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ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA KM 1VIA BUCARAMANGA

INGENIERIA DE ALIMENTOS

Lauren Giselle Giraldo Sánchez, Helen Dayana Muñoz Gómez.

Resumen: En la práctica realizada se pudo determinar la presencia de la enzima


catalasa en tejidos animales y vegetales, igualmente se pudo observar el efecto de
diferentes factores sobre la actividad enzimática y comprobar la acción hidrolítica
de la amilasa, conociendo principalmente sus conceptos básicos, de esta manera
se pudo encontrar los diversos tipos de enzimas que existen como lo son las
oxidorreducturas, tranferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas, ligasas teniendo
cada una de estas una reacción en específico, por lo cual en el tejido animal se
comprobó la acción de la temperatura y el almidón en cada uno de los
componentes, en estos componentes se analizaron varios cambios en sus
estructuras y en algunos fue notorio el cambio de color o aparición de burbujas,
todos esos cambios se deben a la actividad enzimática de la amilasa presentada
en cada procedimiento.

PALABRAS CLAVES: Enzima, catalasa, hidrolisis, almidón, actividad enzimática.

Summary: In the practice carried out, the presence of the catalase enzyme in
animal and plant tissues could be determined, as well as the effect of different
factors on the enzymatic activity and the hydrolytic action of the amylase could be
observed, knowing mainly its basic concepts, in this way It was possible to find the
different types of enzymes that exist, such as oxidoreducts, tranfases, hydrolases,
lyases, isomerases, ligases, each of which has a specific reaction, so that in the
animal tissue the action of temperature and the starch in each one of the
components, in these components several changes in their structures were
analyzed and in some it was notorious the change of color or appearance of
bubbles, all those changes are due to the enzymatic activity of the amylase
presented in each procedure.

KEY WORDS: Enzyme, catalase, hydrolysis, starch, enzymatic activity.


INTRODUCCION 2. El sustrato se une a una región
concreta de la enzima,
En esta práctica se pudo determinar llamada centro activo. El
la presencia de la enzima catalasa en centro activo comprende un
los tejidos animales y vegetales, sitio de unión formado por los
observar la actividad enzimática que aminoácidos que están en
allí se origina y aparte comprobar la contacto directo con el sustrato
acción hidrolítica de la amilasa, y un sitio catalítico, formado
teniendo en cuenta cada uno de los por los aminoácidos
procedimientos sugeridos, se pudo directamente implicados en el
acoplar diversos datos de información mecanismo de la reacción
que se verán resaltados y así dar
repuesta a lo que se buscaba desde 3. Una vez formados
un principio dependiendo de las los productos la enzima
reacciones ejecutadas. puede comenzar un nuevo
ciclo de reacción.
LAS ENZIMAS

Los enzimas son proteínas que


catalizan reacciones químicas en los
seres vivos. Los enzimas son
catalizadores, es decir, sustancias
que, sin consumirse en una reacción,
aumentan notablemente su velocidad.
Las enzimas se clasifican en varias
categorías: hidrolíticas, oxidantes y
reductoras, dependiendo del tipo de
reacción que controlen. Las enzimas
hidrolíticas aceleran las reacciones
en las que una sustancia se rompe en
Los enzimas son catalizadores componentes más simples por
específicos: cada enzima cataliza un reacción con moléculas de agua. Las
solo tipo de reacción, y casi siempre enzimas oxidativas, conocidas como
actúa sobre un único sustrato o sobre oxidasas, aceleran las reacciones de
un grupo muy reducido de ellos. En oxidación, y las reductoras las
una reacción catalizada por un reacciones de reducción en las que
enzima: se libera oxígeno. Otras enzimas
catalizan otros tipos de reacciones.
1. La sustancia sobre la que
actúa el enzima se
llama sustrato.
PARTE EXPERIMENTAL peróxido de hidrogeno, H2O2 (agua
oxigenada), esta enzima cataliza la
Con ayuda de estos materiales y oxidación del peróxido de hidrogeno a
reactivos se pudo realizar y completar oxigeno con la simultanea reducción
la práctica. de una segunda molécula de
MATERIALES peróxido a agua.

