EKSTRAKSI KOMPONEN BIOAKTIF DARI LIMBAH KULIT BUAH KAKAO DAN

PENGARUHNYA TERHADAP AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIMIKROBA

EXTRACTION BIOACTIVE COMPOUND FROM COCOA POD HUSK AND ITS

EFFECT ON ANTIOXIDANT AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY

Sartini 1, M. Natsir Djide2 , Gemini Alam3

Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin, Makassar

ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian ekstraksi komponen bioaktif dari limbah kulit buah kakao dan uji aktivitas
antioksidan dan antimikroba secara in vitro. Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan kondisi optimal
untuk ekstraksi komponen bioaktif yang memiliki aktivitas antioksidan dan antimikroba .
Kulit buah kakao yang digunakan ada 2, yaitu yang segar dan yang telah dikeringkan. Sampel diekstraksi
secara maserasi dengan pelarut aseton-air (7:3) dan etanol 70 %. Uji antioksidan dilakukan dengan metode
DPPH, sedangkan uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi agar .
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kondisi optimal untuk mengekstraksi komponen antioksidan-
antimikroba dari kulit buah kakao adalah menggunakan sampel segar dengan cairan pengekstraksi aseton :
air (7:3). Ekstrak aseton kulit buah kakao segar berpotensi untuk dikembangkan sebagai antioksidan alami
dengan IC50 0,08 mg/l Ekstrak aseton sampel segar juga berpotensi untuk dikembangkan sebagai bahan
antibakteri terhadap Streptococcus mutan.

Kata kunci: Kulit buah kakao, kompenen bioaktif, antioksidan, antibakteria

ABSTRACT
The reseach on extraction bioactive compound of cocoa pod husk waste and antioxidant and antimicrobial
activity assay by in vitro has been done. The aim of research was to get optimum condition to extract their
bioactive compounds which have antioxidant and antibacterial activity.
There were two samples that used, i.e : fresh and dried cocoa pod husk. The samples were extracted by
maceration method using acetone:water (7:3) and ethanol 70 %. Antioxidant assay was done by DPPH
(diphenyl-pycrylhydrazyl) method and antibacterial assay was done by diffusion agar. The result showed
that optimal condition to extract antioxidant-antimicrobial compound using fresh sample with aceton :
water (7:3) as solvent. The acetone extract was potential expanded as nature antioxidant with IC50 0.08
mg/l. The acetone extract of fresh sample was also potential as antibacterial against Streptococcus mutant

