Determinación de Colesterol

SEGUNDA PRÁCTICA
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL

OBJETIVOS

 Comprender el metabolismo del colesterol, su síntesis, transporte y relevancia clínica.

 Establecer la clasificación de las lipoproteínas y su rol en el metabolismo.
 Conocer los trastornos primarios y secundarios del metabolismo de los lípidos.
 Entender el mecanismo fisiopatológico de la aterogénesis.

INTRODUCCIÓN

Los lípidos, como el colesterol y triglicéridos, son insolubles en plasma, por lo que los lípidos
circulantes se transportan en lipoproteínas que las llevan a diferentes tejidos para la utilización de
energía, producción de hormonas esteroides y formación de ácidos biliares. Las lipoproteínas se
conforman de: colesterol esterificado y no esterificado, triglicéridos, fosfolípidos y proteínas. En
cuanto a las características fisicoquímicas de las lipoproteínas, se han clasificado por su tamaño y
concentración de subclase de lipoproteína1.

DESARROLLO

 COLESTEROL Las lipoproteínas son paquetes globulares que

El colesterol está presente en los tejidos y en
el plasma ya sea como colesterol libre o en
forma de almacenamiento, la que se combina
con ácidos grasos formando ésteres de
colesterol.
Figura 1. Membrana celular.
poseen una parte proteica conocida como
Apolipoproteínas2.
El colesterol es un elemento esencial para las
membranas celulares animales (90% del
colesterol del cuerpo está en las membranas)
además sirve para formar las estructuras de
hormonas esteroideas, ácidos biliares y
sintetizar la vitamina D33.

Figura 2. Estructura de una molécula de colesterol.

Fuente: tomada a partir de

https://www.quora.com/Is-cholesterol-polar-or-non-
polar-Why.
Fuente: tomada a partir de Murray R.

