinflamatorio y en
la creación de vacunas4.

Esta puede adquirir diversas propiedades dependiendo del sitio o zona donde fue
extraída, se puede considerar como bromelina del tallo (SBM) o bromelina de la
fruta (FBM). La bromelina permanece activa enzimáticamente en un amplio
espectro y soporta un rango de pH (5,5 a 8,0) y temperatura (35,5 a 71 ºC)8.
 Es una de las enzimas proteolíticas ampliamente investigadas debido a sus
aplicaciones sorprendentes en diversas industrias. Esto demandaba el empleo de
una estrategia que resultara en la bromelina purificada más alta en menos pasos y
el costo más bajo8. El uso de un enfoque modernista, como la filtración por
membrana, los sistemas micelares inversos, la extracción acuosa en dos fases y
las técnicas cromatográficas se han mostrado prometedores a este respecto.
Además de sus aplicaciones industriales, la bromelina ha sido ampliamente
utilizada como un potencial compuesto fitomédico8. Algunas de sus acciones
informadas contienen la inhibición de la agregación plaquetaria, anti edematoso,
anti trombótico, antiinflamatorio, modulación de citoquinas e inmunidad,
desbridamiento de la piel y actividad fibrinolítica8. También ayuda a la digestión,
mejora la absorción de otras drogas y es un agente potencial postoperatorio que
promueve la cicatrización de heridas y reduce la molestia y la hinchazón
postquirúrgicas8.

5.3. HIPOTESIS:

- Si existe efecto antibacteriano in vitro de bromelina frente a Streptococcus mutans

ATCC 25175.
6. METODOLOGÍA
6.1 Tipo de Investigación

La presente investigación es de tipo cuantitativo y experimental.

6.2 Nivel de Investigación

El nivel de investigación es explicativo, debido a que se analizara y se dará a

conocer la razón de los resultados obtenidos.

6.3 Diseño de la Investigación

El diseño de la investigación es experimental a partir del cual se analiza la

existencia del método de acción de la bromelina extraída de la piña como

agente antibacteriano sobre streptococcus mutans ATCC 25175.

6.4 Población y Muestra

- El tamaño de la población es indeterminada. La población estará conformada por
Streptococcus mutas.

- Muestra:
(𝑧𝛼⁄2 + 𝑧𝛽 )2 2𝑆 2
𝑛=
(𝑥̅1 − 𝑥̅2 )2

Donde:

𝒛𝜶⁄𝟐 = 1.96 para un 𝜶 = 0.05

𝒛𝜷 = 0.84 para un 𝜷 = 0.20

̅𝟏 − 𝒙
𝑺 = 0.8 (𝒙 ̅𝟐 ) valor por no estar especificado en estudios previos.

Reemplazar:

(1.96+0.84)2 2(𝑥̅ 1 −𝑥̅ 2 )2

𝑛= = (2.8)2 x 2 x 0.64 = 10 repeticiones.
(𝑥̅ 1 −𝑥̅ 2 )2

6.5 Definición y Operacionalización de variable

Definición Tipo de Escala de

Variable Indicador
Conceptual variable medición
Diámetros de
Variable halos de
Dependiente Esta bacteria es anaeróbica inhibición
facultativa, es un coco formados
Efecto antibacteriano grampositivo que se medidos con Cuantitativos De razón
frente a localiza comúnmente en la un varnier y
STREPTOCOCCUS cavidad oral humana11. reportado en
MUTAS ATCC 25175 milímetros.

Es una proteasa encontrada

en diversas partes de la
Variable planta de piña "Ananas 50% de
Independiente comosus", familia de las concentración
Bromeliáceas. Constituye de Bromelina.
una compleja mezcla de 75% de
diferentes endopeptidasas- concentración Cualitativo Nominal
BROMELINA tiol y otros componentes15. de Bromelina.
Destaca por su capacidad 100% de
de digerir las proteínas concentración
descomponiéndolas en de Bromelina.
aminoácidos18.
6.6 Técnica e Instrumento de recolección de datos:

Se obtendrá el fruto de la piña del “Centro poblado el Platanar” del distrito de

poroto, de la cual se extraerá la bromelina, la fruta será lavada con agua destilada,
secada y pelada, alrededor de 100 gramos de homogeneizara haciendo uso de
una licuadora agregando 50 ml de tampón fosfato frio (pH 7,0). La mezcla se
filtrara con un paño y se centrifugara a 4000 rpm por 10 min. El residuo que
quede; también conocido como bromelina cruda, será la que se utilizara para la
investigación.
Se colocará 50ml, 25ml y 0 ml de agua destilada en envases a las cuales se le
agregará 50ml, 75ml y 100 ml de la bromelina extraída, para obtener las
concentraciones de 50%, 75% y 100%. Para obtener el 100% se colocara el
extracto puro.
La cepa certificada de Streptococcus mutans ATCC 25175 será proporcionado el
Laboratorio de Microbiología de la Universidad Nacional de Trujillo. Se colocara 1ml
de caldo nutritivo, TBS (Tryptip Soy Broth), para suspender la cepa de Streptococcus
mutans ATCC 25175 en el vial. Dicha suspensión posteriormente se pipeteara en 4ml
de caldo TBS para rehidratar la cepa de Streptococcus mutans ATCC 25175.
Posterior mente se depositara la suspensión bacteriana sobre el medio de Müller Hinton
(presente en la placa Petri con 4 mm de espesor de medio) y se dispersará por técnica
de kyrbi Bauer.
Se prepararán discos de papel filtro estériles, los cuales serán sumergidos con una pinza
estéril, en el preparado de las cepas probióticas. Luego, con una pinza estéril, los discos
serán colocados sobre las placas de Müller Hinton inoculadas con la cepa de
Streptococcus mutans ATCC25175 los cuales serán cultivados en anaerobiosis durante
dos días.
Los resultados se obtendrán de las mediciones de los diámetros de halos de inhibición
formados. Los cuáles serán medidos con un vernier y reportado en milímetros en la
tabla de recolección de datos.

6.7 Plan de análisis:

Para interpretar los resultados que se obtendrá del presente estudio, se utilizaran
pruebas estadísticas inferenciales. Se empleará la prueba ANOVA con un nivel
de significancia del 5% (p<0.05).
 6.8 Matriz de consistencia:

TITULO PROBLEMA OBJETIVO HIPOTESIS TIPO DE POBLACION

ESTUDIO

Efecto ¿Cuál es el Objetivo General: Si existe POBLACION

Determinar el
antibacteri efecto efecto método de
El tamaño de la
ano in antibacteriano antimicrobiano in acción de la
vitro de la población está
vitro del del extracto de bromelina bromelina
determinada por
extracto de bromelina extraída de la piña extraída de la Nivel de
sobre Streptococc las placas Petri
bromelina frente a us mutans ATCC piña como Investigación
conteniendo
frente a Streptococcus 25175. agente Es de nivel
Streptococcus
Streptococ mutans ATCC antibacterian explicativo
Objetivo mutans ATCC
cus mutans 25175? Específico: o sobre
Evaluar el efecto 25175.
ATCC Streptococcus
antibacteriano de
25175. la Bromelina mutans
extraída de la piña
ATCC
al 50% MUESTRA
frente Streptococc 25175. Diseño de la
us mutans ATCC
Investigación Se necesitara de
25175
diseño 3 placas Petri
Evaluar el efecto
experimental para ejecutar la
antibacteriano de
la Bromelina investigación de
extraída de la piña
bromelina frente
al 75%
frente Streptococc a Streptococcus
us mutans ATCC
mutans ATCC
25175
25175 con
Evaluar el efecto
distinta
antibacteriano de
la Bromelina concentración.
extraída de la piña
al 100%
frente Streptococc
us mutas ATCC
25175.
6.9 Principios éticos

El presente estudio respeta todas las éticas dadas en las líneas de investigación
científica establecidas en el país, teniendo en cuenta los principios bioéticos.

Se publicaran los resultados sin alterar ningún dato, la cual asegurara la

validez, fiabilidad y credibilidad en el estudio de investigación.
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