UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

FACULTAD DE CIENCIAS INGENIERÍAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y SANITARIA

FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERÍA

E.P. ING. AMBIENTAL Y SANITARIA

ELIMINACION, LIMPIEZA DE
MATERIAL CONTAMINADO,
PREPARACION Y ESTERILIZACION
DE MATERIALES USADOS EN
MICROBIOLOGIA.

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ELIMINACION, LIMPIEZA DE MATERIAL CONTAMINADO,

PREPARACION Y ESTERILIZACION DE MATERIALES USADOS EN
MICROBIOLOGIA.

1. INTRODUCCIÓN
En microbiologia es importante recordar la necesidad de una pulcra y esmerada
limpieza del material. Asimismo, es muy importante la recuperacion del
material reciclable y la eliminacion del material desechable.
Todo los objetos sucios o contaminados deben recogerse en recipientes
adecuados, provistos de tapa. El material de vidrio, tubos, matraces y pipetas,
pipetas horizontales lleno de una solucion desinfentante, como por ejemplo una
solucion diluida de lejia, en la que permanecera antes de su lavado durante 24
horas. Como los contaminantes contienen, con frecuencia cantidades
importantes de materia organica (procedentes de medios de cultivos) que
protege a los microorganismos de los agemtes fisicos o quimicos utilizando

2. OBJETIVOS

 Conocer la importancia de la esterilizacion y familiarizarse con el manejo de

los procedimientos mas frecuentes ultilizados para llevar a acabo.

 Adquirir conocimientos suficientes y habilidades necesarias para controlar y

mejorar los procesos de esterilización.

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3. MATERIAL Y MÉTODOS
MATERIAL.

1 AUTOCLAVE
 Se introduce vapor en la cámara y en el interior de
los contenedores, hasta alcanzar la temperatura y presión de
esterilización.
 Se mantiene constante la temperatura y presión en la cámara
durante el correspondiente tiempo de esterilización.
 Se pueden provocar quemaduras en la piel al manipular las
paredes y la puerta de la cámara del autoclave.
 Muchos autoclaves se usan para esterilizar equipos y
suministros sometiéndo los a vapor de agua saturado a alta
presión a 121°C durante alrededor de 15 a 20 minutos
dependiendo del tamaño de la carga y el contenido.

2 INCUBADORA BACTERIOLOGICA
 Se encuentra en grados Celsius y nos indica la temperatura a la
quese encuentra el interior de la estufa, la que nos sirve de
referencia para llegar a latemperatura deseada.

 la estufa bacteriológica se utiliza para realizar cultivos de

bacterias. Que la temperatura llegue a 160C° a 180C° para la
esterilizacion de los cultivos.
 Nunca coloque dentro de la estufa bacteriológica material que no soporte la
temperaturas elevadas, ya que éste puede derretirse o quemarse produciendo
malosolores, y contaminando las muestras o el material.

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3 BIOMASA
 la biomasa o bioseguridad en laboratorios clínicos son el
conjunto de normas y medidas para proteger la salud del
personal frente a los riesgos biológicos, químicos y
físicos a los que está expuesto en el desempeño de sus
funciones (oms).

 factores condicionantes la resistencia, mecanismo de

supervivencia de microorganismos, presenta diferentes
grados y esta relacionada con su estructura, con su
capacidad de producir esporas, o con la presencia de
ciertos componentes de la pared celular (lípidos o
proteínas) o de su grosor.

4 GRADILLA
 Una gradilla es un utensilio utilizado para dar soporte a los
tubos de ensayos o tubos de muestras.
 Una gradilla es una herramienta que forma parte del material
de laboratorio (principalmente en laboratorios de
microbiologia).
 Las gradillas se fabrican en madera, plástico o metal. Que muy
resistente a mayor temperatura despues de esterilizacion en los
equipos.