El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre 13

 Determinación de Colesterol
Estructuralmente el colesterol está formado
por una molécula de
ciclopentanoperhidrofenantreno, constituida
por cuatro anillos condensados o fundidos,
denominados A, B, C y D, que presentan
varias sustituciones2.
Colesterol es obtenido de la dieta y la
biosíntesis
La cantidad de colesterol de la dieta varía
notablemente de un día a otro, lo que obliga a
la existencia de mecanismos de control que
permitan mantener el equilibrio entre las
velocidades de síntesis y excreción en relación
con lo que es absorbido, y así garantizar la
disponibilidad de cantidades de colesterol que
satisfagan los necesidades de los distintos
tejidos4.
Hay dos fuentes de colesterol en el
organismo3:
 Dieta: existe en las grasas animales no
en las vegetales, en especial en sesos,
hígado, yemas de huevos, carne.
 Síntesis endógena: un poco más de la
mitad del colesterol del cuerpo es
obtenido mediante biosíntesis. Todos
los tejidos con células nucleadas son
capaces de sintetizar colesterol, en un
proceso que se lleva a cabo en forma
escalonada y que ocurre en su
totalidad en el retículo
endoplasmático y el citosol. El
Figura 3. Fuentes y vías de eliminación del colesterol.
Colesterol,
absorbido en
la dieta Pool de colesterol en el
organismo
Colesterol
de síntesis
endógena
Colesterol depositado en tejidos nuevos
Fuente: modificada a partir de Arteaga A.
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sustrato que es el acetil-CoA procede
en su mayor parte del interior de las
mitocondrias.
Por otra parte hay dos vías principales de
eliminación del colesterol del organismo:
 Excreción en forma inalterada a través
de las pérdidas celulares de la piel, de
la descamación de las células del
aparato gastrointestinal y de las
secreciones: Pancreática, gástrica,
intestinal y de los canalículos
hepáticos.
 Eliminación después de haber sido
transformada en sales biliares u
hormonas esteroideas, las cuales a su
vez son excretadas a través del tracto
gastrointestinal u orina.
Por último, existe una tercera vía de
eliminación del colesterol, que es su
incorporación a nuevos tejidos. Esta vía en la
persona adulta es minoritaria, pues, aunque
existe un progresivo acúmulo de colesterol en
determinadas zonas como la pared de los vasos
sanguíneos y el plasma, la cantidad de
colesterol permanece prácticamente inalterada
en la mayoría de los tejidos durante periodos
muy prolongados. Sin embargo, en el
individuo en fase de crecimiento dicha vía es
cuantitativamente importante, ya que debe
incrementarse una media aproximada de 1,4 g
de colesterol por cada kg de peso corporal
ganado.
Colesterol excretado
por la piel y tracto
gastrointestinal
Colesterol
transformado a
productos excretados
14
 Determinación de Colesterol
 REGULACIÓN DE LA SÍNTESIS
DE COLESTEROL4
El punto clave del control de la síntesis del
colesterol es la 3-hidroxi-3-metil-glutaril-CoA
reductasa (HMG-CoA reductasa), sobre la
cual el colesterol o sus metabolitos
(mevalonato, ácidos biliares) ejercen una
inhibición indirecta, bien a través de un
complejo sistema de control en cascada,
modulando la velocidad de su síntesis
reprimiendo la transcripción de la HMG-CoA
reductasa.
El incremento de insulina o de hormona
tiroidea genera el aumento de la actividad de
dicha enzima, mientras que el glucagón y los
corticoides deprimen su acción.
 LIPOPROTEÍNAS3,5
El transporte del colesterol, los triglicéridos,
fosfolípidos y otros lípidos en el torrente
sanguíneo acuoso requieren de un sistema
elaborado de transporte denominado
lipoproteínas.
La densidad de las lipoproteínas es
inversamente relacionada con su contenido de
lípidos.
Las lipoproteínas tienen tres funciones
principales:
1. Transportar la grasa de la dieta desde la
mucosa intestinal por transporte exógeno
de lípidos.
2. Transferir al colesterol y triglicéridos
desde el hígado a otros tejidos por
transporte endógeno de lípidos.
3. Transferir el colesterol de los tejidos
extrahepáticos al hígado por transporte
inverso de colesterol.
 FRACCIONES LIPÍDICAS
El colesterol es transportado principalmente
en 5 lipoproteínas (figura 4):
 Quilomicrones: son partículas muy
grandes que llevan lípidos en la dieta.
El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre
Están asociados con una variedad de
apolipoproteínas, que incluyen AI, A-II,
A-IV, B-48, CI, C-II, C-III y E.
 Lipoproteína de muy baja densidad
(VLDL): llevan triglicéridos endógenos y
en menor grado colesterol. Las principales
apolipoproteínas asociadas con VLDL son
B-100, CI, C-II, C-III y E.
 Lipoproteína de baja densidad (LDL):
llevan ésteres de colesterol y están
asociados con apolipoproteínas B-100 y
C-III.
 Lipoproteína de densidad intermedia
(IDL): partículas llevan ésteres de
colesterol y triglicéridos. Se asocia con las
apolipoproteínas B-100, C-III y E.
 Lipoproteína de alta densidad (HDL):
partículas llevar ésteres de colesterol.
Estas partículas están asociadas con las
apolipoproteínas (apo) AI, A-II, CI, C-II,
C-III, D y E.
Figura 4. Clasificación de las lipoproteínas
Fuente: tomada a partir de
https://bioquimican4med.wikispaces.com/Lipoprote
%C3%ADnas?responseToken=3ec3a61f8cefdd1a7
5755af250f4444f
Las partículas menos densas se conocen como
quilomicrones y solo se encuentran
normalmente después de la ingestión de
alimentos que contienen grasa y se los observa
como una capa cremosa cuando se reposa el
15
 Determinación de Colesterol

suero no obtenido en ayunas. Las demás  APOLIPOPROTEÍNAS

lipoproteínas son suspendidas en el suero y
deben separarse mediante centrifugación. Tabla 1. Apolipoproteínas y sus características.

