_________________________________________________

Informe de laboratorio 1

Definición de los conceptos macro y microcopia, y cultivo

de Bacterias por aislamiento y recolección ambiental

Juan Pablo Avellaneda Avellaneda - 1003579393

Microbiología

Martes 22 de Agosto del 2017

Resumen: ¿Se puede cultivar una bacteria?, ¿se puede saber la carga microbiana de un
lugar?, ¿qué es micro y macroscópica?, hay técnicas muy sencillas para lograr estos
objetivos que se explicaran en el presente informe, con experimentos hechos en campo y
en laboratorio, además de una comparación de carga microbiana de diferentes lugres y se
conocerá el concepto de micro y macroscópica.

Introducción: ¿Cómo cultivar una bacteria?, para responder esta preguntar primero es
esencial conocer el concepto de bacteria; “Las bacterias son microorganismos unicelulares
que presentan un tamaño de algunos micrómetros de largo (entre 0,5 y 5 μm, por lo
general) y diversas formas incluyendo esferas, barras y hélices. Las bacterias son
procariotas y, por lo tanto, no tienen núcleo ni orgánulos internos” (fuente:
biologialiga.files.wordpress.com). Pero cómo es posible cultivar un organismo al que no
podemos ver, tenemos inocular una muestra de la bacteria que se desea cultivar, o
recolectarla la muestra el ambiente deseado.
Allí la importancia de esta práctica, ya que sin estos experimentos el conocimiento
científico acerca de las bacterias sería muy ambiguo, de ahí se agrega el concepto de
micro y macroscópica, ya que sin esto la visión de bacterias sería muy difícil.
El objetivo principal de este estudio es aprender a cultivar bacterias por medio del método
de estría o agotamiento, además de conocer la carga microbiana de diferentes lugares de
nuestro entorno universitario, y poder verlas atraes del microscopio.

Materiales y métodos: Antes de comenzar a trabajar con bacterias es importante conocer

el microscopio y su utilidad, el microscopio es un instrumento óptico que sirve para
ampliar la imagen de objetos u organismo que se vayan a estudiar, para este estudio se
implementó:
- Microscopio
- Guía de laboratorio “microscopia”
Se conoció el microscopio, sus partes y su importancia y de esto se tomó el campo visual
del microscopio con los diferentes objetivos (4x,10x, 40x, 100x).
Luego se preparó el agar, para el cual se usó:
- Agar en polvo.
- Agua.
- Agitador magnético.
- Erlenmeyer.
- Autoclave.
Este se preparó agregando el agar en polvo, a una cierta cantidad de agua en el
Erlenmeyer luego se le agrego el agitador magnético y se dejó aproximada mente cinco
minutos, luego se pasó a la autoclave para esterilizarlo; al sacarlo se sirvió en cajas Petri
dentro de la cabina de flujo laminar para evitar contaminación, luego de esto el agar
quedó listo para utilizarlo.
Luego se usó un cultivo previamente inoculado con bacterias, en el cual separamos una
bacteria con el asa y la sembramos en cajas de Petri con agar previamente servido; para
este experimento usamos:
- Asa.
- Mechero.
- Cultivo previamente hecho.
- Caja de Petri con agar servido.
- Papel vinipel.
Se desinfecto el asa con el mechero y se retiró con precaución una bacteria del cultivo
dado por la profesora, y se sembró en una caja de Petri (con agar servido previamente)
por el método de agotamiento o estría como se muestra en la imagen:

Fuente: http://projectomartin.blogspot.com.co
Se cubrió con vinipel y se dejó incubar durante ocho (8) días. Después de los ocho días se
observó que un parte creció con uniformidad

