RANGO DE TRABAJO: Determinación de dosis

Dmin/
Dmin/Dmax

TECNICATURA UNIVERSITARIA EN
APLICACIONES NUCLEARES

Bioq. José Pachado

Departamento PROCESOS POR RADIACION
Centro Atómico Ezeiza
<1 kGy 1 – 10 kGy 11 – 35 kGy > 35 kGy
 Índice

Interacciones de la radiación con la materia

Efecto biocida de la irradiación

Diseño
En que etapa del proceso aplicar?
Dosis mínima
Normativa y Metodología
Dosis mínima de esterilización
Dosis máxima
Validación del proceso de esterilización
Beneficios de la irradiación
 Índice

Interacciones de la radiación con la materia

Efecto biocida de la irradiación

Diseño
En que etapa del proceso aplicar?
Dosis mínima
Normativa y Metodología
Dosis mínima de esterilización
Dosis mínima de descontaminación
Dosis máxima
Validación del proceso de esterilización
Beneficios de la irradiación
 Interacción de la radiación

La energía transferida al material, genera ruptura y formación de

enlaces químicos

γ
 Efecto biocida de la irradiación
Hay tres etapas fundamentales en el proceso de interacción de la
radiación ionizante con el material absorbente (incluidos los
microorganismos):
PROCESO PROCESO PROCESO
FÍSICO QUÍMICO BIOLÓGICO

•Involucra la interacción • Consecuencia de especies • Involucra los cambios

de la radiación con la moleculares formadas en el
materia, produciendo proceso físico, reaccionan en
excitación y ionización. cadena con las moléculas
vecinas. (tiempo de
estabilización estimado 10-3
segundos).
• Su alcance depende si las
especies moleculares pueden
difundir en el medio
químicos producidos
en los componentes
celulares, pueden
tener consecuencias
en la actividad y la
función celular
• Dependiendo de la
seriedad del daño, la
muerte
 Efecto biocida de la irradiación
EFECTO DIRECTO
Ruptura de unión DNA-proteína
Ruptura union DNA-DNA

Ruptura de
cadena simple

Cambio / perdida /
modificación
de bases
nucleotídicas
Ruptura de doble
cadena
 Efecto biocida de la irradiación
EFECTO INDIRECTO

H2O
El efecto neto de los ROS
es la oxidación de los
componentes celulares

O2 Alrededor del 75% es

debido a radicales OH

COMO MINIMIZARLO?

REDUCCION DE AGUA LIBRE REDUCCION DE OXIGENO AGENTES PROTECTORES

Congelación Envasado al vacío Ac. Ascórbico
Deshidratación Atmosfera insuflada N2 Vitamina E
Liofilización Glicerol / Glicerina
 Índice

Interacciones de la radiación con la materia

Efecto biocida de la irradiación

Diseño
En que etapa del proceso aplicar?
Dosis mínima
Normativa y Metodología
Dosis mínima de esterilización
Dosis mínima de descontaminación
Dosis máxima
Validación del proceso de esterilización
Beneficios de la irradiación
Diseño
 Diseño

1. Elegir la Etapa del proceso de fabricación donde aplicar la

Gestión de riesgos)
irradiación (Gestión riesgos

2. Definir el Nivel de seguridad de esterilidad o calidad higiénica

Dosis mínima)
requerida (Dosis mínima

3. Demostrar que el producto no se modifique significativamente

Dosis máxima)
o evaluar como protegerlo (Dosis máxima

4. Validación del proceso de irradiación

5. Irradiación de rutina
 En que etapa del proceso aplicar?

Gestión riesgos::
• Identificación de puntos críticos: Procesos que ó biocarga

Personal, materiales, equipos utilizados en el proceso

Gestión de riesgos

Áreas de procesamiento
(BPF)

Materias primas: Cuanto mas “natural” es el

producto…Mas alta y diversa es la microflora
Envases
 Índice

Interacciones de la radiación con la materia

Efecto biocida de la irradiación

Diseño
En que etapa del proceso aplicar?
Dosis mínima
Normativa y Metodología
Dosis mínima de esterilización
Dosis mínima de descontaminación
Dosis máxima
Validación del proceso de esterilización
Beneficios de la irradiación
 Dosis mínima

Descontaminar o Esterilizar?