La mayor parte de los laboratorios cuantifican Apolipoproteína Característica

el colesterol total y la cantidad de colesterol AI Proteína estructural para HDL;
que se encuentra en la fracción HDL, la cual ligando para ABCA1 (casete de
se precipita fácilmente en el suero. unión a ATP) transportador,
activador de la lecitina-
La mayor parte de los triglicéridos se colesterol aciltransferasa
encuentran en la fracción VLDL, que contiene (LCAT).
cinco veces ese triglicérido por peso de A-II Proteína estructural para HDL;
colesterol. Para calcular el colesterol LDL se activador de la lipasa hepática.
puede usar la siguiente fórmula: A-IV Activador de lipoproteína lipasa
(LPL) y LCAT.
 VLDLc= Triglicéridos/5 B-100 Proteína estructural para VLDL,
IDL, LDL y Lp (a); ligando para
VLDLc: colesterol LDL el receptor de LDL; requerido
para el ensamblaje y la
Debido a que se usa la concentración de secreción de VLDL.
triglicéridos como medio para determinar la B-48 Contiene el 48 por ciento de B-
cantidad de VLDL, esta fórmula solo sirve 100; requerido para el
para muestras tomadas en ayunas. Por tanto, ensamblaje y la secreción de
solo actúa cuando la cantidad de triglicéridos quilomicrones; no se une al
es menos de 400 mg/dl. A cifras más altas de receptor de LDL.
triglicéridos, las concentraciones de colesterol
LDL y VLDL pueden medirse después de CI Activador de LCAT.
ultracentrifugado o por medición química CII Cofactor esencial para LPL.
directa. Fuente: modificada a partir de Jellinger P.

El colesterol total es razonablemente estable a

través del tiempo; sin embargo las mediciones
de HDL y en especial de los triglicéridos
pueden variar de manera considerable debido
a un error analítico en el laboratorio y la
variación biológica en la concentración de
lípidos de un paciente. Por tanto las LDL
siempre deben calcularse como la media de al
menos dos mediciones; si estas mediciones
difieren más de 10% debe obtenerse un tercer
perfil de lípidos. El LDL se estima mediante la
ecuación de Friedewald6:
 LDLc= C total – (HDLc + Tg/5)
LDLc: colesterol LDL
C total: colesterol total
HDLc: colesterol HDL
Tg: triglicéridos
APLICACIÓN CLÍNICA
 REPORTE DEL ATP III y GUÍAS
ACC
Las nuevas pautas del Adult Treatment Panel
III (ATP III) y las guías del American College
of Cardiology (ACC) son de gran relevancia
para el manejo de las alteraciones del perfil
lipídico en sujetos con o sin riesgo de
enfermedad arterial coronaria (EAC). El
impacto de la investigación clínica ha
modificado por completo la evolución de la
enfermedad ateroesclerótica en los últimos
años, tanto por sus repercusiones sobre la
prevención primaria por la modificación de los
factores de riesgo, como por su reflejo en la
prevención secundaria.

El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre 16

 Determinación de Colesterol

Principales factores de riesgo para EAC:  Historia familiar de EAC prematura

(en parentela masculina de primer
 Edad (hombres >45 años; mujeres >55 grado <55 años; en parentela
años), femenina de primer grado < 65 años).
 Fumador(a),  Restar un factor de riesgo si HDL es >
 Hipertensión arterial (TA >140/90 60 mg/dl7.
mmHg o estar bajo tratamiento
antihipertensivo); En la tabla 2 y 3 se puede observan los valores
 Cifras bajas de HDL (<40 mg/dL); de colesterol y triglicéridos que se maneja para
categorizar las dislipemias.

Tabla 2. Clasificación del Colesterol total, Colesterol LDL y Colesterol HDL.

Colesterol Total Colesterol LDL Colesterol HDL

(mg/dl.) (mg/dl.) (mg/dl.)
<200 Deseable <100 Optimo <40 Bajo
200-239 Límite alto 100-129 Cerca del optimo ≥60 Alto
≥240 Alto 130-159 Límite alto
160-189 Alto
≥190 Bien alto

Fuente: modificada a partir de Expert Panel

Tabla 3. Guías ACCE 2017. Clasificación de los niveles elevados de Triglicéridos.

Categoría Concentración (mg/dl)

Normal y Objetivo terapéutico <150

Límite alto 150-199

Alto 200-499
Muy alto ≥500
Fuente: modificada a partir de Jellinger P.