 2 Gradillas 2H2O2 O2 + 2H2O


 15 Tubos de ensayo Procedimiento
 1 Pinza de madera
 1 Beaker de 50 mL 1. Colocar un tubo de ensayo con
 2 Pipetas de 10 mL pequeños trozos de hígado
 1 Mechero 2. Añadir 2 ml de agua oxigenada
 1 Churrusco para tubos Al añadir al
 Trozos de tomate hígado agua
 Trozos de hígado oxigenada se
 Cinta enmascarar desprende el
 Bolsas negras oxígeno e
hidrogeno, la
REACTIVOS
catalasa con
 6 mL de agua oxigenada agua oxigenada
 2 mL de lugol al 1% reacciona
 2 mL Buffers fosfato 0,1M a pH rápidamente
de 3, 7, 11 debido a que la
enzima es una catalizadora con la
 2 mL de reactivo de Benedict
que se requiere menor energía de
 20 mL de solución de almidón
activación, igualmente las burbujas
al 1%
indicaron la presencia de oxigeno y
PROCEDIMIENTO se nota que el hígado se torna rojo
blancuzco.
Reconocimiento de la catalasa en
tejidos animales Reconocimiento de la catalasa en
tejidos vegetales
La catalasa es una oxidorreductasa
de los sistemas enzimáticos Se observó un burbujeo
respiratorios y se encuentran en la debido al desprendimiento
mayoría de los tejidos vegetales y de oxígeno, igualmente se
animales. La función de esta enzima, tornó un rojo pálido debido
en los tejidos es necesaria, porque a la acción de enzima
durante el metabolismo celular, se catalasa.
forma una molécula toxica, que es el
Desnaturalización de la catalasa temperatura desnaturaliza la enzima,
cambiando su estructura, y
Una de las propiedades inactivándola, por eso cuando se
fundamentales de las proteínas es la añade el agua oxigenada,
desnaturalización, esta se puede simplemente no pasara nada.
desnaturalizar al ser sometida a altas
temperaturas. Al perder la estructura Hidrolisis del almidón
tridimensional, perderá también la
función y como consecuencia su La saliva contiene la enzima amilasa
función catalítica. que cataliza la hidrolisis del almidón
para degradarlo a los azucares
Procedimiento reductores maltosa y glucosa, con
etapas intermedias en las dextrinas.
1. Colocar en un tubo de ensayo
trozos pequeños de hígado. Procedimiento
2. Añadir agua, hierva la muestra
durante unos minutos. 1. Colocar una gradilla con 6
3. Después de ese tiempo retire tubos de ensayo numerados
el agua sobrenadante. del 1-6 y adicione en cada uno
4. Añadir agua oxigenada, hasta las cantidades que se indican
cubrir los trozos de hígado. a continuación:

Tubo N°1: 2ml de solución de almidón

Tubo N°2: 2ml de solución de almidón

Tubo N°3: 2ml de solución de almidón


+ 1ml de saliva sin diluir

Tubo N°4: 2ml de solución de almidón


+ 1ml de saliva sin diluir

Tubo N°5: 2ml de solución de almidón


+ 1ml de saliva diluida hervida

Poco a poco se va desnaturalizando y Tubo N°6: 2ml de solución de almidón


su color se torna más opaco como + 1ml de saliva diluida hervida
especie de una sustancia cocida, esto
2. Colocar los tubos en baño
se debe a que la enzima actúa
María a 37°C, durante 10min.
convirtiendo el agua oxigenada o
3. En los tubos 1, 3, 5 adicionar
peróxido de hidrogeno y libera
10 gotas de lugol (prueba para
oxigeno o burbujas, pero como en
almidones)
este caso se somete el hígado que
posee la catalasa a ebullición, la
4. En los tubos 2, 4, 6 adicionar Tubos 2, 4, 6 (Benedict)
1ml de reactivo de Benedict
(prueba para azucares)

Tubos 1, 3 ,5 (lugol)