Reducción de microorganismos
DESCONTAMINACION
Eliminación de microorganismos patógenos

Libre de microorganismos viables

ESTERILIZACION
asegurar experimentalmente un NSE de 10-6

La carga microbiana propia del producto es la

que define la dosis de tratamiento. No
indicadores biológicos.
 Dosis mínima

Dosis mínima de irradiación

Objetivo no logrado Objetivo logrado

subproceso Rango de proceso Sobreproceso Dosis

Calidad aceptable Calidad modificada

 Dosis mínima: Normativa y Metodología

Productos médicos
ESTERILIZACION

ISO 11137-2 ISO 11737-1

Fármacos
ISO TS 13004 ISO 11737-2
Materias primas
Código de practica (IAEA)
Tejidos humanos
AAMI 37
DESCONTAMINACION

BAM (FDA)
Alimentos C.A.A.
ICMSF

Cosméticos FA
Res ANMAT
Fármacos USP
 Dosis mínima de esterilización

Método 1
ISO 11137-2 Método 2
VDmax15
VDmax
VDmax25

VDmax17.5
VDmax20
VDmax22.5

ISO TS 13004 VDmax VDmax27.5

VDmax30
VDmax32.5
VDmax35
Dosis mínima de esterilización

Selección de la metodología

1,50 UFC VDmax15

9,00 UFC VDmax17.5
45,00 UFC VDmax20
220,00 UFC VDmax22.5
1000,00 UFC VDmax25
5000,00 UFC VDmax27.5
23000,00 UFC VDmax30
100000,00 UFC VDmax32.5
440000,00 UFC VDmax35
 Dosis mínima de esterilización

Utiliza los microrganismos contaminante propios del

CARGA BACTERIANA
producto

Evalúa la resistencia de los microorganismos presentes en

RADIORESISTENCIA
la muestra

Verificación experimental de la respuesta de la microflora a la

Método 1 radiación, mediante ensayos de esterilidad de 100 muestras
irradiadas para un NSE de 10-2 .

Para el cálculo de la dosis de esterilización, se estima el valor

Método 2
D10 de la población natural del producto

Verificación experimental de la respuesta de la microflora a la

VDmax radiación, mediante ensayos de esterilidad de 10 muestras
irradiadas para un NSE de 10-1
 Dosis mínima de esterilización

Método 1 Método 2 VDmax

CARGA BACTERIANA SI SI SI

RADIORESISTENCIA DSR (100 u) D10(100 u) DSR (10 u)

DOSIS ESTERILIZACION No pre-seteada No pre-seteada Pre-seteada

MUESTRAS 330 u (110u/lote) 840 u 60 u (20u/lote)

LOTES PEQUEÑOS /
SI (1 lote) NO SI (1 lote)
INFRECUENTES
LOTES GRANDES /
SI (3 lotes) SI (3 lotes) SI (3 lotes)
FRECUENTES
 Dosis mínima de descontaminación

CÁLCULO DE LA DOSIS MÍNIMA PARA ALCANZAR DETERMINADOS

REQUERIMIENTOS
(curva dosis/respuesta y ausencia/xx g)

A. Evaluación del producto y los posibles m.o. involucrados

B. Determinación de la calidad higiénica s/requerimientos:

Cuantificación de microorganismos (BAMT, esporuladas, anaerobias, HyL)
Investigación de microorganismos que deben estar ausentes /xx gramos de
producto
C. Irradiación de muestras iguales del producto con dosis incrementales y
determinación de los microorganismos anteriores sobrevivientes
 Dosis mínima de descontaminación

Utiliza los microrganismos contaminante propios del

CARGA BACTERIANA
producto

Evalúa la resistencia de los microorganismos presentes en

RADIORESISTENCIA
la muestra

Verificación experimental de la respuesta de la microflora a la

radiación, utilizando muestras control e irradiadas con dosis
incrementales. Las dosis a utilizar se seleccionan utilizando
Metodología
experiencias anteriores con productos similares, datos
bibliográficos o resultados estimados suministrados por la parte
interesada.