 TRASTORNOS PRIMARIOS receptores funcionales para las LDL a nivel

QUE AFECTAN EL hepático, por lo que se produce un aumento en
METABOLISMO DE LOS las concentraciones plasmáticas de colesterol
LÍPIDOS transportado en las lipoproteínas de baja
densidad, asociado al depósito de colesterol en
Hipercolesterolemia familiar: los tendones y al desarrollo de enfermedad
cardiovascular prematura, especialmente
Es una enfermedad genética autosómica cardiopatía isquémica.
dominante causada por mutaciones en el gen
que codifica el receptor de LDL (rLDL) Los pacientes homocigóticos tienen
localizado en el cromosoma 19. La concentraciones extremadamente altas de
consecuencia de este trastorno es una LDL, de hasta ocho veces (600-1200mg/dl)
reducción importante en el número de por encima de lo normal y pueden presentarse
con enfermedad aterosclerótica en la infancia
y aparecer infarto agudo de miocardio en las

El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre 17

 Determinación de Colesterol
tres primeras décadas. Los que tienen un gen
defectuoso (heterocigóticos) presentan
concentraciones de LDL del doble de lo
normal (300-500mg/dl), las personas con este
trastorno con frecuencia desarrollan
cardiopatía coronaria antes de los 55 años8,9.
 TRASTORNOS SECUNDARIOS
QUE AFECTAN EL
METABOLISMO DE LOS
LÍPIDOS10
Inactividad. La falta de actividad física, la
vida sedentaria, puede bajar los niveles del
colesterol HDL.
Obesidad. El exceso de peso incrementa la
cifra de triglicéridos en sangre. También baja
la cifra de colesterol HDL e incrementa el
nivel del colesterol VLDL. Especialmente la
obesidad abdominal.
Dieta: las grasas saturadas (se encuentran en
productos animales como mantequilla, queso,
leche entera, helados y carnes grasas, como las
carnes rojas, consideradas como "malas") y las
grasas trans (se encuentran en los aceites
vegetales hidrogenados usados para la bollería
industrial, los fritos y la margarina, y también
en los alimentos procedentes de rumiantes)
también aumentan los niveles de colesterol en
sangre. Por el contrario, las grasas
poliinsaturadas bajan el colesterol en sangre:
las grasas monoinsaturadas pueden contribuir
a disminuir los niveles de colesterol en sangre.
(Las grasas insaturadas, consideradas como
"buenas", se encuentran básicamente en el
aceite de oliva y en las nueces).
Tabaco: Fumar cigarrillos lesiona las paredes
de las arterias, facilitando el acúmulo de
depósitos de grasas. El tabaco también
desciende los niveles del colesterol HDL
Hipertensión arterial: Al dañar las paredes
arteriales, la hipertensión puede acelerar la
El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre
deposición de placas de grasas en las arterias.
Además el uso de diuréticos genera un
aumento de colesterol y triglicéridos.
Estrés emocional y consumo de café.
Incremento de VLDL.
Ingesta de alcohol
Asociación con otras enfermedades.
Diabetes tipo 2, enfermedad hepática,
síndrome nefrótico, hipotiroidismo.
 DETECCIÓN DEL AUMENTO
DEL COLESTEROL
Los pacientes que tienen anomalías de los
lípidos se los detecta mediante exámenes de
laboratorio, ya sea como parte de los estudios
de un paciente con enfermedad cardiovascular
o como parte de una estrategia de detección
preventiva.
El exceso de colesterol no genera
sintomatología solo ante cifras extremas como
concentraciones por encima de 1000mg/dl
producen la formación de xantomas eruptivos
(Pápulas de color rojo-amarillo, en especial
sobre las nalgas). Las concentraciones
elevadas de LDL ocasionan xantomas
tendinosos en ciertos tendones (tendón de
Aquiles, rotuliano, dorso de la mano). Se ha
observado lipemia retiniana (Vasos
sanguíneos de color crema en el fondo de ojo)
con cifras extremadamente altas de
triglicéridos (sobre los 2000 mg/dl).
El incremento de los niveles circulantes de
colesterol genera que los ésteres de colesterol
pueden llegar a acumularse en las células de la
pared arterial y originar el desarrollo de la
aterosclerosis. Además la bilis puede llegar a
