PROYECTO

EXTRACCIÓN DEL ADN DEL TEJIDO EPITELIAL HUMANO

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Dalys Rodríguez. (4-797-358), 2Yurianis Banda. (7-712-1010), 3Patricia Espinoza. (2-744-388),
& 4Natalia Zapata (4-805-2481). Universidad Autónoma de Chiriquí. Escuela de Farmacia. Email:
dalys0440@gmail.com

OBJETIVOS:
 Objetivos general:
 Realizar la extracción del ADN de las células de descamación del epitelio mucoso del
interior de la boca, poniendo de manifiesto su estructura fibrilar.
 Objetivos específicos:
 Determinar los factores que influyen en la formación del ADN de la saliva.
 Establecer los cambios sufre la saliva que permite extraer de ella el ADN contenido
en sus células.

FUNDAMENTO CIENTÍFICO:

El ADN es una molécula que está presente en todas las células del cuerpo y que porta la
información genética para el funcionamiento celular. Aunque estemos acostumbrados a
visualizarlo en forma de cromosoma, la mayor parte del tiempo de vida de una célula se
encuentra en forma de una hebra denominada cromatina. La saliva humana contiene células
que provienen de células sanguíneas blancas (leucocitos), haciendo que esta sea una fuente
alternativa para la extracción del ADN Y ARN. Lo destacable es que con la utilización de
muestras de saliva la obtención del material es inocua y no invasiva.

En la práctica se llevará a cabo un procedimiento para visualizar y aislar ADN de las células del
epitelio bucal y dependiendo a la concentración de sal determinar la cantidad de fibras de ADN
que se producirá. La saliva arrastrará las células del epitelio que recubre las paredes internas
de la boca y que se están desprendiendo constantemente. La sal común (NaCl), con esas
concentraciones formará un medio hipertónico que provocará el estallido de las células y los
núcleos, quedando libre las fibras de cromatina. El detergente cumplirá la misión de formar un
complejo con las proteínas histonas y separarlas del ADN.

MATERIALES Y METODOLOGIA.
Materiales Cantidad
Sal común 3 g, 2 g y 1 g
Agua destilada 10 ml por vaso
Detergente líquido 1 ml
Saliva 3 ml por muestra
Alcohol etílico 96% 15 mL
Palillo de madera o varilla de vidrio 1
Vasos químicos 100 ml 3
Azul de metileno 1 gota
Pesa analítica 1
Microscopio óptico 1
METODOLOGIA.
1. Tomar 3 muestras de saliva de 3 ml cada una.
2. Rotular los vasos con el valor de las concentraciones de la sal.
3. En un vaso químico A realizar una disolución de 2 g de sal y 10 ml de agua, en otro (B)
disolver los 1 g en 10 ml y en el C disolver 3 g en la misma cantidad de agua.
4. Una vez disuelta toda la sal, colocar a cada vaso 3 gotas de detergente líquido y dejar
reposar hasta que la mezcla se homogenice.
5. Colocar los 3 ml de saliva en cada uno de los vasos con las respectivas disoluciones. A partir
de este momento no se puede mover el vaso.
6. Colocar 15 mL de alcohol de 95° frío y dejándolo caer resbalado por las paredes vaso.
7. Esperar unos minutos sin mover el vaso. Se observará la aparición de dos fases. Una fase
turbia en el fondo con la saliva y una fase transparente en la superficie con el alcohol, donde
aparecen unos filamentos de color blanquecino (nuestro ADN).
8. Observar las diferencias entre el vaso A y B. El vaso C lo taparemos y lo dejaremos reposar
por un día.
9. Recogemos el ADN con ayuda de un palillo, varilla de vidrio. Para ello se introduce con
cuidado la varilla en la interface y se gira con suavidad mientras se extrae lentamente.
10. Como complemento se puede tomar unas de las hebras de cromatina, teñirla con azul de
metileno y observarlas en el microscopio.
11. Observar las diferencias en las tres muestras.
RESULTADOS
Vaso A Vaso B Vaso C
Contiene la disolución de 1 Contiene la disolución de 2 Contiene la disolución de 3 g de
g de sal en 10 ml de agua g de sal en 10 ml de agua sal en 10 ml de agua

La formación de la capa de La formación fue casi al La aparición de las fibras fue

ADN fue lenta y casi no se instante de colocarle la más rápida y el reposo de un día
observaron las fibrillas, esto disolución y se observan las fue un factor fundamental para
se debe a que la hebras de ADN, debido a que se formará mayor cantidad
concentración de sal no es que la concentración es de hebras. El alto contenido de
la apta para que las células mayor que la del tubo A sal permite un mejor
de se rompan rompimiento las células.
completamente.
Observación de las fibras

Observamos una de las muestras en

el microscopio y no se observó el
ADN, sin embargo determinamos
que el tiempo fue fundamental, ya
que dejándolas más tiempo en
reposo estas podrían formarse. Solo
se logran observar algunas de las
células de la mucosa y el núcleo.

DISCUSIÓN
La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas una de ellas es que tienen
que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la
célula, después debe romperse la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay
que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se
precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se
desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el
ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la
solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN. El ADN obtenido mediante este
procedimiento no es totalmente puro, ya que va a contener ARN.
En cuanto a las comparaciones que hicimos en las tres muestras cumplimos el objetivo de
identificar los factores determinantes para la formación de las fibras: vemos que donde hay
mayor concentración de sal (siendo un medio hipertónico) se producirá un mayor estallido de
las células, por ende el proceso de liberación de las hebras va a ser más rápida y en mayor
cantidad. En el caso contrario en menor concentración, menor será la cantidad de células que
se rompan, por tanto la producción se hará en menor proporción. Otro de los factores importante
es el tiempo; entre más tiempo dejemos interactuar los componentes, mayor será la producción.

CONCLUSIÓN
Concluimos que la saliva es un líquido que contiene innumerables cantidades de células de las
cuales podemos extraer de forma rápida y sencilla el ADN contenido en el interior de sus
núcleos. Además que es muy importante tomar en cuenta los factores o el medio en los que se
encuentra la saliva para que la extracción sea favorable.