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CRISPR

Clustered Regularly Interspaced Short


Palindromic Repeats
Sistema CRISPR (Clustered Regularly
Interspaced Short Palindromic Repeats)
• Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Inter
espaçadas: pequenas porções do DNA bacteriano compostas por
repetições de nucleotídeos
• Adjacente a uma região não-codificante (protoespaçador) inserida no
DNA bacteriano após o contato com genomas invasores provenientes de
bacteriófagos ou plasmídeos
Transcrição do locus CRISPR: resulta em pequenos fragmentos de RNA
com capacidade de desempenhar o reconhecimento de um DNA
exógeno específico
 Atua como um guia de modo a orientar a nuclease Cas  clivagem e
eliminação do DNA invasor: importante mecanismo de defesa contra
DNAs invasores
• Já foi observado em aproximadamente 40% dos genomas bacterianos e
em até 90% de arqueobacterias
CRISPR
• Frequentemente usado como um termo geral para se
referir à edição genômica (um tipo de engenharia
genética em que o DNA é inserido, substituído, ou
removido de um genoma
utilizando nucleases modificadas artificialmente, ou
“tesoura molecular“)
• Sistema Cas9 + CRISPR  deleção seletiva do DNA
• As aplicações de CRISPR abrangem quase todos os
setores envolvendo sistemas biológicos.
- Danisco (DuPont) foi um dos pioneiros na utilização
comercial da tecnologia CRISPR para aumentar a
imunidade viral em bactérias utilizadas para a produção
de iogurtes e queijos
Breve Histórico
2010: tipo II
CRISPR-Cas corta o 2011: CRISPR-Cas
DNA alvo tipo II inclui
tracrRNA
2005: sequências
2011: Cas9 é o único
espaçadoras têm origem
1987 gene necessário para
extracromossômica, sendo
CRISPR em função de defesa do
derivadas de sequências
E.coli tipo II
de plasmídeos ou de vírus
2012: CRIPR-Cas9:
RNA guia para
2007: CRISPR-
endonuclease de
Cas  sistema
DNA
imune de
bactérias

2013: RNA Cas-9 media


engenharia genômica
sítio-específica em
células humanas e outros
eucariotos
Como funciona?
• Presença de:
- RNA transativador (tracRNA)
- molécula de RNA pequena e complementar à sequência repetida
- Cas9
1. Célula é transfectada
com DNA plasmidial que
expressa a Cas 9 e o RNA 2. Cas 9 identifica
guia (complementar ao o DNA
gene de interesse) correspondente e
cliva as fitas de
DNA

3a. Reparo por


recombinação não
homóloga 
silenciamento do
gene?

3b. Gene é corrigido


com uma novo
segmento de DNA ou
um novo gene é
introduzido por
recombinação
homológa
• Video 1
Disputa pela patente