sobresaturarse de colesterol, que al final
precipita, dando lugar a cálculos biliares10.
18
 Determinación de Colesterol
 ATEROGÉNESIS10,11
Figura 5. Aterogénesis y sus consecuencias
Fuente: tomada a partir de
https://bioquimican4med.wikispaces.com/Lipoprote%C3%ADnas?responseToken=3ec3a61f8cefdd1a75755af250f4444f.
 CÁLCULOS DE COLESTEROL
Puede haber uno o varios cálculos de color
blanco amarillento. Suelen ser
radiotransparentes. Para su formación son
necesarios tres mecanismos patogénicos:
1. Bilis sobresaturada de colesterol: el
colesterol, que es virtualmente
insoluble en la bilis, se vuelve soluble
por dos mecanismos: formación de
micelas de ácidos biliares lecitina-
colesterol y transporte en forma de
vesículas. Cuando se da un aumento
de la secreción de colesterol o una
El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre
disminución de la secreción de sales
biliares, se supera la capacidad de
transporte por parte de los
solubilizantes. Además, la bilis
sobresaturada de colesterol disminuye
la contractilidad de la vesícula y
aumenta la secreción de mucina11.
2. Nucleación: es el proceso de
cristalización y acúmulo
macroscópico del colesterol. Los
factores que provocan que se dé la
nucleación son: glucoproteínas
19
 Determinación de Colesterol
termolábiles, calcio y estasis
vesicular10.
3. Permanencia, cohesión y
crecimiento de los cristales de
colesterol: este mecanismo sucede en
la vesícula, y está favorecido por la
hipomotilidad vesicular10-11.
FUNDAMENTOS DE LA PRÁCTICA
 DETERMINACIÓN DE
COLESTEROL TOTAL EN
PLASMA SANGUÍNEO POR
ESPECTROFOTOMETRÍA
Fundamento
Se trata de una prueba colorimétrica
enzimática. Los esteres del colesterol
contenidos en el plasma sanguíneo son
separados en sus dos componentes: Colesterol
y Ácidos grasos. La reacción es facilitada por
la enzima Colesterol Esterasa (CHE).
HOH
CHE
Esteres del Colesterol → Colesterol +Ácidos
Grasos
El colesterol en estado libre es oxidado por
acción de la enzima Colesterol Oxidasa (CHO)
dando como productos de la reacción agua
oxigenada (H2O2) y una cetona de colesterol.
O2
H2O2++Colesterol-ona.
Colesterol → H2O2 colesterol-ona
CHO
Finalmente, el H2O2 o Peróxido de hidrógeno
por acción de la Peroxidasa (POD) produce
una sustancia coloreada que se llama
quinoneimina. La intensidad de color de esta
sustancia se correlaciona directamente con la
cuantía de agua oxigenada (H2O2)
El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre
reaccionante y en consecuencia con la
cantidad de colesterol presente en la muestra
que se investiga.
Reactivos
1. Una solución de colesterol de
concentración conocida: 200 mg/dl, a
la que se llama "estándar".
2. El reactivo mismo que contiene las
enzimas CHE, CHO y POD. El
reactivo está dotado de una sustancia
que aclara la turbidez que se presenta
en muestras de plasmas lipémicos,
esta sustancia se llama "FACTOR
ACLARANTE DE LÍPIDOS". Las
muestras lipémicas producen
resultados muy elevados que son
calificados como resultados falsos.
Equipos y materiales
Espectrofotómetro, Baño de aire caliente,
Vortex, centrífuga clínica, Pipeta automática
de 10ul, microcubeta (individual), punta
amarilla individual, guantes (individual),
jeringuilla, tubo de ensayo de tapa roja
(contiene el reactivo). Tubo de ensayo de tapa
lila (contiene el anticoagulante EDTA al
10%), gradilla y algodón antiséptico.
Procedimiento
1. Extraiga 3 ml de sangre venosa del pliegue
del codo.
2. Trasvase cuidadosamente la sangre al tubo
de ensayo de tapa lila.- Mezcle
suavemente por inversión unas tres veces
y lleve el tubo a la centrífuga.
3. Centrifugue a 3000 rpm por cinco
minutos, retirar el tubo de la centrífuga y
colocarlo en la gradilla.
4. Acople la punta amarilla a la pipeta
automática y aspire 10 ul del plasma
sobrenadante en el tubo de tapa lila.
5. Dispense los 10 µl de plasma contenidos
en la punta amarilla en el tubo de tapa roja
(contiene el reactivo). Coloque la tapa,
agite el tubo en el Vortex por cinco
segundos.
20
 Determinación de Colesterol

