Nanopartículas agregadas de sulfato de alginato de Ca2 + para entrega de DNA

plasmidico intracelular

A terapia genética bem sucedida requer o desenvolvimento de portadores para a

entrega seletiva e eficiente de genes para células-alvo, com toxicidade mínima.
Neste trabalho, apresentamos um vetor não viral para entrega gênica composto de
materiais biocompativeis, CaCl2, DNA plasmidico e biopolimero aniónico semi-
sintético de sulfato de alginato (AlgS), que espontaneamente se agregam para
formar nanopartículas (NPs)
NPs foram caracterizados com uma carga superficial ligeiramente aniónica

Espectroscopia fotoeletrónica de raio-x (XPS) validou a sua composição ternária, e

elucidou as interações moleculares entre o Ca2 +, o DNA pasmidico e o AlgS.

Captação celular eficiente associada à expressão gênica potente da GFP foi

observada em vários tipos de células: ratos cardíacos neonatais primários
fibroblastos, linha celular de câncer de mama humano e hepatocelular humano
células de carcinoma.
O mecanismo de captação dos NPs foi estudada por citometria de fluxo por imagem
e demonstrou ser via endocitose mediada por clatrina, como inibição química desta
via reduziu significativamente a expressão de EGFP.

Os NPs foram citocompatíveis e não ativaram os linfócitos T

A terapia gênica foi demonstrada para o fragmento de toxina da difteria A (DT-A),

resultando na anulação da síntese de proteínas e morte na linha celular de câncer
de mama humano. Coletivamente, nossos resultados mostram que o DNA do
plasmídeo AlgS-Ca2 + desenvolvido (pDNA)
Os NPs podem ser utilizados como um transportador não viral eficaz para o pDNA.

INTRODUÇÃO
Terapia gênica utilizando DNA exógeno tem grande potencial para o tratamento de
uma grande variedade de doenças, adquiridas ou inerentes.
Para ser terapeuticamente ativo, o DNA exógeno deve entrar no núcleo de células-
alvo, superando vários obstáculos, incluindo taxas de eliminação e / ou degradação,
entrada celular inadequada e
tráfico para o núcleo.
Para superar esses obstáculos, a entrega do DNA geralmente é mediada por vetores
virais e não virais que protegem a carga de DNA na circulação e facilitar sua
entrada na célula.
Ao longo dos anos, vários nanotransportadores não virais foram desenvolvidos
usando polímeros ou lípidos biocompatíveis, na sua maioria carregados
positivamente.
Recentemente, muitas das transportadoras carregadas positivamente mostraram
toxicidade
resultado de sua forte carga positiva.

Trabalhos recentes - novo tipo de aniônica nanopartículas (NPs), auto-organizadas

pela complexação de pequenas RNA interferente (siRNA) com polissacarídeos semi-
sintéticos, ou seja,
sulfato de hialuronano (HAS) ou sulfato de alginato (AlgS), mediado por pontes
iônicas de cálcio.
O complexo ternário foi formado simplesmente misturando todos os componentes,
sob condições aquosas, produzindo NPs com um tamanho médio de 130-150 nm e
uma carga superficial de
10 mV.
Os PNs mostraram-se estáveis ao longo do tempo, mesmo em presença de
proteínas séricas, eram citocompatíveis e silenciados genes alvo de forma muito
eficiente em diferentes linhas celulares.

Ca2 + é um importante promotor internalização celular e escape endossomal das

NPs14 e que estes
processos foram dependentes da concentração de Ca2 +.
os NPs foram mostrado para entrar na célula através de várias vias de endocitose,
dependente de dinina, clatrina e caveolina, provavelmente devido à natureza
multifacetada do Ca2 + e a participação deste íon em muitos processos celulares

o objetivo deste estudo foi investigar a possibilidade de dos NPs

automontados de acionamento eletrostático como estratégia para DNA
plasmidial (pDNA)

descrevemos o processo de complexação de AlgS com pDNA, mediado por pontes

de íons de cálcio para formar um pouco aniónico AlgS-Ca2 + -pDNA NPs, e
analisamos as características físico-químicas dos NPs resultantes (tamanho, carga
de superfície e ternário composição), a eficiência de encapsulação do pDNA, sua
estabilidade ao longo do tempo, citocompatibilidade e mecanismo de captação
celular.
Além disso, analisamos sistematicamente a influência in vitro do AlgS-Ca2 + -pDNA
NPs em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de indivíduos
saudáveis, revelando seu efeito sobre
Ativação de células T e produção de citocinas