Keywords: Cocoa podhusk, bioactive compound, antioxidant, antibacteria

PENDAHULUAN
Tanaman pangan diketahui kaya akan
senyawa-senyawa bioaktif, terutama polifenol,
yang mempunyai khasiat sebagai antioksidan
dan antimikroba. Senyawa-senyawa
antioksidan alami sangat dibutuhkan akhir-
akhir ini untuk mencegah penyakit-penyakit
degeneratif seperti penyakit jantung koroner,
kanker, dll. Senyawa-senyawa antimikroba
demikian pula adanya akibat makin banyaknya
mikroba patogen yang telah resisten dengan
antibiotika yang ada.
Salah satu tanaman di Indonesia yang
berpotensi sebagai antioksidan dan
antimikroba alami adalah tanaman kakao
(Theobroma cacao L.). Biji kakao kaya akan
komponen-komponen senyawa fenolik, antara
lain : katekin, epikatekin , proantosianidin,
asam fenolat, tannin dan flavonoid lainnya.
Biji kakao mempunyai potensi sebagai bahan
antioksidan alami, antara lain : mempunyai
kemampuan untuk memodulasi system
immun, efek kemopreventif untuk pencegahan
penyakit jantung koroner dan kanker (Othman
et al, 2007; Weisburger, 2001; Keen, 2005),
selain itu polifenol kakao bersifat antimikroba
terhadap beberapa bakteri patogen dan bakteri
kariogenik ( Osawa et al, 2000; Bouchers,
2002; Lamuela-Raventos, 2005). Kakao juga
mempunyai kapasitas antioksidan lebih tinggi
dibanding teh dan anggur merah (Lee et al,
2003)
Disamping menghasilkan biji, dalam
proses penanganannya juga menghasilkan
produk ikutan (limbah) berupa kulit buah
kakao sebesar kurang lebih 73,77% dari berat
buah secara keseluruhan. Adanya komponen-
komponen polifenol dalam biji kakao, tidak
menutup kemungkinan juga terdapat dalam
kulit buah kakao dengan khasiat yang sama.
Menurut Figuera et al (1993), kulit buah
kakao mengandung campuran flavonoid atau
tannin terkondensasi atau terpolimerisasi,
seperti antosianidin, katekin,
leukoantosianidin yang kadang-kadang terikat
dengan glukosa. Tannin yang terikat dengan
gula umumnya mudah larut dalam pelarut
hidroalkohol, sedangkan tannin terkondensasi
atau tannin lebih mudah terekstraksi dengan
pelarut aseton 70 % (anonim, 2007).
Permasalahannya adalah bagaimana
kondisi ekstraksi yang paling optimal untuk
mengekstraksi komponen antioksidan dan
antibakteri dari limbah kulit buah kakao ?
Untuk itu dalam penelitian ini
dilakukan ekstraksi menggunakan 2 macam
kulit buah kakao (segar dan kering ) dan 2
macam pelarut (etanol 70 % dan campuran
aseton–air (7:3). Uji aktivitas antioksidan
dilakukan dengan metode DPPH dan uji
antibakteri dilakukan dengan metode difusi
agar.
BAHAN DAN METODE
A. BAHAN PENELITIAN
Kulit buah kakao jenis lindak
(Forastero) asal kabupaten Soppeng, 2,2-
diphenyl-2-picrylhydrazyl / DPPH (Sigma), ,
aseton (teknis), etanol (teknis), etanol absolute
(e-Merck), aquadest, Nutrien agar , Muller
Hilton Agar, paper disc (Oxoid), Dimetil
sulfoksida (e-Merck), mikroba uji
Staphylococcus aureus, Streptococcus mutan,
Escherichia coli, Salmonella thyposa (koleksi
laboratorium Mikrobiologi Farmasi UNHAS).
B. METODE KERJA
1. Pengolahan Sampel
Buah kakao yang diambil yang
sudah masak, ditandai dengan mulai
menguningnya buah pada saat dipetik.
Sebelum dilakukan pengolahan, buah yang
sudah dipetik dibiarkan dahulu selama kurang
lebih 5 hari untuk memudahkan lepasnya biji
dari kulit buahnya. Sebagian kulit buah kakao
dalam bentuk segar ditumbuk kasar
menggunakan lumpang batu. Sebagian
dikeringkan di bawah sinar matahari dan
setelah kering ditumbuk kasar.
2. Ekstraksi Kulit buah Kakao secara
maserasi
Masing-masing sampel kulit buah
kakao 1 kg diremaserasi sebanyak 3 kali
menggunakan Aseton : air (7:3) dan etanol 70
% dengan perbandingan sampel- pelarut (1 :
2) untuk sampel basah, dan (1 : 3) untuk
sampel kering.
3. Uji Aktivitas antioksidan
Uji aktivitas antioksidan dilakukan
dengan metode DDPH seperti yang
