Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas BUAP

Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

Práctica 6
PRUEBAS CRUZADAS.

Laboratorio Inmunología
MC. Laura Martínez Pérez
 Practica No. 6
PRUEBAS CRUZADAS.

Objetivo

Realizar las pruebas de compatibilidad sanguínea denominadas “Pruebas

Cruzadas”

Introducción

Las pruebas cruzadas normalmente se llevan a cabo en cuatro fases:

Lectura rápida, lectura de 37º, lectura 37º/ Coombs, validación con eritrocitos
sensibilizados. El medio que rodea la prueba está muy relacionado con los
potenciadores y con la fuerza iónica que favorece la reacción antígeno-anticuerpo,
por lo que debe ser capaz de detectar anticuerpos activos a bajas temperaturas y
diferenciar entre reacciones positivas verdaderas y falsas.

Consta de tres partes: 1. Prueba mayor (D), 2. Prueba menor (R), 3. Prueba
autotestigo (AT):

1. Prueba mayor (D) o del DONADOR:

a) Sirve para confirmar si existe compatibilidad ABO entre el receptor y el
donador.
b) Detecta anticuerpos en el suero del paciente que no se hayan demostrado en
la prueba de tamizaje (porque el antígeno correspondiente no estaba presente
en las células detectoras o eritrocitos de fenotipo conocido, PANEL).

Se utilizan 2 gotas de suero del receptor más 1 gota de eritrocitos lavados del
donador.

2. Prueba menor (R) o del RECEPTOR: a) Detecta anticuerpos irregulares en el

suero del donador y ratifica algún error de clasificación ABO/Rh.

Se realiza con 2 gotas de suero o plasma del donador más 1 gota de eritrocitos del
receptor.
3. Prueba autotestigo (AT): a) Permite detectar una prueba de antiglobulina
directa positiva, así como la presencia de rouleaux y otras anormalidades
autoinmunes (AHAI).

Se realiza con 1 gota de eritrocitos del receptor más 2 gotas de suero del receptor.

Detección de anticuerpos libres en suero: se realiza enfrentando el suero del

paciente o receptor con eritrocitos de fenotipo conocido (PANEL).

La investigación de anticuerpos irregulares libres en suero se debe realizar por lo

menos con dos técnicas: la primera siempre será la salina llevada hasta la fase de
Coombs, ya que en la mayoría de los casos permite diferenciar la IgM en su fase
rápida a 22 y 37 °C de la IgG en la fase de Coombs; y la segunda puede ser un
medio hiperproteico como albúmina, o enzimas como bromelina o LISS, siendo
esta última la más eficaz.

Interpretación de detección de anticuerpos y pruebas cruzadas

a) Anticuerpos negativos y prueba cruzada compatible. Una detección de

anticuerpos negativa no garantiza que el suero se encuentre libre de
anticuerpos eritrocitarios clínicamente significativos, sólo indica que no
contiene anticuerpos reactivos. Tampoco una prueba cruzada compatible
indica una supervivencia eritrocitaria normal, por ello debe realizarse
conjuntamente con un tamiz para anticuerpos, o bien diferentes técnicas tanto
para anticuerpos como pruebas cruzadas.5,6
b) La detección de anticuerpos, las pruebas cruzadas o ambas pueden ser
positivas. Lo anterior puede deberse a la presencia de aloanticuerpos,
autoanticuerpos, interacciones adversas con reactivos y formación de rouleaux.
Si hay múltiples anticuerpos o un anticuerpo que reacciona con un antígeno de
alta incidencia o si el anticuerpo está presente en concentraciones muy bajas
deben usarse técnicas específicas como elusión, absorción o la combinación
de las mismas.
c) Prueba cruzada incompatible, anticuerpos irregulares negativos. Se puede
presentar cuando la concentración del anticuerpo es muy baja y sólo se
 detecta con células frescas, también ocurre cuando las células del panel de
eritrocitos de fenotipo conocido no tienen el antígeno de la población en
estudio.

Metodología

PM/S. 2 gotas del suero PM/S. 2 gotas del suero

obtiene una muestra de
del receptor + 4 gotas del receptor + 4 gotas
sangre del donador y
de eritrocitos (al 5%) del de eritrocitos (al 5%) del
receptor
donador donador

PM/A. 2 gotas del suero

Se disponen 4 tubos Se agregan a cada tubo del receptor + 4 gotas
etiquetados como los siguientes reactivos de albúmina + 1 gota de
sigue: en el orden indicado: eritrocitos (al 5%) del
donador.

pm/a. 2 gotas del suero

Tubo 1: PM/S =Prueba del donador + 4 gotas
Tubo 4 pm/a =Prueba
Mayor en solución de albúmina + 1 gota de
Menor en albúmina
salina eritrocitos (al 5%) del
receptor

Se centrifugan 1 minuto
Tubo 2: pm/s =Prueba Se mezclan bien y se
Tubo 3: PM/A =Prueba a 2000 r.p.m. y se busca
Menor en solución incuban a 37°C por 30
Mayor en albúmina la presencia de
salina minutos.
aglutinación

Resultados

Después de haber realizado previamente el desarrollo de los pasos del análisis de

pruebas cruzadas nos pudimos percatar que en ninguno de nuestros tubos de
ensayo se presentó aglutinación por lo cual podríamos decir o concluir que la
sangre de nuestro donante es compatible hacia el receptor en este caso el
paciente.
Conclusión

Las pruebas cruzadas y la búsqueda de anticuerpos son de suma importancia, ya

que permiten que los antígenos y anticuerpos puedan ser detectados y estudiados
en el laboratorio; ayudan a prevenir la transfusión de sangre incompatible y
proveen al paciente el máximo de seguridad y beneficio.

Cuestionario

1. ¿Qué significa una prueba cruzada positiva y una negativa?

Positiva – Sin aglutinación – Sangre compatible
Negativa – Se presenta aglutinación – Sangre incompatible
2. ¿Qué factores pueden interferir en los resultados de una prueba cruzada?
La fibrina podría interferir en la lectura de aglutinación y así darnos resultados
erróneos, de igual manera el mal lavado de eritrocitos podría darnos un exceso
de plasma y suero y así de igual manera obtener resultados erróneos por la
falla en la lectura de aglutinación
3. ¿Qué características debe tener un donador sanguíneo ideal?
Requisitos indispensables para donar sangre:
1. Ayuno mínimo de 6 horas (evite consumir alimentos con grasa)
2. Peso mayor de 60 kg
3. Edad de 18 a 65 años
4. Estar sano
5. No estar menstruando ni lactando (mujeres)
6. No estar tomando medicamento
7. No ser diabético e hipertenso
8. No haber estado en tratamiento de acupuntura, haberse practicado un
tatuaje o perforación en los últimos 12 meses.
9. No presentarse enfermo de gripe, tos, diarrea, absceso dental, etc.
10. No deben donar sangre las personas que hayan tenido más de una pareja
sexual en los últimos 12 meses
11. No haber padecido hepatitis
 12. No haber sido operado en los últimos 6 meses
4. ¿Cuál es el objetivo de utilizar a la albúmina?
Para hacer más fácil y precisa la lectura de aglutinación
5. ¿Porque a las personas con grupo O Rh positivo se les conoce como
donadores universales? ¿Esto es correcto?
El receptor universal es el AB+, porque puede recibir sangre de todos los
grupos. Y el donante universal es el O negativo, y no el positivo, porque, no
presenta ningún antígeno en su membrana y además no tiene el factor Rh, no
existe el riesgo de que haya ningún tipo de reacción con ningún grupo
sanguíneo.