6. Colocar el tubo de tapa roja en el baño de
aire caliente a 37° C por 5 minutos.
7. Ajuste el espectrofotómetro para la
determinación a longitud de onda a 500
nm.
8. Trasvase la muestra (tubo de tapa roja) a
su microcubeta y mida la absorbancia de
la muestra.
9. Interprete los resultados obtenidos

PREGUNTAS DE AUTOEVALUACIÓN

 ¿Cuáles son las lipoproteínas?

 ¿A qué se define como trastornos primarios del metabolismo de los lípidos?
 ¿Cuáles son los trastornos secundarios del metabolismo de los lípidos?
 ¿Cómo se forma la placa de Ateroma?
 ¿Cuál es la enzima reguladora de la síntesis del colesterol?
 ¿Cuándo no se puede aplicar la ecuación de Friedewald?

CASO CLÍNICO

Paciente masculino de 52 años acude a nuestra consulta. Aporta una bioquímica de sangre en ayunas
en la que destaca un colesterol total de 325 mg/dl, HDL: 45 y triglicéridos de 300 mg/dl. Hábitos:
fumador de aproximadamente 15 cigarros/día desde hace 20 años. Antecedentes personales y
familiares normales. Exploración física: TA 140/90, Talla=1,70m Peso 75kg, resto sin alteraciones.
¿Calcule el colesterol LDL?

a) 220 mg/dl
b) 340 mg/dl
c) 230 mg/dl
d) No se puede realizar el cálculo por que los triglicéridos están muy elevados

Respuesta: a

REFERENCIAS:

1. Rosenson, R. HDL measures, particle hypercholesterolemia. Hum Mutat. 1992;

heterogeneity, proposed nomenclature, 1: p. 445-66.
and relation to atherosclerotic 6. Jellinger, P. American association of
cardiovascular events. Clin Chem. 2011; clinical endocrinologists and american
57: p. 392-410. college of endocrinology guidelines for
2. Roskosky, R. Bioquímica México- management of dyslipidemia and
México D.F.: McGraw-Hill prevention of cardiovascular disease.
Interamericana; 2001. Endocrine Practice. 2017; 23(s2): p. 1-87.
3. Murray, R. Bioquímica Ilustrada de 7. Expert Panel. Executive Summary of the
Harper. 27th ed. USA: McGraw-Hill Third Report of the National Cholesterol
Companies; 2006. Education Program (NCEP). JAMA.
4. Herrera, E. Bioquímica, Biología 2001; 285: p. 2486-97.
molecular y Bioquímica fisiológica 8. Scriver, C. The Metabolic and Molecular
Madrid-España: McGraw-Hill Bases of Inherited Disease. 8th ed. New
Interamericana; 1998. York: McGraw-Hill; 2001.
5. Hobbs, H. Molecular genetics of the LDL 9. Ballantyne, C. Hyperlipidemia:
receptor gene in familial Diagnostic and Therapeutic Perspectivs.

El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre 21

 Determinación de Colesterol
The Journal of Clinical Endocrinology
and Metabolism. 2000; 85(6).
10. Cotran, C.. Patología estructural y
funcional de Robbins. Sexta ed.
Colombia, Bogota: McGraw-Hill
Interamericana; 2003.
11. Arteaga, A. Hipercolesterolemia familiar
heterocigota: diagnóstico molecular y
terapia combinada. Rev Méd Chile. 2007;
135: p. 216-220.
El Laboratorio de Bioquímica de Tercer Semestre
12. Schmitt M. Dreams time. [Online]. [cited
2018 Enero 18. Available from:
https://es.dreamstime.com/stock-de-
ilustraci%C3%B3n-mol%C3%A9cula-
de-la-glucosa-c-h-o-image86899419.
13. Murray R, Bender D, Kennelly P, Botham
K, V R, Weil P. Harper Bioquímica
Ilustrada. Vigecima Novena ed. México,
D.F.: McGraw-Hill Interamericana;
2013.
22