 dilakukan oleh Othman et al., (2007) yang
dimodifikasi, yaitu :
Dibuat larutan uji dengan konsentrasi
5 mg/ml; 1,25 mg/l; 0,5 mg/l;
0,1 mg/l; dan 0,01 mg/l dalam etanol absolut.
Sebanyak 100 l larutan uji ditambahkan 1,0
ml larutan DPPH 0,4 mM dan etanol hingga 5
ml. Campuran selanjutnya divortex dan
dibiarkan selama 30 menit . Larutan ini
selanjutnya diukur absorbansinya pada
panjang gelombang 517 nm. Dilakukan juga
pengukuenran absorbansi blanko. Hasil
penetapan antioksidan dibandingkan dengan
vitamin C.
Besarnya daya antioksidan dihitung dengan
rumus :
%penghambatan=(Absorbance blanko – Absorbance sampel)x100 %
Absorbance blanko
IC50 dihitung dengan dengan memplot grafik
aktivitas scavenging dengan konsentrasi
ekstrak, yang didefinisikan sebagai total
antioksidan yang dibutuhkan untuk
menurunkan konsentrasi DPPH sampai 50 %.
4. Uji aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan
dengan metode difusi agar , seperti yang
dilakukan oleh Nostro et al (2000) yang
dimodifikasi, yaitu :
Masing-masing ekstrak yang
diperoleh sebanyak 2 g dilarutkan dalam
dimetilsulfooksida (DMSO) hingga 10 ml.
Dari larutan stok dibuat pengenceran
bertingkat dengan konsentrasi 20% ,10%, 5%,
2,5%, 1,25%. Masing-masing larutan uji
dipipet 5 l diteteskan ke paper disc,
kemudian diletakkan di atas media Muller
Hilton Agar yang telah mengandung mikroba
uji 0,1 ml transmitan 25 % atau setara dengan
108 koloni/ml. Setelah itu diinkubasi selama
24 jam suhu 37OC.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah kulit buah kakao segar
dan kulit buah kakao yang telah dikeringkan,
dengan asumsi proses pengeringan dapat
mengubah komposisi polifenolnya sehingga
diharapkan dapat mempengaruhi aktivitas
antimikroba dan antioksidannya.
Cairan pengekstraksi yang digunakan
yaitu etanol 70% yang diasumsikan dapat
mengekstraksi senyawa-senyawa flavonoid
atau tannin yang teikat sebagai glikosida..
Sedangkan pelarut aseton-air (7:3) sangat baik
untuk mengekstraksi tannin
terkondensasi(anonim, 2007).
Pada pengujian aktivitas
antioksidannya digunakan DPPH sebagai
radikal bebas yang memiliki panjang
gelombang maksimum 517 nm.. Aktivitas
penangkap radikal bebas (proton) diketahui
salah satu mekanisme untuk mengukur
aktivitas antioksidan (Othman et al, 2007).
Pada ekstrak dari kulit buah kakao
kering, baik ekstrak etanol maupun ekstrak
aseton tidak memperlihatkan adanya aktivitas
antioksidan Sedangkan pada ekstrak dari kulit
buah kakao segar, baik ekstrak etanol maupun
asetonnya memperlihatkan aktivitas
antioksidan. Tidak adanya aktivitas
antioksidan dari kulit buah kakao yang
dikeringkan, hal ini disebabkan selama
pengeringan komponen-komponen
polifenolnya kemungkinan mengalami
oksidasi oleh enzim polifenol oksidase yang
juga terdapat pada buah kakao. Hasilnya
seperti terlihat pada tabel 1. Sebagai
pembanding digunakan asam askorbat
(vitamin C) yang diketahui mempunyai
aktivitas antioksidan. Hasilnya dapat dilihat
pada tabel 2.
Pada tabel 1 dan gambar 1 terlihat
bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrak
aseton lebih tinggi dibandingkan ekstrak
etanol. Menurut Figuera (1993), kulit buah
kakao mengandung campuran
flavonoid/tannin terkondensasi atau
terpolimerisasi, seperti antosianidin, katekin,
leukoantosianidin yang kadang-kadang terikat
dengan glukosa .
Pelarut aseton-air (7:3) optimal mengekstraksi
tannin terkondensasi (Anonim, 2007).
Dari hasil pengukuran aktivitas antioksidan
menggunakan metode DPPH kemudian
dilakukan perhitungan dengan menggunakan
analisis probit,. Hasil perhitungan
menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan dari
ekstrak aseton (IC50 = 0,08mg/ml) lebih
tinggi dari ekstrak etanol (IC50 = 0,48 mg/ ml)
maupun vitamin C (IC50 = 0,15 mg/ml).
Tabel 1 . Hasil pengukuran absorban Setelah Perlakuan dengan Ekstrak Kulit Buah Kakao segar

