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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
DEL TRACTO DIGESTIVO DE LARVAS
DE COLEÓPTEROS Y LEPIDÓPTEROS
DETRITÍVOROS Y EVALUACIÓN, in vitro, DE SU EFECTO
ANTAGÓNICO EN UNA CEPA DE Fusarium oxysporum.
ISOLATION OF MICROORGANISMS FROM DETRITIVORE COLEOPTERA AND
LEPIDOPTERA LARVAE DIGESTIVE TRACT AND EVALUATION, in vitro, OF
ANTAGONIC EFECT ON A Fusarium oxysporum STRAIN.
1. Estudiante Programa Biología Aplicada, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Militar Nueva Granada.
2. Laboratorio de Ecología, Docente Programa de Biología Aplicada, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Militar Nueva Granada.
3. Laboratorio de Fitopatología, Docente Programa de Biología Aplicada, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Militar Nueva Granada.
4. Autor para correspondencia: joaquin.quinones@unimilitar.edu.co
ser reconocida (Boekhout, 2005; Nardi et al., meses. Se colectaron individuos de una mor-
2006). El estudio del tipo de microorganismos foespecie de lepidóptero, incluida en la colec-
presentes en el tracto digestivo de insectos de- ción de referencia de detritívoros de canastas
tritívoros, se convierte en el primer paso para (Flórez. M, comunicación personal).
la realización de estudios de exploración de la Las larvas colectadas se mantuvieron a tem-
edafofauna y de inventarios preliminares de mi- peratura ambiente en recipientes plásticos con
croorganismos. suelo y sustrato hasta su disección a las tres y
En este trabajo exploratorio se aislaron los dos semanas, respectivamente.
microorganismos presentes en el tracto diges-
tivo de larvas de dos especies un coleóptero Extracción del tracto digestivo de las
y un lepidóptero, ambos detritívoros. También, larvas
se evaluó el posible efecto antagónico contra El sacrificio de las larvas se realizó por en-
F. oxysporum, con el fin de generar bases para friamiento, manteniéndolos durante cinco mi-
futuras investigaciones acerca de las microco- nutos en nevera a 4ºC, antes de ser utilizados.
munidades presentes en los tractos digestivos Los especímenes ya sacrificados fueron some-
de estos invertebrados, durante sus diferentes tidos a desinfección de la superficie sumer-
etapas de vida, las relaciones simbióticas que giéndolos en etanol 95% por dos minutos en el
estos presentan y los posibles usos de estos or- caso de la larva de coleóptero y un minuto pa-
ganismos en la agricultura. ra la larva de lepidóptero. Posteriormente a es-
to fueron sumergidos en solución salina al 0.7%
METODOLOGÍA (Suh et al., 2003, Suh & Bakwell 2004, Suh et al.,
2004). Esto se le realizó a un solo individuo de
Obtención de las larvas cada morfoespecie.
La colecta de las larvas de insectos se planeó Los especímenes fueron colocados en una
inicialmente obtenerlas de acumulaciones “ar- caja de Petri con una superficie de cera negra
tificiales” materia vegetal (Flores y Quiñones, sobre la cual se realizó la disección, usando ti-
2009), sin embargo las condiciones climáticas jeras para microcirugía, y agujas de insulina pa-
no facilitaron la colonización de coleópteros ra realizar los cortes ventrales. Con la aguja de
por lo que las larvas de coleópteros, de la fa- insulina se realizaron cortes transversales en la
milia Scarabaeidae, se colectaron en el muni- zona anal y en la zona cefálica. Luego, se reali-
cipio de Mosquera, Cundinamarca, bajo lozas zó un corte longitudinal con las tijeras. El tracto
sobre suelo rico en materia orgánica. digestivo fue extraído cortando las dos extre-
Las larvas de lepidópteros detritívoros, de midades del mismo con el fin de separarlo del
la familia Noctuidae, sí se capturaron a través individuo (Vasanthakumar et al., 2006; Vasan-
de canastas de malla llenas con 2 Kg de kikuyo thakumar et al., 2008).
en descomposición. Localizadas en el cam- El tracto digestivo se introdujo en un micro-
pus de la UMNG sede Cajicá (Cundinamarca), tubo eppendorf con 0,2 mL de agua peptona-
las que se siguieron cada semana durante dos da al 10% y se agitó en el vortex por 30s para
DISCUSIÓN
En el estudio se ob-
servó que en la muestra
Figura 2. Se muestran los tratamientos control (A), tratamiento del microorganismo 4 de lepidópte-
ro (B) y el tratamiento del microorganismo 4 de coleóptero (C), los cuales presentaron mayor por- de coleópteros (Scara-
centaje de inhibición y menor respectivamente.
baeidae), solo se aislaron
bacterias y no levaduras,
que en el caso del lepidóptero se aislaron, lo cual permite suponer en que la metodología
cuatro morfotipos de bacterias, y tres de le- usada en este morfotipo no permitió extraer
vaduras (Tablas 1 y 2).