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5 VASO PRECIPITADO
 Son de vidrio y de plástico.
 Se utiliza muy comúnmente en el laboratorio, sobre
todo, para preparar o calentar sustancias, como son muy
resistente para la esterilizacion de los cultivos.
 Su objetivo principal es contener líquidos o sustancias
químicas diversas de distinto tipo.
 Si el vaso se encuentra caliente debe tomarse con guantes u
otro material.

6 TUBO DE ENSAYO
 Esta, hecho de un vidrio especial que resiste las temperaturas
muy altas, mayormente en la esterilizacion en los equipos, sin
embargo los cambios de temperatura muy radicales pueden
provocar el rompimiento de tubo (PYREX)
.
 El calentamiento del tubo conlleva utilizar pinzas de madera si
se expone a altas temperaturas durante un largo tiempo.

7 PLACA DE PETRI
 Recipiente redondo, hecho de vidrio o de plástico que son muy
resistentes a mayor temperatura, posee diferentes diámetros, es de
fondo bajo, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero
un poco más grande de diámetro, ya que se puede colocar encima
y cerrar el recipiente, como una tapa.

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 Para la esterilizacion en primer lugar se limpia con agua y alchol luego se sica con
tualla para envolver con papel de caramelo luego llevar a la incubadora
bacteriologia a una hora y media a dos horas.

8 PIPETA GRADUADAS
 Están calibradas en unidades convenientes para permitir la
transferencia de cualquier volumen desde 0.1 a 25 ml.
 Son muy ressistentes a altas temperaturas 160C° a 180C° para
poder esterilizar la pipeta, que son contaminados con los
diferentes tipos de microorganismos en su estado de uso.
 Mide volúmenes de líquido con gran exactitud.
 Se puede utilizar para medir varios volúmenes.
 Instrumento graduada se encuentra formada por un tubo
transparente vidrio o de plástico, que terminar en unos puntas
de forma conforme o cónica, su función principal es medir la
cantidad de líquido.

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9 BALANZA ANALITICA
 La balanza es un instrumento que sirve para medir la masa.
 La balanza analítica es una clase de balanza utilizada
principalmente para medir pequeñas masas.
 Este tipo de balanza es uno de los instrumentos de medida más
usados en laboratorio y de la cual dependen básicamente todos los
resultados analíticos.
 Las balanzas analíticas modernas, que pueden ofrecer valores de
precisión de lectura de 0,1 µg a 0,1 mg, están bastante desarrolladas
de manera que no es necesaria la utilización de cuartos especiales
para la medida del peso.

METODO
 El metodo mas comunmente empleado para destruir los microorganismos es el
calor, entre otras razones porque es el mas economico y el mas facil de controlar.
El calor utilizado con este fin puede aplicarse en forma de calor seco o de calor
humedo. El calor seco destruye los microorganismos por efectos de la oxidacion
y se requiere temperaturas muy elevada. El calor humedo elimina los
microorganismos a temperatura menores, ya que la presencia de agua acelera la
rotura de los puentes de hidrogeno responsables de la estructura terciaria de las
proteinas, haciendo que estas se desnaturalicen y pierdan por tanto su
funcionalidad. Las esterilizacion por calor seco puede hacerse por flameado o
mediante hornos de aire caliente

I) FLAMEADO: se emplea para esterilizar asa e hilos de siembra, pinzas. Espatulas

etc. Consiste en someter directamente a la accion de la llama de un mechero los
utensilios que se vayan a esterilizar. Este metodo es rapido y su eficacia es altisima, sin
embargo no se puede aplicar a objetos termolabiles.


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II). ESTERILIZACION POR AIRE CALIENTE: se lleva acabo en hornos de aire

caliente y consiste en colocar los objetos que se van a esterilizar, debidamente
protegidos para que no se contaminen una vez esterilizados,en el interior de una
estufa. Este procedimiento se utiliza para esterilizar material de vidrio: pipetas,
matraces, tubos, etc. U otros materiales termorresistentes. Las temperaturas a las que
se somete estos materiales son muy elevadas ( 180°C durante cerca a 2 horas).
 Estas temperaturas no pueden utilizarse para esterilizar liquidos (como medios de
cultivo). Ya que al llegar alos 100°C comensaria a hervir y continuarian hirviendo
sin elevar su temperatura por encima del punto de ebullicion del agua a presion
atmosferica y a esta temperatura las endosporas bacterianas pueden sobre vivir
durante horas. Pero incluso en muestras en las que supiesamos que no existen
endosporas, esta metodologia puede implicar cambios en la concentracion de los
componentes del medio, a causa de la fuerte evaporacion sufrida.