Ekstrak aseton Ekstrak etanol

Konsentrasi Aktivitas Aktivitas Pengikatan

(mg/ml) Absorban Pengikatan Absorban DPPH (%)
(A) DPPH (%) (A)
5 0,0970 86,91 0,1474 80,10
1,25 0,1332 82,02 0,2526 65,90
0,5 0,2365 68,08 0,3935 46,88
0,1 0,3530 52,35 0,5700 23,06
0,01 0,5492 25,86 0,6504 12,20
0 (blanko) 0,7408
Replikasi 3 kali

Tabel 2. Hasil Pengukuran Serapan DPPH Setelah Perlakuan dengan Vitamin C

Konsentrasi Absorban (A) Aktivitas Pengikatan DPPH

(mg/ml) (%)
5 0,0225 97,31
2,5 0,0253 96,97
1,25 0,0301 96,40
0,5 0,1533 81,66
0,25 0,1583 81,06
0,1 0,4319 48,32
0,01 0,7517 10,06
0(Blanko) 0,8358
Replikasi 3 kali

100
90
% Pengikatan DPPH

80
70
60
Ekstrak aseton
50
Ekstrak etanol
40
30
20
10
0
0 0.01 0.1 0.5 1.25 5

Konsentrasi Ekstrak

Gambar 1. Efek pengikatan DPPH oleh ekstrak kulit buah kakao pada berbagai konsentrasi
Tabel 3. Hasil pengukuran diameter daerah hambatan (mm) rata-rata dari ekstrak kulit buah kakao terhadap
beberapa bakteri uji.

Konsentrasi ekstrak
Sampel Uji Bakteri Uji ( g/disc)
250 500 1000
Ekstrak Escherichia coli 7,25 7.35 10.25
aseton kulit Salmonella Thyposa 7.15 7.45 9.15
buah kakao Staphylococcus aureus 6.25 7.15 9.15
segar Streptococcus mutan 6.75 7.75 10.20

Ekstrak Escherichia coli - - -

aseton kulit Salmonella Thyposa - - -
buah kakao Staphylococcus aureus - - -
kering Streptococcus mutan - - -

Ekstrak Escherichia coli - - 7.70

etanol kulit Salmonella Thyposa - - 7.65
buah kakao Staphylococcus aureus - - 8.15
segar Streptococcus mutan - - 8.50

Ekstrak Escherichia coli 7.45 7.45 8.15

etanol kulit Salmonella Thyposa 7.55 7.85 8.25
buah kakao Staphylococcus aureus 7.45 7.85 9.15
kering Streptococcus mutan 7.55 8.55 8.95
Keterangan : replikasi 2 kali

Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan
bahwa ekstrak aseton dari kulit buah kakao
kering tidak memberikan aktivitas
antibakteri. Sedangkan pada ekstrak aseton
buah kakao segar memberikan aktivitas
antibakteri mulai pada konsentrasi 5 % (250
µg/disc), 10% (500 µg/disc), dan 20 % (1000
µg/disc ). Sedangkan ekstrak etanol dari
sampel segar mampu menghambat pada
konsentrasi 20 % (1000 µg/disc), Sedangkan
ekstrak etanol sampel kering mampu
menghambat dimulai pada konsentrasi 5 %
(250 µg/disc). Hasil selengkapnya dapat
dilihat pada tabel 3.
Pada tabel 3 terlihat aktivitas
antibakteri dari ekstrak etanol sampel basah
lebih kecil dibanding ekstrak etanol sampel
kering, hal ini mungkin disebabkan oleh
adanya senyawa pektin yang ikut terekstraksi
menggunakan sampel kulit buah kakao segar.
Senyawa pektin dapat terekstraksi pada larutan
etanol di bawah 70 %, sedangkan kadar air
pada sampel segar tidak diketahui. Dari empat
bakteri uji yang digunakan ternyata
Streptococcus mutan yang paling sensitif
terhadap senyawa antibakteri dalam kulit buah
kakao, hal ini sesuai penelitian Pasiga (2006)
dan Matsumoto et al., (2004) bahwa ekstrak
kulit buah kakao mempunyai aktivitas
antibakteri terhadap Streptococcus mutan
secara in vitro maupun in vivo. Bakteri ini
merupakan penyebab terjadinya karies gigi.
KESIMPULAN
1. Kondisi optimal untuk mengekstraksi
komponen antioksidan-
antimikroba dari kulit buah kakao adalah
menggunakan bahan segar
dan dengan cairan pengekstraksi aseton-air
(7:3).
2. Ekstrak aseton kulit buah kakao segar
memiliki aktivitas antioksidan dengan IC50
0,08mg/ ml dan aktivitas antibakteri
terhadap S. Mutan dengan diametr
hambatan 10,2 mm pada konsentrasi 1000
µg per disc.
UCAPAN TERIMA KASIH Pasiga, B., 2006, Diversifikasi Manfaat Kakao
Penulis mengucapkan terimakasih sebagai Komponen Aktif Pasta gigi.
kepada Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Disertasi. . Program Pascasarjana
UNHAS, Makassar.
Depertemen Pendidikan Nasional dan
Weisburger, J. H., 2001, Chemopreventive Effects
Lembaga Penelitian UNHAS yang telah of Cocoa Polyphenols on Chronic
mendanai penelitian ini melalui Proyek Hibah Diseases. Experimental Biology and
Bersaing dengan nomor kontrak Medicine . , 226: 891-897.
131/H4.20/PL.09/2007.

DAFTAR PUSTAKA

Anonim., 2007, Tannin: Chemical Analysis.

Polyphenol flavonoid/tannin analysis. htm
, diakses 14 April 2007
Borchers, A. T., Keen, C. L., 2000, Cocoa and
Chocolate: Composition, Bioavailability,
and Health Implication. Journal of
Medicinal Food., 3(2): 77-105.
Figueira, A., and Janick, J., 1993, New products
from Theobroma cacao: Seed pulp and
pod gum. New crops., New York, 475-
478.
Keen, C. L., Holt, R.R., Oteiza, P., Fraga, C., and
Schmitz, H.H., 2005, Cocoa Antioxidant
and Cardio vascular Health. Am. J. Clin.
Nutrition., 81(1): 298S-303S.
Lamuela-Raventos, R. M., Romero-Perez, A. I.,
Andres-Lacueva, C. and Tornero, A.,
2005, Review: Health Effects of Cocoa
Flavonoids . Food Science and
Technology International ., 11(3): 159-
176
Lee, K.W., Kim,Y.J., Lee, H.J., Lee, C.Y., 2003,
Cocoa has More Phenolic
Phytochemical and Higher Antioxidant
Capacity than Teas and Red Wine.
J.Agric. Food. Chem., 51(25) : 7292-
7295
Nostro, A, Germano, M.P. , D'Angelo, V. ,Arino,
A., and Cannatelli, M.A.,2000 ,Extraction
Methods And Bioautography For
Evaluation Of Medicinal Plant
Antimicrobial Activity. Letters in Applied
Microbiology., 30, 379-384
Osawal, K., Miyazakil, K. , Shimura, I., Okuda,
J., Matsumoto, M and Ooshima, T., 2001,
Identification of Cariostatic Substances in
the Cacao Bean Husk: Their Anti-
glucosyltransferase and Antibacterial
Activities. Dent. Res., 80(11):2000-2004
Othman, A., Ismail, A., Ghani, N.A., Adenan, I.,
2007, Antioxidant Capacity and Phenolic
Content of Cocoa Bean. Food
Chemistry.,1523-1530.