Dosis de descontaminación: Mínima dosis necesaria que cumple con los

requerimientos específicos del producto.
Dosis mínima de descontaminación

ANALISIS DE PRODUCTO

SELECCIÓN DE DOSIS

REQUERIMIENTOS A CUMPLIR

Muestras Muestras
Muestras
Irradiadas Irradiadas
Control
(dosis 1) (dosis 2)
 Índice

Interacciones de la radiación con la materia

Efecto biocida de la irradiación

Diseño
En que etapa del proceso aplicar?
Dosis mínima
Normativa y Metodología
Dosis mínima de esterilización
Dosis mínima de descontaminación
Dosis máxima
Validación del proceso de esterilización
Beneficios de la irradiación
 Dosis Máxima

Efectos de la radiación en los polímeros

Degradación: Rotura de Menor PM

uniones en la cadena Menor resistencia Cambios
principal Menor elongación  Resistencia mecánica
 Resistencia térmica
 Dureza
Reticulación: Rotura de  Coloración
uniones en cadenas Mayor PM (permanente o
laterales y formación de Mayor resistencia reversible)
nuevas uniones Menor elongación
intermoleculares
 Dosis Máxima

Efectos observables en polímeros irradiados

Cambios en el peso molecular

Cambios en la resistencia mecánica

Cambios en la resistencia térmica

Cambios en la dureza

Coloración permanente o reversible

 Dosis Máxima

Definir tolerancia de los materiales/MP

IDENTIFICACION DE
Identificar los materiales mas sensibles y
LOS MATERIALES definir los métodos para caracterizarlos

Caracterizar los cambios a lo largo del

ESTABILIDAD EN EL
tiempo del Producto (incluido el envase)
TIEMPO
para definir fecha vencimiento
 Dosis Máxima

Objetivo no logrado Objetivo logrado

subproceso Rango de proceso Sobreproceso Dosis

Calidad aceptable Calidad modificada

Dosis máxima de irradiación

 Dosis Máxima

Protocolo típico

Identificación de los materiales

• Evaluación de los componentes del producto radiosensibles y su función.

Irradiación de muestras:
Las dosis a aplicar dependerán de:
• Dosis de esterilización,
• Homogeneidad de dosis de la instalación comercial.
Realización de ensayos seleccionados:
• Tiempo 0 (inmediatamente post-irradiación) y
• Luego de Envejecimiento acelerado o a tiempo real: Para simular la vida
útil del producto (incluido envase).
Dosis Máxima
 Dosis Máxima - Envase

Polímeros tolerantes a la irradiación

Dosis umbral Daño severo

(kGy) (kGy)
POLIETILENO 100 400

POLIPROPILENO 10 30

PVC flexible 10 400

Condiciones adversas:
POLIESTIRENO 500
•Baja Velocidad de dosis
TEREFTALATO DE PE 1000 •Ausencia de carga
•Alta temperatura
CELULOSICOS 200 •Ausencia de antioxidantes
•Presencia de O2 u O3
POLIAMIDA 6-6 10 150 •Alta relación sup./volumen
 Dosis Máxima

Criterios para la selección de ensayos

PARA HERMETICIDAD Mecánicos (vacio, presión)

Materiales flexibles: tracción, flexión o punción, según la

PARA EXIGENCIA geometría de las muestras
MECANICA Materiales rígidos: flexión, compresión
Envases pouch: pelado y homogeneidad del sellado