Por otro lado, una pregunta que nos indaga diariamente es la carga microbiana de los
diferentes lugares de nuestra cotidianidad, tratando de resolver esta incógnita, hicimos el
inocula miento de bacterias ambientales; para este usamos:
- Caja Petri con agar previamente servido.
- Papel vinipel.
Un lugar insignia para nosotros como agrónomos es el invernadero, de donde nos invade
la incógnita de saber su carga microbiana a donde se fue a tomar la muestra; dejando las
cajas de Petri con agar previamente servido destapadas por diez (10) minutos en el
ambiente que luego se tapó para evitar contaminación por el camino y en el laboratorio se
selló con vinipel y luego se incubo durante ocho (8) días; luego de los ocho (8) días se hizo
una descripción macroscópica y microscópica, además hacer tinción de gran para
descartar que no sean hongos ni levaduras y conocer si son Gram-negativas o Gram-
positivas. Para hacer esta tinción usamos los siguientes materiales:
- Caja de Petri con carga microbiana ambiental.
- Asa.
- Mechero.
- Microscopio.
- Crisal violeta.
- Agua destilada.
- Lugol.
- Alcohol-Acetona
- Fuscina.
Primero colocamos en una lámina portaobjetos la colonia de bacterias separadas con el
asa (previamente esterilizada con el mechero), y se someto al siguiente procedimiento:
- Crisal Violeta: 1 minuto
- Lavado con agua destilada.
- Lugol: 1 minuto.
- Lavado con agua destilada.
- Alcohol-Acetona: 30 segundos.
- Lavado con agua destilada.
- Fuscina: 15 segundos
- Lavado con agua destilada.
(fuente: Practica de laboratorio de microbiología #3)
Luego nos dimos cuenta de que si era una bacteria y que era Gram-negativa.

Resultados y Discusiones: Nos dimos cuenta que el microscopio es un aparato esencial

para conocer y observar el mundo microscópico, además nos dimos cuenta que al cambiar
el poder de los objetivos se ve que va disminuyendo el campo visual y que se debe poner
más luz por la cercanía de la muestra a los objetivos.

Objetivo Poder Diámetro del campo visual

Bajo 4x 5000 µm
Medio 10x 2000 µm
Alto 40x 5000 µm

Por otro lado, dando respuesta a la pregunta inicial que nos indicaba “se puede cultivar
una bacteria” nos damos cuenta que sí, y que hay diferentes métodos que varían en su
nivel de complejidad, nosotros escogimos el “método de cultivo por agotamiento o estría”
por el cual nos dimos cuenta que al inoculas las bacterias con el asa, esto se debe hacer
con gran cuidado ya que se puede romper el agar si se ejerce mucha presión y como se
muestra en la imagen solo crece una parte del cultivo.
Un aislamiento bueno debe terminar con un buen crecimiento bacteriano, que se
evidencia en cada una de las estrías hechas anteriormente.
Ahora si vemos la muestra recogida en el ambiente podemos ver un resultado diferente,
ya que en esta podemos ver no solo crecimiento de bacterias si no también levaduras y
hongos como se ve en la imagen.

Se escogió una colonia y se hizo una descripción macroscópica:

Numero aproximado de colonias 180

Forma de la colonia Circular
Elevación de la colonia Plana
Bordes de la colonia Enteros
Color Amarillo claro
Opaca o translucida Translucido
 Tamaño en mm 2 mm

Luego esa misma colonia se separó y se le practico tinción de Gram Colocándola en una
lámina porta objetos.

Nos dimos cuenta de que si era una bacteria que era Gram-negativa, luego se colocó la
lámina con la Bacteria en el microscopio y se hizo una descripción microscópica:

Descripción microscópica
Forma Puntiforme
Gram Gram-negativa
Tamaño del objeto +/- 2 µm

Conclusiones:
1. El microscopio es un instrumento esencial para la microbiología, siendo lo que nos
permite ver este mundo microscópico.
2. Las bacterias tienen muchos medios de cultivo con los cuales se busca hacer
colonias cada vez más puras para poder estudiarlas a cabalidad.
3. En el ambiente se encuentran gran variedad de microrganismos los cuales son
invisibles a nuestra vista y que generalmente causan los hechos que para nosotros
son inexplicables.
4. Con la tinción de Gram podemos saber si lo que hay en nuestras muestras son
bacterias, y separarlas entre Gram-negativas o Gram-positivas.
Referencias:
1. “Fundamentos sobre el microscopio compuesto” (2010). Col.
2. “Practica de laboratorio de microbiología #2” (2017), Universidad Nacional de
Colombia, Col.
3. “Practica de laboratorio de microbiología #3” (2017), Universidad Nacional de
Colombia, Col.
4. U.T.N. Rosario, “Tinción y observación de microrganismos”, Universidad del
Rosario, Col.
5. Biología liga, “bacteria, introducción a la biología” (2010), Universidad Autónoma
de México, Mex.