Tubo 2: 2ml de solución de almidón,


por lo cual hubo acción enzimática ya
que la reacción de Benedict fue
positiva y estuvo más concentrado el
Tubo 1: 2ml de solución de almidón,
color azul, por lo tanto este se
por la cual hubo acción enzimática ya
escogería como control (patrón).
que la reacción de lugol es positiva
porque se torna un color negro, por lo Tubo 4: 2ml de solución de almidón +
tanto este se escogería como control 1ml de saliva sin diluir, la coloración
(patrón). se tornó más clara que en el tubo
anterior.
Tubo 3: 2ml de solución de almidón +
1ml de saliva sin diluir, no se Tubo 6: 2ml de solución de almidón +
presentó acción enzimática ya que la 1ml de saliva diluida, en esta prueba
reacción de lugol es negativa y no la coloración es más opaca queriendo
existe cambio de color tan visible decir que la reacción fue negativa.
como en el tubo 1.
Influencia del pH en la actividad
Tubo 5: 2ml de solución de almidón + enzimática.
1ml de saliva diluida, no hubo acción
enzimática por lo que el color no Procedimiento
cambió mucho y la reacción de lugol 1. Recoja 6ml de saliva en un
es negativa. beaker de 50ml.
2. Colocar una gradilla con 3
tubos de ensayos enumerados
del 1-3.
3. Adicionar en cada uno las y 3 que el reactivo no llegó hasta la
cantidades que se indican a superficie, para la amilasa el pH
continuación: optimo es 7, igualmente este pH 7
cuenta para la saliva humana y se
Tubo N°1: 2ml de saliva + 2ml de puede notar en las imágenes
Buffer fosfato 0,1M a pH 3. plasmadas anteriormente.
Tubo N°2: 2ml de saliva + 2ml de CONCLUSIONES
Buffer fosfato 0,1M a pH 7.
Las funciones de las enzimas, se
Tubo N°3: 2ml de saliva + 2ml de entrelazan y se pliegan una o más
Buffer fosfato 0,1M a pH 11. cadenas polipeptídicas, que aportan
Agitar vigorosamente, adicionar 2ml un pequeño grupo de aminoácidos
de almidón al 1% en cada tubo, agitar para formar el sitio activo, o lugar
nuevamente y agregar una gota de donde se adhiere el sustrato, y donde
lugol. se realiza la reacción. Dentro de los
Factores que incluyen las reacciones
enzimáticas tenemos: Cambios en el
pH, Cambios en la temperatura, como
se pudo realizar y analizar en el
laboratorio donde las actividades
enzimáticas fueron resaltadas como
el reconocimiento de la catalasa en
los tejidos animales y vegetales,
desnaturalización e hidrólisis.
En el tubo 2 la enzima fue más activa
WEBGRAFIA
sobre el almidón que se puede notar
en la anterior imagen donde el lugol http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzi
se ve más concentrado. mas/enz1.htm

ANEXOS

 Describa el efecto de la
temperatura en la acción
enzimática.

En general, los aumentos de


temperatura aceleran las reacciones
químicas: por cada 10ºC de
En esta imagen se sigue observando
incremento, la velocidad de reacción
que el concentrado mayor lo sigue
se duplica. Las reacciones
teniendo el tubo 2, a pesar que fueron
catalizadas por enzimas siguen esta
agitados y se observa en los tubos 2
ley general. Sin embargo, al ser
proteínas, a partir de cierta
temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor. La
temperatura a la cual la actividad
catalítica es máxima se llama
temperatura óptima. Por encima de
esta temperatura, el aumento de
velocidad de la reacción debido a la
temperatura es contrarrestado por la
pérdida de actividad catalítica debida
a la desnaturalización térmica, y la
actividad enzimática decrece
rápidamente hasta anularse.

 ¿A qué valores de pH y
temperatura es estable la
actividad enzimática de la
catalasa?

La catalasa y todas las enzimas son


una serie de proteínas que catalizan
una reacción por lo que la
temperatura ideal no puede pasar de
los 40°C ya que a esta temperatura
se desnaturalizan las proteínas por lo
que la catalasa tiene una temperatura
alrededor de 35.5 a 37.5
dependiendo de las condiciones y su
pH ideal está entre los 4 y 5, esto
dependiendo del tejido.

 ¿A qué pH teórico es más


activa la amilasa? Compare
este valor con el obtenido en el
laboratorio.

Es sensible a una acidez elevada y


se vuelve inactiva a pH 3,3. El pH
óptimo de acción está dentro del
rango 5-7, siendo de 6,5 para el alfa-
amilasa bacteriana y pancreática.