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Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann ESIA – FCAG l

PRACTICA N2

TINCIÓN GRAM

OBJETIVOS
 Identificar la morfología (coco, bacilo, ect) y tipo de tinción (Gram positiva
o Gram negativa) de las cepas proporcionales.
INTRODUCCIÓN
De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes
grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción.
El fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos
grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su
pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano más
fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante
(Cristal violeta) se efectúa un lavado conetanol que arrastrará al colorante sólo
en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) elcolorante queda retenido y las
células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán después con un
colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse.

MATERIALES
Equipos
 Mechero Bunsen
 Asa de Siembra o aguja enmangada
 Pinzas
 Portaobjetos
 Palillos
 Microscopios
 Goteros
 Pinzas
 Palillos
 Microscopios
 Soporte de Tinciones
Muestras bacterianas:
 Yogurt fongal
 Yogurt (planta lechera de Tacna)
 Yogurt gloria
 Aceituna
 Levadura de pan
 Leche fermentada

MICROBIOLOGIA 1
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Colorantes para Tinción


 Solución de cristal Violeta
 Lugol
 Safranina
 Etanol 95%
 Aceite de inmersión
 Agua destilada
 Alcohol

PROCEDIMIENTO
 En unas gotas de agua colocadas sobre un portaobjetos, disuelve una
pequeña cantidad de yogur, Yogurt fongal, Yogurt (planta lechera de
Tacna), Yogurt gloria, Aceituna, Levadura de pan, Leche fermentada con
ayuda de un palillo higiénico.
 Prepara una fina extensión (frotis), en otras portas, dejándolos secar.
 Fija este frotis dándole varios pases a los portas sobre la llama del
mechero, con la muestra hacia arriba.
 Cubre ambos frotis con cristal violeta durante 1 min.
 Se retirará el colorante mediante un suave lavado con agua, deslizando
el agua sobre la porta, para non desprender la muestra.
 Cubrir ahora con Lugol durante 1 min., y después se realizará otro lavado
suave. Todas las células se teñirán de violeta.
 Se retirará el colorante con alcohol, goteándolo por el portaobjetos, hasta
que las gotas que salen no tengan casi color. Las células Gram- pierden
el colorante violeta y quedarán incoloras. Las Gram + seguirían violeta.
 Añade una gota de agua a la preparación y cubre las preparaciones 2 min.
con safranina (colorante de contraste).Finalmente, lava el colorante con
agua. Este colorante sólo entrará en las bacterias Gram –, que quedarán
rojas. Las Gram + seguirán violetas.
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 Seca las preparaciones y observar con microscopio utilizando el objetivo


de inmersión. En esta tinción diferencial las bacterias Gram – aparecen
rojas y las Gram + violeta. Observar (100×).

RESULTADOS

Leche cortada
Levadura

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Yogurt gloria

Yogurt panta lechera

Aceituna Yogurt fongal

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CONCLUSION
 La tinción de Gram es una herramienta muy útil en el laboratorio de
microbiología, y una de las más importantes, tanto por su aplicación
clínica para hacer una identificación preliminar de la bacteria para poder
tener una correcta interpretación de los datos que nos otorga la
diferenciación de Gram positiva y negativa concluyendo que debido a la
estructura de sus paredes celulares tendrán o no propiedades patológicas
diferentes.

BIBLIOGRAFÍA
 http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
 https://es.scribd.com/doc/43696269/Tincion-de-gram-Introduccion-
desarrollo-e-interpretacion-de-resultados-Practica-2
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/ eminarioTinciones.htm*gráficos
obtenidos
de:http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm

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