Coleóptero (Scarabaeidae)
Pruebas de antagonismo
Descripción
Microorganismo Gram Descripción de la colonia
En un ensayo de antago- microscópica
nismo in vitro, se determinó Colonias color banco de consistencia cre-
el porcentaje de crecimien- #1C (-) mosa, colonias circulares, de elevación Diplococos
plana y bordes lisos
to de un aislado de F. oxys-
Colonias blancas, circulares, cremosas,
porum tomando como refe- #2C (-)
bordes lisos, colonia en elevación convexa
Cocos
vian el crecimiento de F. Tabla 1. Descripción de los microorganismos aislados del tracto digestivo de la morfoespe-
cie de coleóptero
oxysporum, produciendo un
otro tipo de microorganismos del tracto di- de coleóptero que se estudió podría explicar
gestivo, ya que los estudios realizados hasta el por que se encontraron bacterias Gram nega-
momento en varios coleópteros diferentes, ya tivas y no Gram positivas. Estas ultimas po-
sea larvas (Berkov et al., 2007) o adultos (Suh seen actividades enzimáticas muy marcadas,
et al., 2003; Suh et al., 2004; Suh et al., 2005), pues muchas de las enterobacterias poseen
siempre se detectó la presencia de levaduras actividades gelatinolíticas, caseinolíticas, es-
en el tracto digestivo. terásicas, lipolíticas y quitinolíticas, mientras
Todas las bacterias aisladas del coleópte- que las Gram positivas, muestran actividades
ro (Scarabaeidae) fueron bacterias Gram ne- amilsásicas, celulolíticas y xilanolíticas (Pinto-
gativas, lo cual tiene sentido a la luz de lo des- Tomás et al., 2007).
crito en estudios con larvas de lepidópteros En el caso del morfotipo del lepidóptero
fitófagos. Los grupos de bacterias que se en- (Noctuidae), se aislaron tres morfotipos de le-
cuentran en el tracto digestivo de estas lar- vaduras, y cuatro de bacterias. Investigacio-
vas fitófagas, se agrupan en enterobacterias nes realizadas hasta el momento encontraron
y bacilos Gram positivos. Al considerar el ti- la presencia de bacterias en el tracto digesti-
po de alimentación detritívora del morfotipo vo de lepidópteros, las cuales jugarían un pa-
pel importante como
se explicó anterior-
Lepidóptero (Noctuidae)
mente en la alimen-
Descripción
Microorganismo Gram Descripción de la colonia tación de estos in-
microscópica
Colonia de color amarillo casi transparente y sectos (Schloss et al.,
#1L Levadura
de crecimiento plano y consistencia seca 2006; Vasanthakumar
Colonia de color amarillo de crecimiento et al., 2006; Khiya-
#2L (-) plano y consistencia seca y colonias punti- Diplococos
formes
mi & Alyamani, 2008;
Colonia color amarillo brillante, colonias Sanchez-Contreras &
#3L (-) puntiformes, crecimiento convexo y consis- Bacilos Vlisidou, 2008). Es-
tencia seca
tas bacterias, al igual
Colonia de color blanco, de colonias circu-
que sucede en el ca-
#4L lares, Levadura
crecimiento convexo y consistencia viscosa so del coleóptero,
Colonia color amarillo de crecimiento plano, son Gram negativas.
5#L (-) Bacilos
consistencia seca y colonias puntiformes Tener en cuenta los
Colonia de color rojo y consistencia viscosa, resultados encon-
6#L colonias circulares y bordes lisos y elevación Levadura
convexa
trados con respec-
Colonia color naranja y consistencia mucoi-
to al coleóptero, in-
7#L (-) de, bordes lisos, elevación convexa, colonias Bacilos vita a pensar que en
circulares los animales detrití-
Tabla 2. Descripción de los microorganismos aislados del tracto digestivo de la morfoespecie voros hay presencia
de lepidóptero.
de bacterias Gram
Pruebas de antagonismo
Porcentaje de crecimiento En las pruebas de antago-
120% nismo in vitro, ninguno de los
100% microorganismos aislados in-
hibió marcadamente el creci-
80%
miento de F. oxysporum.
60% El microorganismo que
40% presentó mayor porcentaje
de inhibición fue la levadu-
20%
ra #4 del aislado de lepidóp-
0
tero, donde se observo solo
Control
Cm2
Cm3
Cm4
Cm5
Cm6
Cm7
Cm8
Lm1
Lm2
Lm3
Lm4
Lm5
Lm6
Lm7
un 19% de inhibición. Aun-
Series 1 que estas pruebas no mues-
tran valores altos de inhibi-
Figura 3. Porcentaje de crecimiento de F. oxysporum expuesto a cada aislado. Los
tratamientos Cm2-Cm8 son de microorganismos aislados de la larva de coleoptero y los ción (por ejemplo mayores a
tratamientos de Lm1-Lm2 son de microorganismos aislados del lepidóptero.
40 o 60%), se presentan como
una de las posibles aplicacio-
negativas y que estas, juegan un papel muy nes que se pueden asociar a este tipo de mi-
importante en la asimilación de nutrientes a croorganismos.
partir de los detritos. De manera interesante y sorpresiva hu-
En adición a esto, se puede pensar que en bo dos morfotipos de bacterias aisladas que
el morfotipo de lepidóptero estudiado tam- promovieron el crecimiento de Fusarium
bién sea hace necesario el uso
de levaduras para la degrada-
ción de diferentes compues- Porcentaje de inhibición a f. oxisporum
tos presentes en el alimento 25%
que estos consumen al igual
20%
que los insectos estudiados
15%
en varios de los trabajos cita-
10%
dos en este estudio (Suh et al.,
2003; Suh et al., 2004; Suh et 5%
Cm3
Cm4
Cm5
Cm6
Cm7
Cm8
Lm1
Lm2
Lm3
Lm4
Lm5
Lm6
Lm7
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