EL CALOR HUMEDO: Tambien se utiliza para la destruccion de los

microorganismos siendo, como ya se ha comentado, a igual temperatura, mucho mas
eficaz que el calor seco, con ete tratamiento las enzimas se desnaturalizan rapidamente,
al igual que las menbranas celulares. Ademas, el vapor de agua, especialmente si genera
a sobrepresion, es una eficaz transmisor de calor al ebullicion, vapor fluente y vapor
saturado a presion.

EBULLICION: El agua hirviendo (100°C) tiene accion limitada ya que se aplicada

durante 10 minutos va a destruir las formas vegetativas de los microorganismos, pero
las endosporas bacterianas pueden sobrevivir incluso a tratamientos prolongados.
 Se podria utilizar el baño maria o baño de agua hirviendo ( solo con fines de
desinfeccion en el laboratorio), cuando no se necesita alcanzar la esterilidad o
cuando no se dispone de otros metodos mejores, tanto para material. (pinzas,
tijeras, escalpelos, etc) como para medios de cultivo que no puedan esterilizarse
en autoclave.

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VAPOR FLUENTE: Este tecnica se emplea con frecuencia para esterilizar medios de
cultivo que no se puedan someter a una temperatura superior a 100°C sin que pierda
alguna propiedades, como leche , azucares, sueros, etc. Se utiliza un autoclave a presion
admosferica, con la espita abierta, donde nunca se superan los 100°C, y se realiza el
proceso durante 30 – 45 minutos destruyendose en este proceso las formas vegetativas
pero no las endosporas termorresistentes. Si estas se encuentran presentes en la muestra
germinan despues de calentamiento y estas formas vegetativas seran destruidas en los
siguientes ciclos. Este metodo de esterilizacion se denomina tambienesterilizacion
fraccionada o tindslizacion.

VAPOR SATURADO A PRESION: La esterilizacion por esta tecnica utiliza vapor

de agua saturado que se somete a una admosfera extra de presion sobre la presion
admosferica normal elevandose con ello el punto de ebullicion del agua de 100°C a
121°C y consiguiendo la destruccion de todos los microorganismos ( salvo los
termofilos extremo) en un tiempo de 15 a 20 minutos. Esta temperatura es tambien
necesaria para la destruccion de las endosporas bacterianas, que presentan una alta
resistencia termica y que puedan sobrevivir, como ya se ha indicado, a 100°C durante
horas. El vapor de agua difunde osmosis a travez de la menbrana de las esporas
coagulando su protoplasma, fenomeno que se actua si el vapor es saturado y a
sobrepresion. Esta tecnica de esterilizacion requiere el uso de autoclave.

AUTOCLAVE: Permite elevar la presion una o dos atmosferica sobre la presion

atmosferica, elevandose con ello la temperatura de ebullicion del agua que se encuentre
en su interior.
 Consta de un recipiente metalico, generalmente de acero inoxidable, similar a una
gran olla, en cuyo interior se introduce el material a esterilizar que se coloca sobre
una rejilla o placa agujereada. Despues de cerras cuidadosamente tapa, se conecta
la fuente de calor y comienza a elevarse la temperatura en su interior. La salida
continua del chorro de vapor a travez de la valvula nos indica que el aire es

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importante ya que la difusion del calor entre el vapor de agua y el aire es pobre,
por lo que no se alcanzara la temperatura esperada a la presion elegida y no se
conseguira la esterilizacion. La valvula se cierra cuando solo sale vapor de agua
y, a partir de ese momento, comieza a elevarse la presion hasta una admosfera
sobre la presion normal, elevandose como consecuencia la temperatura hasta
121°C. transcurridos 15-20 minutos, en estas condiciones, el material se ha
desterilizado. En el incremento de temperatura por encima de los 100°C y no la
presion la que destruye los microorganismos.