Índice de amarilleo, Espectrometría óptica, Medición de

PARA COLORACIÓN
color visual contra testigo

PARA EVALUAR UN ensayos químicos, según metodología de control del

PRINCIPIO ACTIVO: fabricante
Dosis Máxima

Hermeticidad
 Dosis Máxima

Pruebas mecánicas

Tracción Compresión Punción Flexión

Ensayos mecánicos: punto final variable.

resultado objetivo, no observador dependiente.
Dosis Máxima
 Dosis Máxima

Consideraciones generales
• Polvos u otras sustancias en forma seca son mas fáciles de tratar. Formas
liquidas pueden producir cambios en el pH, sino contienen un buffer.
Además las especies reactivas generadas por el efecto indirecto, difunden
mas
• Los radicales libres formados no permanecen por largo periodos. Se
estabilizan, pero en algunos casos producen cortes o reticulación, por lo
cual dichos productos deben ser evaluados para establecer su eficacia y
potencia.
• En general, las proteínas son menos estables que otros componentes.
• Anillos aromáticos son mas estables que moléculas alifáticas.
• Heparina, esteroides, antibióticos y vitaminas en forma seca han sido
irradiados exitosamente.
 Dosis Máxima

Formas de proteger o estabilizar el producto

• De ser posible, trasformar líquidos en sólidos (secado, congelación)

• Se puede considerar el agregado de “scavengers” o antioxidantes (ej. acido
ascórbico, vitamina E)
• Eliminar el oxigeno del producto, reemplazándolo por un gas inerte o vacio.
• Tratar de requerir la mínima dosis de irradiación.
• Trabajar con laboratorios de microbiología que utilicen métodos de
recuperación y cuantificación adecuados. Subestimar o sobreestimar los
microorganismos podrá acarrear un error en la dosis final.
• Ajustar el rango de dosis de irradiación lo mejor posible (Dmin/Dmax). Esto
requiere trabajar en conjunto con la instalación de irradiación
• Establecer los tiempos entre la producción y la irradiación, especialmente en
aquellos productos donde el desarrollo microbiano pueda darse.
 Índice

Interacciones de la radiación con la materia

Efecto biocida de la irradiación

Diseño
En que etapa del proceso aplicar?
Dosis mínima
Normativa y Metodología
Dosis mínima de esterilización
Dosis mínima de descontaminación
Dosis máxima
Validación del proceso de esterilización
Beneficios de la irradiación
Validación del proceso de esterilización

Calificación de la
instalación (IQ)
Calificación del
equipo
Calificación de operación
(QO
Validación

Definir el patrón de carga

Calificación de
desempeño
Pruebas de parámetros
(mapeo dosimétrico)

Determinación de dosis
mínima
Calificación del
producto
Determinación de dosis
máxima
 Índice

Interacciones de la radiación con la materia

Efecto biocida de la irradiación

Diseño
En que etapa del proceso aplicar?
Dosis mínima
Normativa y Metodología
Dosis mínima de esterilización
Dosis mínima de descontaminación
Dosis máxima
Validación del proceso de esterilización
Beneficios de la irradiación
 Beneficios de la irradiación

 Apto para una gran variedad de productos

 Alta penetración, que permite esterilizar materiales de distintas
densidades.
 El proceso es seco y no genera calor
 Proceso ampliamente establecido y documentado
 No deja residuos en los productos tratados
 Existen variados métodos para determinar la dosis en función del objetivo
buscado
 Puede ser utilizado en cualquier etapa del proceso, desde la materia prima
hasta el producto final, hay que evaluar cual es la etapa mas conveniente
 Los productos irradiados pueden utilizarse inmediatamente después del
tratamiento
 MUCHAS
GRACIAS

JOSE PACHADO
pachado@cae.cnea.gov.ar