Microbióloga Bioquímica Bioquímico


Instituto de Berlim Max Planck Universidade da Califórnia Instituto Broad
(Universidade Harvard e MIT)
FIM DA MALÁRIA
Um projeto já conseguiu
dar o pontapé inicial para
o fim da malária. A
estratégia consiste em
‘vacinar’ mosquitos,
editando seus genes e
modificando o padrão de
herança de modo a
provocar esterilidade. A
taxa de transmissão para
as gerações seguintes
ficou entre 91,4% e 99,6%
COMENDO POLUIÇÃO
Cientistas já estavam tentando achar um
jeito de fazer com que microrganismos ‘se
alimentem’ de resíduos como óleo e outros
poluentes orgânicos. É uma tarefa difícil
mas é possível otimizar os caminhos
existentes, alterando as enzimas
responsáveis por essa degradação
CURA DA AIDS
Um dos recentes achados
promete ter impacto no
tratamento da Aids e de
outras doenças virais.
Usando o Crispr-Cas9,
cientistas conseguiram
extirpar o material genético
do HIV de dentro de células
brancas do sangue –onde o
vírus costuma se esconder
SUPERBEBÊS
Escolher tipo físico, aptidão
musical e cor dos olhos é só
o começo do que uma
técnica que eficientemente
edita o genoma é capaz de
fazer. Humanos transgênicos
são uma possibilidade real e
os cientistas estão até
propondo um período de
‘trégua’ para uma discussão
do ponto de vista ético
COMIDA DEMAIS
Recentemente, a engenharia
genética entrou em cena
permitindo a inclusão de
genes, por exemplo, que
melhoram a tolerância de
uma plantação a condições
climáticas extremas ou a
pragas. Com a técnica, será
mais fácil obter incremento
na produtividade e no poder
nutricional dos alimentos
BIOCOMBUSTÍVEIS
A fermentação é a base da
produção de etanol. Com
leveduras dotadas de uma
fábrica molecular otimizada,
será possível melhorar o
aproveitamento do da cana,
aumentando a produção e a
rentabilidade do combustível
ecologicamente menos nocivo
Agricultura
• Salmão modificado por CRISPR para super expressar hormônios do
crescimento
• Adulto em 18 meses ao invés de 3 anos
• Aprovado pelo FDA
Customização
de animais
domésticos
Resssucitar os mamutes!
• Modificação de 14
genes
potencialmente
envolvidos na
resistência ao frio:
elefante da Ásia
Saúde
• Redução de fertilidade em mosquitos transmissores de doenças
• Rastreamento de genes responsáveis pela fertilidade em mosquitos
diminuir a taxa de fertilidade e controlar a maneira com que esses
genes são transmitidos aos seus descendentes
limitar a propagação de mosquitos transmissores de doenças
endêmicas como a dengue e a malária
• Avanços na biologia sintética
• Primeiro organismo semi-sintético foi desenvolvido por meio da
inserção de um código genético de seis letras em bactérias E. coli
• Duas bases adicionais: X e Y
 Utilizar esses microrganismos para a produção de novos tipos de
proteínas que podem ser transformadas em drogas e utilizadas para o
tratamento de uma série de doenças.
Saúde
• Luta contra o HIV
• eliminaram o material genético do vírus tanto em infecções agudas
quanto em infecções latentes em três modelos animais

• Luta contra o câncer


• Destruição de células cancerígenas
• Criação de gene que ataca as células de câncer, encolhendo tumores
• Os testes foram realizados em camundongos e foi a primeira vez que a
tecnologia foi utilizada para atingir genes de fusão
• Interrupção do ciclo celular em células cancerígenas

• Revertendo condições clínicas hereditárias


• Doença de Huntington: condição fatal e hereditária na qual células
do cérebro morrem devido a uma proteína tóxica liberada por uma
versão mutante do gene Huntingtin (mHTT)
• É justamente nesse gene que a CRISPR atua, criando a possibilidade
de uma potencial cura.
Saúde
• Remoção de doenças genéticas em embriões
• Edição do gene MYBPC3 – conhecido por causar cardiomiopatia
hipertrófica, uma doença cardíaca que afeta 1 a cada 500 pessoas.

58 embriões
fertilizados, sendo o
espermatozóide o
portador do gene
para a doença
cardíaca
Conseguiram corrigir
a patologia de 42
embriões.
Southern University of Science, China

Modificação do gene CCR5 em dois embriões que foram implantados em uma mulher

CCR5: gene que codifica proteína que muitas cepas do HIV utilizam para infectar o
sistema imune  impedir infecção do HIV
Empresas
• CRISPR Therapeutics
• Abril de 2014.
• Potenciais curas para doenças graves.
• Própria linha de produtos.
• Parcerias com grandes empresas (Vertex e Bayer) a fim de aplicar esta tecnologia em
terapias inovadoras em humanos.
Ética
• “Bebês projetados”.
• Cientistas ou qualquer outra pessoa com acesso a um laboratório de biologia
básica poderiam desencadear mutações genéticas e estas, se espalharem
facilmente na natureza.
• Segurança.
• Identidade genética do ser humano
• A Cúpula Internacional Sobre Edição Genica em Humanos se reuniu em
dezembro de 2015 em Washington.
• “A pesquisa básica e pré-clínica é claramente necessária e deve continuar,
sujeitas às devidas normas legais e éticas e supervisão...".
• O uso em células somáticas poderia proceder.
• É irresponsável prosseguir o uso dessa técnica com a linhagem germinal até
que as questões de segurança e eficácia estejam resolvidas.
Desvantagens da CRISPR
• Alta incidência de segmentação não especifica do DNA que vem sendo relada.
• Mecanismo não elucidado.
• Ter certeza que o CRISPR reconhecerá corretamente o alvo em aplicações
humanas.
• Uma única base pode incompatibilizar o sistema CRISPR/Cas.
• Perder organismos na evolução.
https://www.youtube.com/watch?v=Oy9Bcxmak94