 Si se esterilizan volumenes grandes de liquido, es necesario mantener el material

en el autoclave durante periodo de tiempo mas prolongados, pues se tardan mas
en alcanzar los 121°C en el centro de un gran volumen.
 Una vez transcurrido el tiempo necesario, se apaga el autoclve y se deja descender
la temperatura hasta que el indicador marque menos de 80°C, que sera cuando la
presion haya descendido hasta presion atmosferica. Se abre ligeramentela espita
para comprobar que no queda vapor a presion en el interior y ya se puede proceder
a retirar todo el material esterilizado, dejandolo enfriar a temperatura ambiental.
 El autoclave se utiliza para esterilizar medios de cultivo, instrumentos, ropas,
soluciones, jeringas, etc. Que pueda soportar altas temperaturas y una admosfera
de sobrepresion.
 Para la esterilizacion de materiales liquidos sensibles al calor, como algunos
medios de cultivo, soluciones de antibioticos, encimas, vacunas, etc. O tambien
para gases, se utiliza la filtracio. En la esterilizacion por calor se destruye los
microorganismos del medio, mientras que la filtracion los retira de una forma
mecanica, en lugar de destruirlo.
 La filtraciones el paso de un liquido o gas a traves de un material filtrante, con
poros lo suficientemente pequeños como para retener celulas microbianas.
 Los filtros que se utilizan en la actualidad son, generalmente, los denominados
filtros de membrana y estan integrados por pequeñas piezas de material sintetico,

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generalmente acetato de celulosa o policarbonato, que puede tener poros con

tamaños de 0,22 y 0,45 um, diseñados para retener bacterias. La accion combinada
de los poros, la trama del filtro y la naturaleza quimica del materila ultilizado
retiene los microorganismos, pero no el fluido. Los fluidos que se van a filtrar
pasan a travez de la membrana con la ayuda del vacio generado, por ejemplo, con
una bomba de vacio.

4. RESULTADOS
 Se pudo observar un color amarillento palido y tiene un mal olor, sin
sedimentos
 No se encontro presencia de microorganismos vivos ( no presentan
movimientos).
5. DESCUSIONES O COMENTARIOS
 Tenemos que en la primera muestra de haver transcurrido una hora y media y
haberlos dejado a temperatura ambiente, se pudo observar que hubo un
crecimiento microbiano, los microorganismos se pueden desarrollar dandoles
los factores de crecimiento que requieren con la temperatura.

 En la segunda muestra despues de haber trancurridouna hora se observo que

los microorganismos se han muerto debido a la fuerte presion y temperatura
dentro del autoclave

6. CONCLUSIÓN
 Comprendemos los metodos de esterilizacion, ya sean fisicos o quimicos,
tambien llegamos a ser la importancia de auoclavado en las dos muestras
 Logramos como prevenir el ingreso de microorganismo en los materiales
esterializados

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7. RECOMENDACIONES

 El material debe cepillarse enfatizando esta acción en los espacios reducidos

(hendijas, bordes, ángulos, etc.).
 Enjuagar con abundante agua, eliminando residuos del detergente.
 Debe secarse el material con paño seco.
 El operador debe contar con barreras de protección (guantes, antiparras) ya que
los agentes pueden producir irritación ocular o dérmica.
Las soluciones deben ser descartadas a diario.

8. BIBLIOGRAFÍA

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Médica Panamericana: 7 .
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 TP-Laoratorio Quimico. (2017). Obtenido de TP-Laoratorio Quimico.
 Vélez Sicha, A. R. (10-nov-2011). Diseño y Construcción de un Banco de
Pruebas para un Sistema de Climatización para Laboratorio. Tesis Ingeniero
Mecánico.

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